丹参酮Ⅱa磺酸钠对兔下颌骨牵张成骨促进作用的研究

目的:探讨丹参酮Ⅱa磺酸钠注射液对兔下颌骨牵张成骨的作用。方法:将12只大耳白兔随机分为对照组和实验组,建立单侧兔下颌骨牵张成骨模型,实验组自牵张期开始每日注射丹参酮Ⅱa磺酸钠注射液3mL,并分别于固定期1周、4周、7周各处死2只对照兔和2只实验兔,对标本进行大体观察、X线观察、组织学观察和骨组织计量学观察。结果:实验组动物牵张间隙内新骨形成速度及质量均优于对照组,实验组成骨细胞活跃,骨小梁较成熟,单位面积内成骨细胞个数及骨小梁面积百分比均高于对照组。结论:丹参酮Ⅱa磺酸钠对兔下颌骨牵张成骨过程具有促进作用。

腮腺区包块诊断分析

目的:提高对腮腺区包块的诊断水平。方法:收集5年间296例腮腺区包块的临床资料,对其一般情况、疾病构成、临床表现、诊断方法等进行分析。结果:男、女之比约1.19∶1,年龄最小1岁,最大83岁;多形性腺瘤80例,占腮腺区包块的27%,占腮腺区良性肿瘤的50%;Warthin瘤50例,占腮腺区包块的16.9%,占腮腺区良性肿瘤的31.3%;炎性包块27例,占腮腺区包块的9.1%。黏液表皮样癌14例,占腮腺区包块的4.7%,占腮腺区恶性肿瘤的29.2%;腺样囊性癌7例,癌在多形性腺瘤中7例,均占腮腺区包块的2.4%、腮腺区恶性肿瘤的14.6%;鳃裂囊肿6例,占腮腺区包块的2.0%;多形性腺瘤以40～49岁年龄组及50～59岁年龄组最多见(χ2检验,P<0.005),Warthin瘤以50～59岁年龄组、60～69岁年龄组、70～79岁年龄组最多见,且40岁以前其发病率为0(χ2检验,P<0.005);炎性包块可见于任一年龄组,且以60～69岁年龄组最多见(χ2检验,P<0.005)。结论:腮腺区包块涵盖的疾病复杂,表现多样,应结合其临床表现、B超、CT、MRI等影像学检查、细针吸细胞学检查、术中快速冰冻病理检查等综合考虑选择合适的治疗或手术方案。

姜黄素通过上调miR-124抑制牙龈卟啉单胞菌LPS诱导的人牙龈成纤维细胞炎症反应

目的:探究姜黄素(Cur)对牙龈卟啉单胞菌(Pg)脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGFs)炎症反应及微小RNA-124(miR-124)的影响。方法:将HGFs分为对照(control)组、LPS组(10 mg/L LPS)及LPS+Cur(20、40和80μmol/L)组(10 mg/L LPS+对应剂量Cur)。各组处理24 h,CCK-8法检测细胞活力;ELISA检测上清液中炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;RT-qPCR法检测细胞中miR-124的水平;Western blot检测胞浆和胞核中核因子κB(NF-κB)p-p65蛋白水平;激光共聚焦显微镜检测NF-κB p-p65蛋白的入核情况。转染mimic-NC和miR-124 mimic,检测细胞中miR-124及胞浆和胞核中NF-κB p-p65蛋白水平。结果:LPS组细胞活力、miR-124水平和胞浆NF-κB p-p65蛋白水平低于control组(P<0.05),上清液IL-1β和TNF-α水平及胞核NF-κB p-p65蛋白水平高于control组(P<0.05)。LPS+Cur(40和80μmol/L)组细胞活力、miR-124水平及胞浆NF-κB p-p65蛋白水平高于LPS组(P<0.05),上清液TNF-α水平和胞核NF-κB p-p65蛋白水平低于LPS组(P<0.05)。LPS+80μmol/L Cur组细胞上清液IL-1β水平低于LPS组(P<0.05)。miR-124 mimic组细胞miR-124和胞浆中NF-κB p-p65蛋白水平高于LPS组和mimic-NC组(P<0.05),胞核NF-κB p-p65蛋白水平低于LPS组和mimic-NC组(P<0.05)。结论:Cur可抑制Pg LPS诱导的HGFs炎症反应,可能是通过上调miR-124进而抑制NF-κB p-p65入核实现的。

夏枯草黄酮抑制大鼠牙周炎低氧诱导因子1α表达的治疗机制

目的:了解夏枯草黄酮治疗大鼠牙周炎过程中所靶向抑制的低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的表达情况。方法:取40只无特定病原体(specefic pathogen free,SPF)级雄性Wistar大鼠,按照随机数表法将其随机分为5组(8只/组),依次为正常对照组、模型组、夏枯草黄酮组(50、100、200mg/L),采用牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)浸渍丝线结扎的方法构建牙周炎模型。连续处理8周,其中模型组与对照组替代药品选用等量生理盐水。利用光镜检查大鼠牙周炎大体标本,采用四级法测量牙龈指数,应用牙周探针探测牙周附着丧失的情况。牙龈组织与血清中HIF-1α表达情况采用酶联免疫吸附测定法检测。软骨细胞中HIF-1α表达水平采用免疫组化染色法检测。结果:模型组牙周炎症状典型,可见牙龈萎缩,牙周附着严重丧失,根部分叉可见暴露,且多可见累及两侧邻牙。给予夏枯草黄酮治疗后可见牙龈水肿逐步减轻,牙周袋逐步变浅,且牙龈萎缩与牙周附着丧失亦见好转。相比于正常对照组,模型组的大鼠牙龈指数、牙周附着丧失程度及HIF-1α表达量均可见增加(P<0.01)。相比于模型组,夏枯草黄酮组随着给药浓度的增加可见大鼠牙龈指数、牙周附着丧失程度及HIF-1α均呈逐渐下降的趋势(P<0.05)。相比于正常对照组中仅少数细胞HIF-1α呈弱阳性表达,模型组HIF-1α(+)细胞明显增加。但夏枯草黄酮各剂量组HIF-1α(+)细胞均见减少,且各剂量组HIF-1α(+)细胞率明显下降(P<0.01)。结论:夏枯草黄酮或主要通过降低HIF-1α的表达而实现其缓解牙周炎病情的目的。

miR-210促进大鼠牙髓干细胞的增殖和牙源性分化

背景:miR NA表达谱预测miR-210可能在牙髓干细胞向牙本质和成骨方向分化中发挥作用,但具体作用尚不明确。目的:探讨miR-210在大鼠牙髓干细胞增殖和牙源性分化中的作用。方法:经河南中医药大学第二附属医院伦理委员会批准,收集5只SD大鼠牙髓组织,分离获得牙髓干细胞并分为5组:正常对照组、miR-210模拟物阴性对照组、miR-210模拟物组、miR-210抑制物阴性对照组和miR-210抑制物组。实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞中miR-210、ALP、DSPP、DMP-1、GIT2、OPNmR NA的表达和DSPP、DMP-1、OPN和OCN蛋白的表达,CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测细胞的增殖能力,比色法检测细胞碱性磷酸酶活性,茜素红染色检测矿物质合成能力。结果与结论:(1)miR-210模拟物组细胞的增殖活力高于其他4组,差异有显著性意义(P <0.01);miR-210抑制物组细胞的增殖活力低于其他4组,差异有显著性意义(P <0.01);(2)miR-210模拟物组细胞的碱性磷酸酶活性高于其他4组,差异有显著性意义(P <0.01);miR-210抑制物组细胞的碱性磷酸酶活性低于其他4组,差异有显著性意义(P <0.01);(3)茜素红染色结果显示,miR-210模拟物组细胞表面布满钙盐沉积形成的大小不等的暗红色结节,数量多于其他4组,miR-210抑制物组细胞表面的暗红色钙结节散在分布,数量少于其他4组;(4)miR-210模拟物组细胞中miR-210、ALP、DSPP、DMP1、GIT2、OPN mRNA和DSPP、DMP1、OPN、OCN蛋白的表达高于其他4组,差异有显著性意义(P <0.01);miR-210抑制物组细胞中miR-210、ALP、DSPP、DMP1、GIT2、OPN mRNA和DSPP、DMP1、OPN、OCN蛋白的表达低于其他4组,差异有显著性意义(P <0.01);(5)结果提示,miR-210能够促进大鼠牙髓干细胞增殖与牙源性分化。

VPS4B调控Notch通路对促进牙髓干细胞成牙本质分化的机制研究

目的探讨细胞液泡分选蛋白4B(VPS4B)对人牙髓干细胞(hDPSCs)成牙本质分化及Notch通路的影响。方法hDPSCs分正常组、矿化组、阴性对照组、VPS4B-siRNA组,除正常组(正常培养,不做任何处理)外,其余各组添加矿化液(0.785 g/L地塞米松、0.05 g/L维生素、2.16 g/Lβ-甘油磷酸钠),同时阴性对照组和VPS4BsiRNA组均用脂质体Lipofectamine 2000分别和阴性对照siRNA、VPS4B-siRNA共转染。CCK8检测细胞增殖情况;蛋白免疫印迹检测细胞中VPS4B、Notch受体释放其胞内结构域(NICD)、hairy相关转录因子1(Hey1)蛋白水平;茜素红染色观察细胞矿化情况;钙浓度检测试剂盒检测细胞钙浓度;实时荧光定量PCR检测细胞Runx2、骨桥蛋白(OPN)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)mRNA水平。结果正常组茜素红染色较浅,面积较小;矿化组、阴性对照组染色较深,且面积较大;VPS4B-siRNA组染色颜色有所减轻,面积减少。与正常组相比,矿化组、阴性对照组OD450水平,NICD、Hey1蛋白水平降低(P<0.05),矿化结节相对数量,VPS4B蛋白水平,钙浓度,Runx2、OPN、DSPP mRNA水平升高(P<0.05);VPS4B-siRNA组矿化结节相对数量,OPN、DSPP mRNA水平升高(P<0.05);OD450水平,NICD、Hey1蛋白水平降低(P<0.05)。分别与矿化组、阴性对照组相比,VPS4B-siRNA组NICD、Hey1蛋白水平升高(P<0.05);OD450水平,VPS4B蛋白水平,矿化结节相对数量,钙浓度,Runx2、OPN、DSPP mRNA水平降低(P<0.05)。结论干扰VPS4B后可抑制hDPSCs牙本质分化,并初步探究可能是通过激活Notch通路实现的。