EBV-LMP2基因密码子优化对其蛋白表达及免疫效果的影响

为了研究对EBV LMP2基因按照真核密码子偏好进行密码子优化后 ,对其在真核细胞蛋白表达水平以及引发细胞免疫能力的影响 ,我们对EBV LMP2基因进行了完全改造 ,并构建了改造前后的Psectag/LMP2重组质粒 ,通过瞬时转染COS 7细胞检测其蛋白表达并进行了小鼠的DNA疫苗实验。结果表明 ,改造后的LMP2基因在真核细胞中的表达未见大幅提高 ,同时引发细胞免疫的能力也没有明显上升。结果提示 ,我们单纯按照密码子的偏好来改造基因并不一定能使蛋白的表达量和引发免疫反应的能力提高。

CD25抗体轻链及重链可变区基因的克隆和序列分析

目的 获得抗人ＣＤ２５分子单抗的轻链及重链可变区基因，并进行序列分析。方法 采用ＲＴ－ ＰＣＲ，从ＷｕＴａｃ细胞总ＲＮＡ中扩增出轻链、重链可变区基因，进行克隆并作核苷酸序列分析。结果 构建的ＰＭＤ１８ －Ｔ－ＶＬ和ＰＭＤ１８－Ｔ－ＶＨ重组克隆载体，酶切与预期结果相符。ＶＨ和ＶＬ基因序列与鼠抗体的同源性大于 ８０％。克隆的重链可变区基因长度为３５１ｂｐ，属于鼠重链Ⅲ（Ｃ）亚类。轻链可变区基因长度为３２４ｂｐ，属于鼠轻链 Ⅳ 亚类。结论 本研究采用ＲＴ－ＰＣＴ法扩增出轻链及重链可变区基因，并进行了序列测定和分析，为进一步构建嵌 合抗体以及单链抗体奠定了基础。

从云南省无名热病人和脑炎病人分离到新环状病毒

从云南省西双版纳傣族自治州3家医院采集到发热病人血清106份,脑炎病人脑脊液5份,从中分离到27株病毒。经血清学鉴定,该类病毒与披膜病毒科、黄病毒科、布尼亚病毒科某些病毒的免疫腹水,以及呼肠孤病毒科环病毒属M14、YN187病毒的免疫腹水,都不发生反应。电镜观察病毒为球形无囊膜颗粒,直径65.49±3.11nm,其核衣壳直径为51.79±2.01nm。在感染细胞中常见到大量颗粒状包涵体。负染中可见排列整齐的壳粒结构,显示了典型的环状病毒形态特征。该类病毒对酸和热敏感,抵抗5—Id?和乙醚。27株病毒的基因组均由12条RNA片段组成,其带形均相同,分子量约为0.25×10~6～2.5×10~6道尔顿。该类病毒的带形与文献报道的任何一种环状病毒的RNA带形都不同。病人双份血清中对该环状病毒特异IgM抗体滴度显示4倍以上升高。对该类病毒在分类学上的地位和对无名热和脑炎的病原学意义进行了讨论,目前暂定名为BANNA病毒。

EBV-LMP2多肽激活的特异性CTL抑制同HLA-I亚型的鼻咽癌移植瘤形成

目的:研究异体的EBV-LMP2表位多肽所激活的特异性CTL对具有相同HLA-Ⅰ类分子亚型鼻咽癌细胞(CNE2) 移植瘤的抑制作用,探讨异体间的免疫治疗。方法:先将CNE2细胞接种于Scid鼠背部皮下建立移植瘤模型;然后通过SSP- PCR确定CNE2的HLA-Ⅰ类分子亚型,并选取与CNE2有相同HLA-Ⅰ类分子亚型的外周血淋巴细胞;实验再将3组不同细 胞分别接种于Scid鼠北部皮下,(1)对照组:仅接种CNE2细胞;(2)T细胞组:接种未激活的淋巴细胞与CNE2混合细胞。 (3)CTL组接种经EBV-LNP2多肽激活的特异性CTL与CNE2混合细胞。观察EBV-LMP2多肽激活的CTL对CNE2移植瘤生 长的影响。结果:CNE2于一周左右在Scid鼠背部形成肿块,病理学鉴定为低分化上皮癌;SSP-PCR显示CNE2含有HLA-A11 基因位点;含有相同基因位点的DC负载LMP2-A11多肽所激活的CTL,明显抑制CNE2移植瘤生长。结论:EBV-LMP2多肽 所激活的特异性CTL抑制HLA亚型相同的CNE2移植瘤的形成。

冻融人树突状细胞基因疫苗体外抗肿瘤免疫效应

目的:观察人外周血和人脐血来源的冻融树突状细胞(dendritic cell,DC)基因疫苗的形态、表型及体外诱导的CTL抗肿瘤活性。方法:细胞因子扩增人外周血和脐血DC,分别将EBV-LMP2、HPV16E6基因转染2种来源的冻融DC制备疫苗。动态形态学观察和流式细胞术检测疫苗表面分子表达,体外诱导并测定CTL活性。结果:人外周血和脐血冻融DC疫苗均高表达CD80、CD86和CD83,低表达CD14,高表达CD1a,体外均能诱导高效的CTL活性(P=0·001),并与新鲜DC疫苗差异无统计学意义,P=0·138。结论:负载肿瘤相关病毒抗原基因的冻融DC疫苗保持了功能成熟DC的形态特征,且能诱导高效的特异性抗肿瘤免疫应答。

新疆几种新虫媒病毒的发现与研究进展

新疆几种新虫媒病毒的发现与研究进展新疆维吾尔自治区地方病防治所（乌鲁木齐，８３０００２）李其平，郅琦，谢杏初，马丽，乌守巴特，也尔肯，斯拉木江，阿不力克木，陈晶，王诚，阿不都，杨新奎，木合塔，王志耀，刘永德，张云君，于心，叶瑞玉中国预防医学科学院病毒...

云南省猪牛体内发现人源同型新环状病毒

1987年夏,从云南省西双版纳傣族自治州医院采集的无名热和脑炎病人血清和脑脊液中,曾分离到多株新环状病毒。本文报道同年从版纳州医院附近的个体屠宰场采集到猪血清13份、牛血清53份,从中共分离到20株病毒。血清学鉴定,该病毒与人血清分离的新环状病毒BANNA582株病毒的两株单克隆抗体有很强的交叉反应。电镜观察病毒为球形无囊膜颗粒,毒粒大小和结构与BANNA新环状病毒相同。20株病毒的基因组皆由12条RNA片段组成,其带形与BANNA新环状病毒完全相同。本文还就猪牛等脊椎动物传播和扩散该类环状病毒的意义进行了讨论。

EB病毒潜伏膜蛋白2重组腺病毒的构建及其免疫效果的研究

为了进一步研究以EB病毒潜伏膜蛋白2穴LMP2)为靶抗原制备EB病毒相关肿瘤的治疗性疫苗,利用AdEasy系统构建了EBV鄄LMP2的重组腺病毒。PCR鉴定结果证实病毒DNA中含有目的基因的特异性片段;RT鄄PCR证明了外源基因在真核细胞中得以转录;免疫酶和Westernblot的结果也显示LMP2蛋白在真核细胞得到表达。将扩增后的病毒感染Hela细胞测定病毒滴度为1.5×109pfu/ml。将重组病毒以灌胃、肌肉注射和滴鼻的方式感染小鼠,经免疫荧光检测其特异性抗体,LDH法检测特异性CTL的杀伤作用,结果发现三种给药途径均可诱发小鼠针对LMP2的特异性体液免疫和细胞免疫,而用Ad5作为对照组的小鼠则没有引起相应的免疫反应。该研究将有益于进一步探索抗肿瘤特异性主动免疫作用在阻止肿瘤的生长、扩散或复发中的作用。对诱导机体产生特异性抗瘤活性有重要意义。

EBV-LMP2多肽所激活的特异性CTL对鼻咽癌细胞杀伤活性的研究

[目的]研究EB病毒编码的LMP2多肽片段所激活的肿瘤特异性CTL对鼻咽癌细胞的杀伤作用,探讨利用LMP2多肽对鼻咽癌进行免疫治疗。[方法]通过细胞免疫方法鉴定鼻咽癌细胞(CNE2)中的LMP2蛋白是否表达;外周血分离树突状细胞(DC)体外培养,以LMP2多肽片段负载DC激活产生特异性CTL;通过流式细胞仪、MTT法检测特异性CTL对CNE2细胞杀伤活性。[结果]在CNE2中表达LMP2蛋白,LMP2多肽所激活的肿瘤特异性CTL对鼻咽癌细胞具有杀伤活性。[结论]LMP2多肽片段所激活的肿瘤特异性CTL在体外对鼻咽癌细胞具有杀伤作用。

首次从新疆的蜱和病牛血清分离到新环状病毒

1990年3～8月从新疆北部和西部地区采集全沟硬蜱(Ixodes persulcatus)、银盾革蜱(Dermacentor niveus)、森林革蜱(D.silvarum)、边缘革蜱(D.marginatus)、草原革蜱(D.nuttalli)、刻点血蜱(Haemaphysalis punctata)、残缘璃眼蜱(Hyalomma detritum)等共2132只,分离病毒17株;采集病牛血清3份,分离病毒1株。从两地区共分离病毒18株。经血清学鉴定,该类病毒与披膜病毒科(Togaviridae)、黄病毒科(Flavirdae)、布尼亚病毒科(Bunyavirdae)某些病毒的免疫腹水及免疫血清都不发生反应。与新环状病毒(BANNA)的免疫腹水、免疫血清及酶标单克隆抗体(McAb)发生反应,中和指数为4.22～5.03。电镜观察病毒为球形无囊膜颗粒,直径为63～69nm,核衣壳直径为49～54nm。超薄切片在感染细胞中见到大量颗粒状包涵体,磷钨酸负染可见到排列整齐的壳粒结构,显示了典型的环状病毒形态特征。新分离的病毒对酸、氯仿、胰蛋白酶及热敏感;抵抗乙醚和5-碘脱氧尿苷。该病毒可引起白纹伊蚊(Aedes albopictus)传代细胞 C_6l_(36)细胞收缩、融合、脱落及颗粒增多等病变;感染传代细胞Vero株及BHK-21株未见明显的细胞病变。感染2～4日龄乳小白鼠及2～4周龄小白鼠,均无明显发病症状。初步鉴定证实,新分离病毒属新环状病毒(BANNA)。

基于CT图像分析建立岩土材料数值模型的方法研究

根据材料内部真实结构建立数值计算模型是岩土力学研究的一个热点。本文针对不同材料内部结构特征,介绍了等效图形法与边缘矢量化两种建模方法,并以自制孔隙岩土材料和混凝土的CT图像为例,说明了两种建模步骤。分析表明:当图像的灰度直方图具有明显双峰或多峰结构时,特征区域易分割;而当灰度直方图为单峰结构时,可以通过数学形态学的top-hat方法进行图像增强,以方便特征区域的提取。对于孔隙结构,可以利用等效圆或等效椭圆表征,建立相应的数值模型;而当内部结构复杂时,可利用特征边缘矢量化方法进行建模。本研究为如何建立反映岩土材料内部真实结构数值模型提供了方法。

电子衍射的目前进展(英文)

高能电子的量子波可用来探测有机和无机材料的原子结构。电子和物质有很强的相互作用,同时还可以形成很小的束斑。基于上述原因,电子在研究微小晶体、表面和材料的微结构上有很大用途。本文综述了电子衍射的最新进展和应用。

系列鼠抗CD分子单克隆抗体轻、重链可变区基因的克隆和序列分析

目的 获取系列鼠抗人CD分子单抗的轻链及重链可变区基因并进行克隆和测序。方法 采用RT－PCR技术，从WuT4、WUT3、WuTac、WuLCA、WuT9杂交瘤细胞总RNA中分别扩增出轻链和重链可变区基因，进行克隆并作核苷酸序列分析。结果 以上几种抗体的轻重链可变区的 PCR产物大小均为 400bp左右，成功构建了pMD18－T－VL和 pMD18－T－VH克隆载体，经限制性酶切分析，其大小与预期结果相符，并按ABI PRLSM BigDye系统测序。结论 经与Kabat、Blast抗体基因同源数据库比较，所获基因片段均为抗体基因。

抗CD3单克隆抗体重、轻链可变区基因的克隆及序列分析

目的 :抗CD3单克隆抗体 (WuT3)可变区基因克隆及序列分析。方法 :采用RT PCR技术 ,从WuT3杂交瘤细胞总RNA中扩增VH 、VL 片段 ,经酶切后通过链接反应构建重组克隆载体 ,测序鉴定。结果 :通过国际联机检索发现VH 、VL 基因与Ig同源 ,分别符合小鼠IgVH 、Vκ基因特征。VH 基因属于鼠重链VH 第IIB亚类 ,全长 36 3bp ,可编码 12 1个氨基酸 ;VL 基因属于鼠κ轻链第III亚类 ,全长 330bp ,可编码 110个氨基酸。结论 :成功获得WuT3单抗的重、轻链可变区基因。

浅谈图书馆的业务重组

介绍了国际上图书馆在其职能作用、作业流程和方式、组织结构、人力资源管理等各个方面进行相应变革的“图书馆业务重组”战略性管理概念,提出对图书馆业务重组研究与实践的几个方面问题。

准二维无定形碳结构的制备和结构表征

从单层和少层的石墨烯出发,利用透射电子显微镜中的高能电子束辐照,可控地制备了准二维完全无定形和半无定形碳结构.用高分辨成像和相干的纳米区域电子衍射技术表征了样品结构在高能电子束辐照前后的变化.基于实验记录的电子衍射花样得到了样品的原子对分布函数.分析表明,在所制备的准二维无定形结构中,六元环不再是碳原子的主要排列方式,碳原子的各阶最近邻间距相对于完美石墨烯中的值有所偏离并趋向无序;同时还发现,锯齿型的碳链结构不易被破坏,并使得准二维无定形碳结构中还保留了短程有序和可达0.5nm的中程有序.

去除致癌基因的EB病毒潜伏膜蛋白1的重组腺病毒的构建及其免疫效果

为进一步研究利用EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)进行免疫治疗的可行性,构建了含有去除致癌基因的EB病毒LMP1片段(LMP1△)的穿梭质粒pAdTrack CMV LMP1△,将它与腺病毒骨架质粒pAdEasy 1用电转染的方法共同导入大肠杆菌BJ5183中,在宿主菌重组酶的介导下进行同源重组。通过抗性筛选,获得含有重组腺病毒基因的质粒;然后再通过脂质体将重组腺病毒质粒导入腺病毒包装细胞HEK293细胞中,在HEK293细胞E1蛋白的反式作用下,病毒被包装。将包装病毒的细胞裂解上清进行PCR鉴定证实,病毒DNA中含有目的基因的特异性片段。RT PCR证明了外源基因在真核细胞中得以转录,免疫酶和Westernblot的结果也显示,LMP1△蛋白在真核细胞得到表达。将扩增后的病毒感染HeLa细胞,测定病毒滴度为3.0×109PFU/ml。为初步探讨其免疫效果,采用肌肉注射和滴鼻的方式感染Balb/c纯系小鼠,免疫酶检测其特异性抗体,LDH法检测特异性CTL的杀伤作用,结果发现,两种免疫途径均可诱发小鼠针对LMP1的特异性体液免疫和细胞免疫,而且Ad5作为免疫对照组的小鼠则没有引起相应的免疫反应。

首次从新疆无名热病人分离到8株新环状病毒(BANNA)

从新疆境内的生产建设兵团124团采集到不明原因发烧病人血清98份,分离到8株病毒。感染2～4日龄乳小白鼠和三周龄小白鼠不发病。可引起C6/36细胞病变。电镜观察病毒为球形无囊膜颗粒,直径63～69nm,核衣壳直径为49～54um。超薄切片在感染细胞中常见到大量颗粒状包涵体,磷钨酸负染可见到排列整齐的壳粒结构,显示了典型的环状病毒形态特征。该病毒对酸、氯仿、胰蛋白酶及热敏感;1.1MMgCl_2在50℃作用15分钟可使其感染力提高,在-30℃作用1小时可使其感染力丧失;抵抗乙醚和5-碘脱氧尿苷。血清学鉴定,新分离病毒与披膜病毒科(Togaviridae)、黄病毒科(Flaviviridae)及布尼亚病毒科(Banyaviridae)的某些病毒的免疫腹水及免疫血清都不发生反应。与新环病毒(BANNA)的免疫腹水及免疫血清发生反应。用新环病毒酶标单克隆抗体(McAb)做酶标中和试验为阳性,中和指数为1023.3～18620.9。经初步鉴定,分离的8株病毒的抗原性与近年从我国南方分离的新环状病毒(BANNA)相一致。

乙二胺二邻苯基乙酸钠的合成以及在皂洗中的应用

乙二胺二邻苯基乙酸钠(EDDHA-Na)是一种含有2个苯环的酰胺类的化合物,具有极佳的吸附和分散作用,能够牢牢结合水解的活性染料,是一种良好的活性染料防沾色皂洗剂。介绍了EDDHA的合成方法,通过质谱分析确定了实验室合成物的分子结构,将其用于活性染料皂洗工艺中,结果显示自制的EDDHA-Na和进口的同类产品具有相当的牢度性能和防沾色效果。