通窍定眩饮调节糖酵解改善脑缺血大鼠血管新生的机制研究

目的探究通窍定眩饮对脑缺血后血管新生的分子机制,并基于糖酵解通路探讨其可能的作用机制。方法共40只大鼠,随机选取6只为假手术组,余采用大鼠大脑中动脉阻塞法建立脑缺血模型。24只造模成功的大鼠用随机分为模型组、丁苯酞组、联合用药组、通窍定眩饮组,每组6只。假手术组、模型组予蒸馏水10 mL/(kg·d)灌胃,丁苯酞组予丁苯酞54 mg/(kg·d)灌胃,联合用药组予丁苯酞54 mg/(kg·d)和中药药液14.6 g/(kg·d)灌胃,通窍定眩饮组予中药药液14.6 g/(kg·d)灌胃。干预3 d后采用Zea-Longa法观察大鼠的神经功能评分;TTC染色法确定脑损伤范围;ELISA法检测乳酸、腺苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)和葡萄糖含量,免疫组化法检测葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter 1,GLUT1)、己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)、乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)蛋白的表达以及微血管密度变化。结果与假手术相比,模型组有明显神经功能缺损,脑梗死体积比明显增加(P<0.05),乳酸含量增加(P<0.05),ATP和葡萄糖含量减少(P<0.05),GLUT1、HK2、LDHA蛋白的表达增加(P<0.05),微血管密度增加(P<0.05)。与模型组相比,丁苯酞组神经功能缺损程度及脑梗死体积比明显降低(P<0.05),乳酸、ATP和葡萄糖含量无显著变化(P>0.05),GLUT1、HK2、LDHA蛋白的表达无显著变化(P>0.05),微血管密度增加(P<0.05);联合用药组和通窍定眩饮组神经功能缺损程度及脑梗死体积比明显降低(P<0.05),乳酸、ATP和葡萄糖含量均增加(P<0.05),GLUT1、HK2、LDHA蛋白的表达及微血管密度显著增加(P<0.05)。与联合用药组相比,丁苯酞组脑梗死体积比增加(P<0.05),乳酸、ATP和葡萄糖含量减少(P<0.05),GLUT1、HK2、LDHA蛋白的表达降低(P<0.05),微血管密度降低(P<0.05);通窍定眩饮组脑梗死体积比增加(P<0.05),乳酸、ATP和葡萄糖含量无显著变化(P>0.05),GLUT1、HK2、LDHA蛋白的表达无显著变化(P>0.05),微血管密度降低(P<0.05)。结论通窍定眩饮对脑缺血模型具有一定的神经保护作用,其机制可能与调控糖酵解通路促进血管新生有关。

晕清降压方介导JAK2/STAT3通路改善肥胖性高血压瘦素抵抗的实验研究

目的探讨晕清降压方对痰瘀互结型肥胖性高血压模型大鼠降压减重的影响及可能作用机制。方法60只SD雄性大鼠随机选取8只为正常对照组,其余大鼠采用小剂量链脲佐菌素+高盐高脂饲料喂养+慢性束缚应激构建痰瘀互结型肥胖性高血压模型,按随机数字表法将造模成功的40只大鼠分为模型组、替米沙坦组、晕清降压方低、中、高剂量组,每组8只。晕清降压方低、中、高剂量组分别予晕清降压方10、20、40 g/(kg•d)灌胃;替米沙坦组予替米沙坦片3.5 mg/(kg•d)灌胃;正常对照组与模型组予蒸馏水10 mL/(kg•d)灌胃,每日1次,连续给药4周。测定各组血压、体质量;酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清瘦素(leptin,Lep)、血清血管紧张素II(angiotensinII,AngII)水平。蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测下丘脑组织磷酸化Janus激酶2(phosphorylated Janus kinase 2,p-JAK2)/Janus激酶2(Janus kinase 2,JAK2)、磷酸化细胞信号传导与转录活化因子3(phosphorylated signal transducers and activators of transcription factor 3,p-STAT3)/细胞信号传导与转录活化因子3(signal transducers and activators of transcription factor 3,STAT3)、细胞因子信号传导抑制蛋白3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)蛋白表达;实时PCR法检测下丘脑组织血管紧张素II受体(angiotensin type 1 receptor,AT1R)、瘦素受体(leptin receptor,LepR)mRNA表达水平。免疫组化检测大鼠下丘脑LepR、AT1R蛋白表达水平。结果(1)与正常对照组比较,模型组体质量、血压显著升高(P<0.05);血清Lep、AngII含量显著升高(P<0.05);Western Blot显示p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白表达显著下降(P<0.05),SOCS3蛋白表达显著升高(P<0.05);实时PCR与免疫组化均显示LepR的表达下降(P<0.05),AT1R表达升高(P<0.05)。(2)与模型组比较,替米沙坦组体质量、血压均降低(P<0.05),p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、SOCS3无统计学差异(P>0.05),实时PCR与免疫组化显示LepR表达无统计学差异(P>0.05),AT1R表达下降(P<0.05);晕清降压方低、中、高剂量组体质量、血压均降低(P<0.05),Lep、AngII血清含量水平降低(P<0.05);p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白表达升高,SOCS3蛋白表达下降(P<0.05);实时PCR与免疫组化显示LepR的表达升高(P<0.05),AT1R表达下降(P<0.05),且改善程度与中药浓度呈正相关。(3)与替米沙坦组比较,晕清降压方低、中、高剂量组体质量降低(P<0.05),晕清降压方高剂量组降压效果无明显差异(P>0.05);晕清降压方低剂量组Lep升高(P<0.05),晕清降压方高剂量组Lep降低(P<0.05),晕清降压方中剂量组Lep无统计学差异(P>0.05);晕清降压方低、中剂量组AngII升高(P<0.05),晕清降压方高剂量组AngII无统计学差异(P>0.05)。Western Blot显示晕清降压方低、中、高剂量组p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白表达显著升高(P<0.05),SOCS3蛋白表达降低(P<0.05),实时PCR与免疫组化显示晕清降压方低、中、高剂量组LepR均升高(P<0.05),而晕清降压方高剂量组AT1R无显著差异(P>0.05)。结论晕清降压方可减轻痰瘀互结型肥胖性高血压模型大鼠体质量、降低血压,其机制可能通过调节JAK2/STAT3信号通路,与降低血管紧张素II水平、改善下丘脑瘦素抵抗有关。