汉防己甲素干预HIF-1α/PD-1/PD-L1轴抑制口腔鳞癌侵袭潜能的机制研究

目的探讨汉防己甲素(tetrandrine,TET)对口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞侵袭潜能的影响及其相关机制。方法将OSCC细胞随机分为4组:对照组(不加药物处理)、低剂量组(10μmol/L TET)、中剂量组(20μmol/L TET)、高剂量组(30μmol/L TET)。采用MTT法、划痕实验和Transwell实验分别测定各组细胞的活力、迁移及侵袭能力。对OSCC细胞分别转染缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、程序性细胞死亡蛋白1(programmed cell death protein 1,PD-1)及程序性细胞死亡蛋白1配体(programmed cell death ligand 1,PD-L1)模拟物及抑制剂,均连续转染24 h。采用RT-qPCR检测正常口腔上皮细胞、OSCC细胞以及转染HIF-1α、PD-1、PD-L1模拟物及抑制剂OSCC细胞中HIF-1α、PD-1、PD-L1 mRNA表达水平。通过Western blot检测各组细胞中纤维连接蛋白(Fibronectin)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、HIF-1α、PD-1以及PD-L1蛋白表达水平。结果与对照组相比,低、中、高剂量组细胞活力、迁移及侵袭能力均被显著抑制(P<0.05),HIF-1α、PD-1、PD-L1 mRNA显著上调(P<0.05),Fibronectin、Vimentin、HIF-1α、PD-1、PD-L1蛋白水平随剂量增加逐渐下降(P<0.05),E-cadherin蛋白水平随剂量增加逐渐上升(P<0.05)。转染HIF-1α模拟物细胞的HIF-1α相对表达量及穿膜细胞数高于转染HIF-1α抑制剂细胞(P<0.05),转染PD-1模拟物细胞的PD-1相对表达量及穿膜细胞数高于转染PD-1抑制剂细胞(P<0.05),转染PD-L1模拟物细胞的PD-L1相对表达量及穿膜细胞数高于转染PD-L1抑制剂细胞(P<0.05)。结论TET可能通过抑制HIF-1α/PD-1/PD-L1轴,从而抑制OSCC细胞活力、迁移及侵袭能力,有望作为辅助治疗OSCC的新药。

活血化瘀解毒法对OSF患者GSK-3β、β-连环蛋白水平的影响及作用机制的研究

目的:探究活血化瘀解毒法对口腔黏膜下纤维化(oral submucous fibrosis,OSF)患者GSK-3β、β-连环蛋白(β-catenin)水平的影响及作用机制。方法:选取2018年5月~2019年12月本院收治的120例OSF患者,按照抽签法分为常规治疗组和活血化瘀解毒组各60例。常规治疗组使用曲安奈德注射液治疗,活血化瘀解毒组使用活血化瘀解毒法治疗。观察两组口腔黏膜病损面积、张口度、SFRP1在龈沟液及唾液中的水平、中医症候评分、TGF-β1、IL-6、GSK-3β、β-连环蛋白表达量及临床疗效。结果:治疗后活血化瘀解毒组口腔黏膜病损面积小于常规治疗组(P<0.05),活血化瘀解毒组张口度大于常规治疗组(P<0.05);治疗后活血化瘀解毒组患者SFRP1在龈沟液及唾液中的水平、临床疗效高于常规治疗组(P<0.05);治疗后活血化瘀解毒组中医症候评分、TGF-β1、IL-6、GSK-3β、β-连环蛋白表达量低于常规治疗组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:活血化瘀解毒法可通过作用于Wnt/β-catenin信号通路,调控TGF-β1、IL-6、GSK-3β、β-连环蛋白的表达,改善口腔黏膜下纤维化患者临床症状,缓解机体炎症,减轻疼痛,效果显著。

丹参注射液辅助常规疗法治疗口腔黏膜下纤维性变的效果及对SFRP1水平的影响

目的探讨丹参注射液辅助常规疗法治疗口腔黏膜下纤维性变(OSF)的效果及对分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)的影响。方法选取2016年4月~2018年3月湖南中医药大学第一附属医院收治的68例OSF患者,采用随机数字表法将其分为单药组(34例)和联合组(34例)。单药组给予曲安奈德治疗,联合组给予丹参注射液联合曲安奈德治疗。比较两组患者治疗前后的张口度、口腔黏膜病损面积、视觉模拟评分(VAS)、龈沟液及唾液中SFRP1、血清白细胞介素-6(IL-6)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的水平和临床效果。结果治疗前两组患者张口度、口腔黏膜病损面积、VAS评分、龈沟液及唾液中SFRP1水平、血清IL-6、TGF-β1水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,联合组口腔黏膜病损面积、VAS评分低于单药组,张口度高于单药组(P<0.05);联合组龈沟液及唾液中SFRP1均高于单药组(P<0.05);联合组血清IL-6、TGF-β1均低于单药组(P<0.05);联合组治疗效果显著优于单药组(P<0.05)。结论丹参注射液辅助曲安奈德治疗OSF的效果优于单用曲安奈德,能有效升高龈沟液及唾液中SFRP1水平,延缓口腔黏膜下纤维性变的发展进程。

血清尿激酶型纤溶酶原激活剂、环氧合酶2在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨血清尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)、环氧合酶2(COX⁃2)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)病人病情发生发展的影响。方法选取2017年2—12月湖南中医药大学第一附属医院确诊的OSCC病人90例(OSCC组),健康体检志愿者90例作为对照组,检测两组研究对象的血清uPA、COX⁃2水平,按照不同病理学分级、不同临床分期、是否发生淋巴结转移OSCC病人中的血清uPA、COX⁃2水平差异。结果OSCC组病人血清uPA、COX⁃2水平[(5.44±2.71)mg/L、(27.8±9.3)IU/L]显著的高于对照组[(1.39±0.48)mg/L、(6.5±2.3)IU/L],均差异有统计学意义(t=13.960、21.092,P<0.05);临床分期(Ⅲ期+Ⅳ期)、发生淋巴结转移的OSCC组病人血清uPA水平[(7.06±2.26)mg/L、(6.49±2.28)mg/L]显著的高于临床分期(Ⅰ期+Ⅱ期)、未发生淋巴结转移的OSCC组病人[(4.20±2.56)mg/L、(4.67±2.55)mg/L],均差异有统计学意义(t=-5.365、3.525,P<0.05);在不同病理学分化的OSCC病人中,血清uPA水平差异无统计学意义(t=-0.831,P>0.05);临床分期(Ⅲ期+Ⅳ期)、发生淋巴结转移、低分化的OSCC组病人血清COX⁃2水平[(32.5±8.4)IU/L、(33.0±7.3)IU/L、(34.6±8.7)IU/L]显著的高于临床分期(Ⅰ期+Ⅱ期)、未发生淋巴结转移及高中分化的的OSCC组病人[(24.1±7.6)IU/L、(23.2±8.8)IU/L、(23.8±9.0)IU/L],均差异有统计学意义(t=-4.885、5.655、-5.756,P<0.05)。结论OSCC组病人血清uPA、COX⁃2水平较健康对象显著升高,可能对OSCC的侵袭转移起促进作用。

rb-bFGF联合利多卡因治疗儿童复发性口腔溃疡的效果及对患儿Treg细胞的影响

目的观察重组牛碱性成纤维细胞生长因子(rb-bFGF)联合利多卡因治疗儿童复发性口腔溃疡的效果及对CD4^(+)、CD25^(+)、Foxp3^(+)、Treg细胞的影响。方法选取2019年1月—2020年6月湖南中医药大学第一附属医院口腔科诊治复发性口腔溃疡患儿156例,随机数字表法分为利多卡因组和联合用药组,各78例。利多卡因组采用利多卡因治疗,联合用药组在其基础上增加rb-bFGF治疗,2组均治疗7 d。比较2组患儿治疗效果及临床症状缓解时间,溃疡面积、个数,VAS评分,Treg细胞因子、炎性因子水平及不良反应。结果联合用药组治疗总有效率为98.72%,高于利多卡因组的89.74%(χ2/P=5.778/0.016);疼痛消失、溃疡愈合、进食改善时间明显短于利多卡因组(t/P=9.078/0.000、8.721/0.000、8.104/0.000);治疗7 d后,联合用药组溃疡面积小于利多卡因组(t/P=13.320/0.000),溃疡个数少于利多卡因组(t/P=12.840/0.000),VAS评分、TNF-α、IL-8水平低于利多卡因组(t/P=16.780/0.000、6.237/0.000、5.274/0.000);联合用药组Treg细胞因子CD3+、CD4+、CD8+、NKT、IL-2、IL-4水平高于利多卡因组(t/P=2.892/0.004、3.095/0.000、3.654/0.000、6.499/0.000、2.896/0.000、5.606/0.000);联合用药组不良反应发生率高于利多卡因组,但差异无统计学意义(χ2/P=1.346/0.246)。结论重组牛碱性成纤维细胞生长因子联合利多卡因治疗儿童复发性口腔溃疡可有效促进溃疡恢复,缓解临床症状,减轻疼痛感和机体炎性反应,增强免疫功能,效果显著。

利咽解毒方加减对口腔黏膜下纤维化患者CCR2、TLR2水平的影响

目的探究利咽解毒方加减对口腔黏膜下纤维化患者趋化因子CCR2、Toll样受体2(TLR2)表达的影响。方法选取2019年3月至2020年3月于湖南中医药大学第一附属医院接受治疗的口腔黏膜下纤维化患者114例,随机分为常规治疗组、利咽解毒方组,每组57例,常规治疗组患者使用西药进行治疗,利咽解毒方组在常规治疗组治疗基础上使用利咽解毒方加减进行治疗。对比两组患者张口度、病变面积、中医证候评分,免疫透射比浊法检测GSH-Px、LPO、MDA水平,酶联免疫吸附实验法检测hsCRP、IL-17、TGF-β1水平,检测两组患者血液流变学指标血浆黏度(PV)、纤维蛋白原(FIB)、高切全血黏度(HS),Western blot法检测CCR2、TLR2表达,对比两组治疗有效率。结果治疗后,与常规治疗组相比,利咽解毒方组张口度较高,病变面积较小,中医证候评分较低(P<0.05),且两组较治疗前均有改善。治疗后,与常规治疗组相比,利咽解毒方组GSH-Px水平较高,LPO、MDA、hs-CRP、IL-17、TGF-β1、CCR2、TLR2及血液流变学指标PV、FIB、HS水平较低(P<0.05)。与常规治疗组相比,利咽解毒方组患者治疗总有效率较高(P<0.05)。与治疗前比较,两组治疗后上述指标均得到改善(P<0.05)。结论利咽解毒方加减可使口腔黏膜下纤维化患者张口度受限状况明显缓解,病变面积缩小,炎症反应、氧化应激损伤明显减轻,血液流变学明显改善,CCR2、TLR2表达下调,治疗效果显著。

FLG、分泌型卷曲相关蛋白1、转化生长因子β1在口腔黏膜下纤维化患者中的表达

目的 探讨丝聚蛋白(filaggrin, FLG)、分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled-related protein-1,SFRP1)、转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)在口腔黏膜下纤维化(oral submucous fibrosis,OSF)患者中的表达。方法 选取OSF患者70例,依据病理学分为OSF早期组、中期组、晚期组,另选取同时段健康人群27例,作为正常组。对四组研究对象FLG、SFRP1、TGF-β1表达水平进行检测,使用免疫组化SP法检测FLG水平;使用酶联免疫吸附法检测SFRP1水平;使用地高辛标记TGF-β1 DNA探针检测TGF-β1表达水平。分析上述指标在OSF中的相关性。对分析中具有统计学意义的指标进行多指标Logistics回归分析。结果OSF早期组患者FLG水平高于正常组,OSF中期组患者FLG水平高于正常组、OSF早期组,OSF晚期组患者FLG水平高于其他三组(P<0.05)。OSF早期组患者SFRP1表达高于正常组,OSF中期组患者SFRP1表达高于正常组、OSF早期组,OSF晚期组患者SFRP1表达高于其他三组(P <0.05)。OSF早期组患者TGF-β1水平高于正常组,OSF中期组患者TGF-β1水平高于正常组、OSF早期组,OSF晚期组患者TGF-β1水平高于其他三组(P<0.05)。FLG、分泌型卷曲相关蛋白1、转化生长因子β1之间呈正相关。FLG、分泌型卷曲相关蛋白1、转化生长因子β1水平与OSF严重程度具有相关性。结论 FLG、SFRP1、TGF-β1在OSF患者中均呈异常高表达,并且具有一定的相关性。对FLG、分泌型卷曲相关蛋白1、转化生长因子β1指标进行检测,对OSF严重程度的临床诊断具有一定帮助。

玉泉汤加减对OSF癌变的干预效果及对c-Myc、Cyclin D1、β-catenin表达的影响

目的:研究玉泉汤加减对口腔黏膜下纤维化(oral submucous fibrosis,OSF)癌变的干预效果及对原癌基因(c-Myc)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、β-连环蛋白(β-catenin)表达的影响。方法:本研究选取2018年4月至2019年4月在我院就诊的OSF癌变患者92例,按照完全随机法将患者分为西药组和中药组,每组各46例。西药组给予曲安奈德注射液联合盐酸利多卡因注射,中药组在西药组的基础上加服中药玉泉汤加减,检测和比较两组患者治疗前后β-catenin、纤维蛋白原(FIB)、c-Myc、白介素-6(IL-6)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Cyclin D1表达的变化,治疗效果以及不良反应的发生情况。结果:中药组治疗后的总有效率(91.30%)显著高于西药组(67.39%,P<0.05)。两组患者治疗后β-catenin、FIB、c-Myc、IL-6、TGF-β1及Cyclin D1的表达均低于治疗前(P<0.05);中药组治疗后β-catenin、FIB、c-Myc、IL-6、TGF-β1及Cyclin D1的表达均明显低于西药组(P<0.05)。中药组治疗后开口度比西药组小、灼痛感轻及纤维条索少(P<0.05)。中药组治疗后的不良反应率(2.17%)显著低于西药组(13.04%,P<0.05)。结论:玉泉汤加减治疗OSF癌变的效果及安全性均显著优于曲安奈德注射液联合盐酸利多卡因注射治疗,可能与其能显著下调c-Myc、Cyclin D1、β-catenin的表达,改善患者的临床症状有关。

四妙勇安汤加减对OSF癌变的干预效果及对Wnt通路相关蛋白表达的影响

目的:研究四妙勇安汤加减对口腔黏膜下纤维性变(oral submucous fibrosis,OSF)癌变的干预效果及对Wnt通路相关蛋白表达的影响。方法:选取2017年5月~2018年5月在我院接受治疗的OSF癌变患者80例,按照完全随机法分为中医治疗组和西医治疗组各40例。西医治疗组患者使用丹参注射液加利多卡因注射进行治疗;中医治疗组使用丹参注射液加利多卡因注射联合四妙勇安汤加减进行治疗。比较两组患者转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、白介素-6(nterleukin-6,IL-6)、血浆黏度、纤维蛋白原、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin),统计患者黏膜病损面积、张口度、视觉模拟评分法(visual analogue scale,VAS)评分及治疗效果。结果:两组患者治疗后中医治疗组患者TGF-β1、IL-6水平均低于西医治疗组(P<0.05);治疗后中医治疗组患者黏膜病损面积、VAS评分均低于西医治疗组(P<0.05),中医治疗组患者张口度高于西医治疗组(P<0.05)。治疗后中医治疗组患者血浆黏度、纤维蛋白原均低于西医治疗组(P<0.05);治疗后中医治疗组患者GSK-3β、β-catenin蛋白表达均低于西医治疗组(P<0.05)。治疗后中医治疗组患者总有效率高于西医治疗组(P<0.05)。结论:四妙勇安汤加减治疗OSF癌变效果显著,能调控TGF-β1、IL-6、GSK-3β、β-catenin水平,改善OSF癌变患者的临床症状,总有效率显著,值得推广。

环氧合酶-2、Runt相关转录因子3及生存素在口腔黏膜下纤维性变癌变中的表达

目的研究在口腔黏膜下纤维性变(OSF)癌变中环氧合酶-2(COX-2)、Runt相关转录因子3(RUNX3)、生存素(Survivin)的表达及相关性。方法选取2018年4月至2020年10月在湖南中医药大学第一附属医院接受手术治疗的OSF癌变患者80例作为OSF癌变组,选取同期口腔颌面外科整形手术者40例作为正常对照组。对手术切除的OSF癌变组癌组织和对照组正常口腔黏膜组织,采用免疫组化染色和酶联免疫吸附试验检测其COX-2、RUNX3、Survivin蛋白表达情况及表达量,分析三者表达量与不同口腔组织、癌变不同病理特征的关系以及三者间的相关性。结果与正常对照组相比,OSF癌变组COX-2、Survivin表达量升高,RUNX3表达量降低(P<0.01)。在OSF癌变组中,按高分化、中分化、低分化之序,COX-2、Survivin表达量递升,RUNX3表达量递降(P<0.01);按Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ~Ⅳ期之序,COX-2、Survivin表达量递升,RUNX3表达量递降(P<0.01);与无淋巴结转移相比,有淋巴结转移患者COX-2、Survivin表达量升高,RUNX3表达量降低(P<0.01)。Pearson线性相关性分析结果示,COX-2与Survivin呈正相关(r=0.381,P<0.05),COX-2和Survivin分别与RUNX3呈负相关(r=-0.400,P<0.05;r=-0.373,P<0.05)。结论COX-2、Survivin在OSF癌变组织中高表达,RUNX3低表达,并与OSF癌变分化程度、临床分期及有无淋巴结转移相关。COX-2与RUNX3之间呈负相关,COX-2与Survivin之间呈正相关,RUNX3与Survivin之间呈负相关,三者可能在OSF癌变中起重要的参与作用。