基于干旱环境中大鼠泪腺差异表达蛋白的筛选初探“燥伤清窍”机理

目的通过筛选干旱环境中大鼠泪腺的差异表达蛋白,探讨与“燥伤清窍”病机相关的蛋白质或信号通路,从分子水平认识外燥证的本质。方法20只SD雌鼠随机均分为2组,分别为在常温常湿环境中饲养的对照组(CG),以及采用人工气候箱和砂尘试验箱模拟干旱环境(西北燥证的主要病因)干预的干旱风沙组(DD),均饲养48 d。随后摘取大鼠左侧泪腺,采用串联质谱标签(TMT)技术筛选差异表达蛋白,并进行生物信息分析。结果(1)差异表达蛋白:筛选出DD组大鼠泪腺中差异表达蛋白共505个,其中上调蛋白有210个,下调蛋白有295个。(2)基因本论(GO)功能注释:差异表达蛋白主要影响细胞过程和单生物过程,主要定位在细胞和细胞器,分子层面主要影响蛋白的结合和催化活性。(3)GO富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集:上调蛋白多与免疫功能相关,主要富集在抗原加工呈递通路;下调蛋白多与离子的转运和肌肉的收缩相关,主要富集在与氧化、磷酸化相关的通路。(4)候选靶标蛋白:S100钙结合蛋白A9(S100A9)、α-1-酸性糖蛋白(AGP1)、趋化因子C-X3-C基元配体1(CX3CL1)、髓过氧化物酶(MPO)、泛醇-细胞色素C还原酶铰链蛋白(UQCRH)、T-激肽原1(KNT1)、蛋白酶体亚基β-8(PSMB8)、前列腺素D合酶(PGDS)、免疫球蛋白G(IgG)、热休克蛋白27(HSP27)、血清转铁蛋白(TF)、酪蛋白激酶Ⅱα'亚基(CSNK2A2)、泛素羧基末端水解酶L3(UCHL3)为探索“燥伤清窍”微观机制的候选靶标蛋白。结论基于眼部症状,或可立足免疫功能(尤指炎症反应与变态反应)和细胞凋亡,选择相应的信号通路探索“燥伤清窍”的微观机制。

干旱环境对大鼠颌下腺组织形态及Lyz、DB-2、iL-10和AQP-5表达的影响

目的基于干燥和干旱风沙环境影响健康大鼠颌下腺Lyz、DB-2、iL-10、AQP-5表达及其组织形态,从燥邪微观致病表现探索“燥性干涩”的机制。方法50只SPF级SD雌鼠按体质量随机分组,正常对照组(NC)饲养在常温常湿环境,干燥组QZ-S和QZ-H饲养在干燥环境(模拟秋令燥邪),干旱风沙组FZ-S和FZ-H饲养在干旱风沙环境(模拟方域燥邪),干预24d或48d后采集颌下腺制备标本,HE染色或免疫组化法染色后观察组织形态、分析蛋白表达。结果①干燥组和干旱风沙组大鼠颌下腺中浆液腺细胞胞质、胞核碱性染色加深,胞核分布不均匀,腺泡略萎缩,颗粒曲管上皮细胞出现空泡、破裂;QZ-H组和FZ-H组大鼠颌下腺小叶间导管内嗜酸性分泌物增加,颗粒曲管中嗜酸性颗粒明显增多,仅后者腺小叶中散见血细胞和单核巨噬细胞,腺小叶分泌物中出现未完全崩解的脱落细胞;②大鼠颌下腺Lyz表达NC组高于QZ-S组(P<0.05),DB-2表达NC组高于FZ-H组(P<0.05)。结论颌下腺浆液性腺泡轻度萎缩、Lyz和DB-2表达下调是“燥性干涩”的微观机制之一。