魔芋中神经酰胺类物质的分离提取和分析

目的:从魔芋精粉中提取了一种神经酰胺类物质(Ceramide,Cer)并对其结构进行了分析。方法:采用索氏提取法以乙醇(95%)为溶剂从魔芋精粉中提取神经酰胺类物质,进而用硅胶柱层析分离2次,再经二次重结晶纯化,得到白色粉末状物质。使用高效液相色谱(HPLC)及红外光谱(IR)对提取化合物进行了检测分析,并与C2-Cer(Sigma公司购买,纯度为98%)进行了对照分析。结果:分析表明从魔芋粉中提取的化合物为神经酰胺类物质。以不同浓度的C2-Cer作标准工作曲线,测定魔芋粉中神经酰胺类物质含量为0.026%(g/g)。结论:魔芋粉中含有神经酰胺类物质,并且含量较高,进一步揭示了魔芋的应用价值。

魔芋精粉中二氧化硫残留量的几种测定方法比较

[目的]比较魔芋精粉中二氧化硫(SO2)残留量测定方法的优缺点。[方法]使用改进的常量蒸馏微量滴定法和盐酸副玫瑰苯胺法,测定了3种不同产地魔芋精粉中的SO2残留量,比较了2种方法的优缺点。[结果]盐酸副玫瑰苯胺法测定的整体结果比常量蒸馏微量滴定法的结果偏大,但差异不显著;测得3种魔芋精粉的SO2残留量分别为云南健晶白芋2.35 g/kg;四川宜宾白芋2.21 g/kg;四川宜宾花芋1.93 g/kg。[结论]2种方法的测定结果没有显著差异,其中常量蒸馏微量滴定法操作简便、实用。

5-氟尿嘧啶诱导肿瘤细胞凋亡的研究

为进一步了解抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-Fu）的作用机制，研究了5-Fu对体外培养的人乳腺癌细胞系（MCF-7）和人宫颈癌细胞系（Hela）这两种肿瘤细胞生长繁殖的影响及有效的诱导肿瘤细胞凋亡的浓度和作用时间。使用Leukostat染色法测定了细胞凋亡的百分率；DNA电泳分析了细胞凋亡出现的特异的DNAladder现象。结果表明，用10～20mmol／L浓度范围的5-Fu作用24h，能够引起肿瘤细胞产生典型的凋亡现象。

小麦粉中神经酰胺类物质的提取及结构分析

从小麦粉中提取纯化了一种神经酰胺类物质,并对其结构进行了分析。实验以小麦粉为材料,首先用索氏提取法以95%乙醇为溶剂进行粗提,粗提物经石油醚萃取、旋转蒸发仪浓缩后,过三次硅胶柱层析提取,再经二次重结晶纯化,得到白色无定型粉末状神经酰胺类物质。使用高效液相色谱/蒸发光散射检测器(HPLC/ELSD)对其进行纯度检测,用红外光谱(IR)和质谱(MS)对其结构进行鉴定。实验结果分析表明该物质为分子量397.3,分子式C24H47NO3的神经酰胺类化合物。

大连湾牡蛎蛋白的分离提取及分子量测定

以大连湾牡蛎为实验材料.首先采用冰醋酸粗提法提取牡蛎蛋白,然后用葡聚糖凝胶(Sephadex-G100)进行柱层析分离,SDS—聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离蛋白,Kodak凝胶成像分析仪分析及测定分子量.结果显示大连湾牡蛎中含有分子量为55kd的牡蛎特征蛋白,同时分离出其它4种蛋白质,分子量介于33.0~63.4kd之间.

注重内容的整合与更新 加强专业课程建设与改革——动物细胞培养技术课程建设与教学改革初探

教学的基本单元是一门课程的教与学，是培养学生知识、能力、素质的重要载体。因此，教师如何能够充分运用这一载体非常重要。我们对一门课程的建设与教学改革首先应从精选教学内容和优化课程结构方面着手。

多肽型阳离子脂质体的研究进展

多肽型阳离子脂质体作为一种重要的非病毒基因载体,克服了其他阳离子脂质体转染效率低、具有一定细胞毒性的缺点,在基因转运方面具有广阔的应用前景。在近年来多肽型阳离子脂质体研究的基础上,论述了多肽型阳离子脂质体在类脂的结构设计、脂质体制备及其在基因转运方面应用的研究现状,展望了多肽型阳离子脂质体的发展方向。

阳离子脂质体基因载体的细胞转染研究

研究阳离子脂质体在不同细胞中的转染效率及毒性。首先采用DNA延滞实验研究Lipofectamine2000、DOTAP转染试剂与DNA的结合能力。然后选用绿色荧光蛋白的质粒pGFP-N2作为报告基因模型和转染试剂制成复合物后转染Hela7、721、HT29细胞,比较多种因素对转染的影响。最后使用MTT比色法分析Lipofectamine2000、DOTAP转染试剂对细胞的毒性。随着复合物中转染试剂比例的增加,Lipofectamine2000、DOTAP与DNA结合能力逐渐增强。Lipofectamine2000在Hela细胞转染最高效率约72%;在7721、HT29细胞转染效率较低,DOTAP在3种细胞的转染效率都很低;在转染效率最高时2种转染试剂的细胞存活率均在90%以上。对商品化的转染试剂研究和讨论以期为阳离子类脂非病毒载体的研究提供参考。

现代生物技术课程教学方法改革探索与实践

在现代生物技术课程教学方法改革中,进行了启发式、互动式、研讨式教学,调动学生的积极性;利用现代化信息技术和教学工具,形象生动地进行教学;紧跟学科发展前沿,丰富课堂教学内容;结合教师科研成果,运用实例引导学生学习;加强渗透式双语教学的应用,适应国际化的需求。在实施过程中,取得了较好的效果。

CS-g-PEI的均相制备及在基因治疗中的应用

目的采用绿色溶剂离子液体合成不同接枝率的非病毒基因载体壳聚糖接枝聚乙烯亚胺(CS-gPEI),获得高效低毒的壳聚糖基非病毒基因治疗载体。方法以离子液体1-丁基-3-甲基咪唑氯盐([BMIM]Cl)为反应介质,羰基二咪唑(CDI)为键合试剂,均相合成壳聚糖(CS)接枝聚乙烯亚胺(PEI),得到不同接枝率的壳聚糖接枝聚乙烯亚胺共聚物,采用红外光谱对接枝共聚物进行了结构表征。在人脑癌细胞(Hep-2)中采用绿色荧光蛋白(GFP-N2)和MTT法对其基因转染性能和细胞毒性进行体外评价。结果离子液体中均相合成的CS-g-PEI具有高的基因转染效率和低的细胞毒性。结论合成的CS-g-PEI是一种高效低毒的基因转运载体,具有临床应用的潜力。

核-壳型脂质体基因载体的研究进展

脂质体作为一种重要的非病毒基因载体,在核酸和药物转运方面有着巨大的优势和潜力。近年来脂质体基因载体的研究基础上,主要介绍了脂质体-聚阳离子-DNA复合载体(LPD)和脂质体-磷酸钙纳米粒子复合载体(LCP)两种核-壳型脂质体基因载体,展望了核-壳型脂质体基因载体的发展方向及其在基因治疗领域的应用前景。

二肽Fmoc-L-Lys(Boc)-Gly-OH的合成及结构表征

研究多肽对人体的生理作用,可以提供许多预防和治疗人类疾病的有效方法。由于合成多肽的原料昂贵,且产率低,不易提纯,因此有必要对多肽的合成方法进行不断的简化和改进。选择赖氨酸、甘氨酸为主要研究对象,用二碳酸二叔丁酯(Boc2O)、9-芴甲氧羰基琥珀酰亚胺(Fmoc-OSu)分别保护赖氨酸的ε-氨基和α-氨基,以水-丙酮为反应体系,制得N-9-芴甲氧羰基-N-叔丁氧基羰基-L-赖氨酸(Fmoc-L-Lys(Boc)-OH)。然后采用HATU为缩合剂活化Fmoc-L-Lys(Boc)-OH结构中的羧基,生成活泼酯,以乙腈-水溶液为反应体系,50-60℃回流反应5h,与甘氨酸缩合制备Fmoc-L-Lys(Boc)-Gly-OH二肽。合成的Fmoc-L-Lys(Boc)-Gly-OH经红外光谱和质谱表征,结构得到验证,为氨基酸保护及多肽合成提供了实验依据和理论参考。

语码转换在现代生物技术双语教学中的应用

在现代生物技术教学过程中,选择适合民族院校的语码转换式双语教学方法,使学生对专业英语学习产生兴趣,在掌握专业基础知识的同时,扩大学生的专业词汇量,提高学生的专业英语能力。

多肽中间体氨基酸活泼酯的合成

多肽合成中,氨基酸的保护及氨基酸活化反应对多肽合成的产率及纯度具有重要影响,所以对氨基酸保护及活化反应进行研究,是多肤合成的一个重要环节。采用四氢呋喃作为反应溶剂,以9-芴甲氧羰基为保护基团保护组氨酸氨基,以2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N、N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)为缩合试剂,活化组氨酸形成活泼酯。建立了芴甲氧羰基-组氨酸活泼酯的合成方法,优化了氨基酸活泼酯的制备条件。结果表明:溶剂和活化试剂对活泼酯的产率影响显著;活泼酯制备的最佳反应条件为n(Fmoc-His):n(HATU)=1:1.1,溶剂为THF,反应温度为25℃,产率为68.20%。此方法节省原料,并大大简化了实验操作。

壳聚糖脂质体复合载体的核酸递送

目的构建一种由脂质体Lipofectamine2000、低分子质量壳聚糖、pDNA组成的三元新型复合载体用于核酸递送能力研究。方法复合物形态采用原子力显微镜轻敲模式下表征、载体与核酸结合能力采用凝胶延滞法表征,Hep-2细胞报告基因表达利用倒置荧光显微镜检测。细胞毒性研究采用3-甲基-2-噻唑硫酮(MTT)法。结果复合载体与pDNA结合能力强,可完全延滞pDNA。脂质体/壳聚糖/pDNA复合载体形态呈现出未完全压缩的球形,短棒状和不规则的聚集块。新型载体转染Hep-2细胞提高了绿色荧光蛋白报告基因的表达效率。与脂质体对照载体比较,基因转染效率提高了2～4倍,对照壳聚糖载体无明显转染效果。细胞毒性表明壳聚糖降低了脂质体的细胞毒性。结论基于脂质体的壳聚糖新型复合载体具有核酸递送潜力。

基因转运载体的原子力显微镜研究

通过原子力显微镜观测阳离子脂质体及其与DNA复合物的结构。将一定量的阳离子脂质体以及阳离子脂质体/DAN复合物滴加到新解理的云母片上,干燥后用原子力显微镜观测。结果表明,阳离子脂质体在云母片上形成的颗粒为球形或椭圆形,粒径分布较为均匀;阳离子脂质体/DNA复合物在云母片上的颗粒形状不规则,粒径分布不均且比空白脂质体的粒径大。通过原子力显微镜可以快速有效地观测脂质体以及脂质体/DNA复合物的粒径、表面形态等,为分析脂质体的物理化学性质与基因转运效率的关系提供了一种研究方法。

脂质体递药系统的靶向修饰

作为药物递送载体,脂质体(LPs)由于免疫原性低、稳定性好、毒性低和成本低而被认为是有前途的纳米药物递送系统。然而,LPs的靶向递送效果并不理想,往往会对正常的机体细胞造成伤害,因此,如何优化LPs药物,使其具有靶向性仍然是当前研究的重点。本文结合近年来国内外相关研究进展,重点介绍了多肽、抗体、糖类、配体,以及核酸适配体等靶向修饰物对LPs功能的影响,并归纳总结了各种靶向修饰目前存在的优势与挑战,以期对LPs给药系统的进一步研究提供科学参考及新药研发提供理论依据。

细胞种类对阳离子脂质体介导基因转染的影响

[目的]为非病毒载体阳离子类脂的研究提供参考。[方法]以阳离子脂质体Lipofectamine 2000为载体,通过DNA延滞试验和质粒转染试验,研究Lipofectamine 2000对不同细胞(HeLa cell、B16 cell、MCF-7 cell和SW-480 cell)的转染效率,将其与其他转染试剂Sofast和DOTAP进行比较,并探讨细胞种类对Lipofectamine 2000转染效率的影响。[结果]随着复合物中转染试剂比例的增加,DNA延滞作用明显增强。当Lipofectamine 2000与DNA的质量比增至51:时,仅有小部分DNA移出原点。Lipofectamine 2000对SW-480cell的转染效率明显高于其他3种细胞。Lipofectamine 2000对B16细胞株的转染效果要优于Sofast,而Sofast与DOTAP的转染效果相当。[结论]Lipofectamine 2000对多数细胞具有较高的转染效率,并不适合所有类型的细胞。

DDCTMA阳离子脂质体对人喉癌细胞的毒性作用机制

目的研究DDCTMA阳离子脂质体对体外培养的人喉癌细胞系（Hep-2）细胞增殖和凋亡作用影响,进而分析其细胞毒性作用机制。方法采用MTT法检测不同质量浓度DDCTMA阳离子脂质体作用下的细胞存活率,据此选择适当质量浓度的DDCTMA阳离子脂质体分别处理Hep-2细胞,使用活细胞/凋亡细胞/坏死细胞鉴别试剂盒、Hoechst 33258检测法及TUNEL原位测定法进行凋亡细胞形态学鉴定。定量检测酶caspase-3和caspase-9的酶活力变化。结果随着DDCTMA阳离子脂质体质量浓度的增大,细胞存活率逐渐下降;活细胞减少,坏死和凋亡细胞数量都增加;对细胞核的染色能观察到凋亡细胞数量呈倍数增加,呈现浓度依赖性;caspase-3和caspase-9的酶活力也有相应增高。结论 DDCTMA阳离子脂质体对Hep-2细胞的毒性作用表现是：DDCTMA阳离子脂质体质量浓度在9～48mg·L^-1内主要诱导部分细胞凋亡,质量浓度超过48mg·L^-1主要引起细胞坏死。

壳聚糖/Fe_3O_4复合纳米颗粒的制备

以柠檬酸为改性剂,制备水基Fe3O4磁性纳米粒子,基于静电自组装作用,使壳聚糖分子在水溶液中包覆Fe3O4纳米晶粒,获得壳聚糖/Fe3O4复合纳米颗粒液溶胶。扫描电子显微镜(SEM)分析结果表明,复合纳米颗粒平均粒径为49.0 nm,标准差为11.0 nm。X射线衍射(XRD)和红外光谱(FT-IR)分析结果表明,复合纳米颗粒由壳聚糖分子和Fe3O4晶体粒子构成。