PersonGen^(TM)技术和CIK细胞培养方法对T细胞扩增与活化效果的比较

目的:探讨基于第一/第二刺激信号原理联合IL-15的的T淋巴细胞扩增技术(PersonGenTM)和细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞培养扩增方案对T细胞扩增和活化的效果。方法:分离8名健康人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),分别采用CIK细胞扩增技术(CIK组)、PersonGenTM扩增技术(PersonGenTM组)及两种技术的联合应用(C+P组)刺激PBMC增殖,应用细胞计数法和流式细胞术比较T细胞的扩增效率及T细胞亚群比例,并以人白血病K562细胞及骨髓瘤RPMI 8226细胞为靶细胞检测扩增后T细胞的杀伤活性。结果:经过3周培养后,CIK、PersonGenTM和C+P 3组T细胞扩增倍数分别为(254±56)、(863±218)和(793.3±395)倍。其中CD3+细胞所占比例分别为(51.61±14.95)%、(99.21±0.79)%和(96.14±5.16)%;CD3+CD4+在CIK组细胞扩增了近5倍,C+P组与PersonGenTM组均扩增近160倍;CD3+CD8+细胞在CIK组扩增了近500倍,C+P组和PersonGenTM组扩增达千倍;CD3+CD56+NKT细胞在CIK组扩增700多倍,其他两组达千倍。杀伤实验结果显示,当E∶T为5∶1时,3组细胞对K562杀伤率为(45.53±19.16)%、(36.53±10.6)%和(53.17±5.83)%,对RPMI 8226杀伤率为(41.23±12.5)%、(38.83±4.3)%和(45.73±7.48)%。结论:Person Gen TM扩增技术获得的T细胞数量多、纯度高,其中CD3+CD8+和CD3+CD56+NKT细胞比例较高,其对K562和RPMI 8226肿瘤细胞的杀伤效果相似于CIK细胞扩增方案获得的T细胞。

NEK2在肝细胞癌中的表达及对增殖转移能力的影响

目的检测NEK2在肝癌中的表达并探讨其对肝癌细胞增殖转移能力的影响。方法收集肝癌及其配对的癌旁组织,分别采用qRT-PCR和Western blot检测NEK2在mRNA和蛋白水平的表达。利用公开的GEPIA数据库分析NEK2与肝癌预后的关系。通过慢病毒包装构建NEK2过表达和干扰的稳转细胞株,采用CCK-8法检测NEK2对肝癌细胞增殖功能的影响,transwell小室法检测NEK2对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。GEPIA数据库分析NEK2与上皮细胞-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子的关系。结果在mRNA和蛋白水平,NEK2的表达均高于其癌旁组织(P<0.05)。GEPIA数据库显示在NEK2相对高表达的肝癌患者中总体生存率(overall survival,OS)及无病生存率(disease-freesurvival,DFS)较差(P<0.05)。体外实验证实过表达NEK2能够促进肝癌细胞的增殖及迁移侵袭功能;相反,干扰NEK2的表达能够抑制肝癌细胞的增殖及迁移侵袭功能。GEPIA数据库显示NEK2与Twist1、Vim、FN1、TJP1、TGFB1、CDH1、CD44、JUP正相关。结论NEK2在肝癌中表达增加,促进肝癌细胞恶性生物学行为,且与EMT表型有关,在评估肝癌患者预后方面具有一定的意义。

CTLA-4和PD-1信号通路在实体瘤治疗中的研究进展

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen 4,CTLA-4)和程序性死亡受体1(programmed death 1,PD-1)免疫检查点在T细胞免疫反应中起负性调节作用。通过对这些靶点的抑制,可增强对免疫系统的激活,为黑色素瘤、非小细胞肺癌等提供新的免疫治疗途径。CTLA-4和PD-1信号通路在免疫反应及抗肿瘤中机制有所不同,针对这两条信号通路的免疫检查点抑制剂也具有不同的效应。现将综述CTLA-4和PD-1信号通路的作用机制及相应靶点阻断剂在实体肿瘤免疫治疗中的应用及研究进展。