北京市褐家鼠种群遗传多态性及与汉坦病毒分布关系的研究

目的了解北京地区褐家鼠不同地理种群遗传多态性与该地区汉坦病毒(HV)基因变异及其分布可能存在的关联.方法选取北京市不同地区捕获褐家鼠,采用巢式RT-PCR法检测HVM基因片段,获得的阳性标本产物进行直接测序,构建系统发育树.另一方面对不同HV来源的宿主个体和其对应种群内随机选取的其他个体,以及其他一些地区鼠类作为参照,用随机扩增多态DNA(RAPD)技术获得褐家鼠基因组DNA多态性图谱,利用RAPDDIST和PHYLIP软件分析褐家鼠种群多态性,并与对应的北京地区的HV差异和分布进行比较.结果选用50个随机引物进行扩增,有5个引物获得清晰、多态性高的RAPD谱带.不同区域种群RAPD标记不尽相同,北京市褐家鼠地理种群之间存在一定程度的遗传分化,大部分种群遗传距离较为接近,其中采集于某农产品集散地的XFD种群遗传距离相对较大,有特异性标记条带.11个HV代表序列均为汉城型汉坦病毒,基因差异为0.1%～8.0%,可分为2个主要的支系,多数毒株变异类型在不同地域中交叉分布,但BjFT01株变异较大,成一个独立的支系.通过Bootstrap分析和系统树图比较,种群分化较大的XFD种群与该区获得1株亲缘关系相对较远的HV相对应.结论北京市不同区域HV及其褐家鼠DNA多态性均存在一定差异,不同种群尤其是输入性种群对北京HV流行影响程度不同,初步显示一些特定种群与特定的基因性别有一定的关联.XFD种群外源基因交流渗入的可能性较大,进一步证明北京市HV随着鼠类种群迁移输入的可能性极大,但仍有待于选用一些特异性标记基因多态性进行继续研究.

北京不同生境鼠类及其感染汉坦病毒的调查

目的 了解北京不同生境鼠形动物及其感染汉坦病毒 (HV )的空间分布。方法 选取北京 5个区 (县 ) 9类生态环境 ,于 2 0 0 2年 8月至 2 0 0 3年 11月春、秋季节采用夹夜法捕获以鼠类为主的HV宿主。应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测其携带HV的情况。利用SPSS软件分析宿主及其自然感染HV的空间分布特征。结果 共捕获宿主动物 3 87只 ,平均密度 6.67%。 6个调查点 9类生境的鼠形动物群落构成 (多样性、均匀度和优势度 )特征不同、生物分配量不同 ,以褐家鼠在食堂、菜地的生物分配量最高 ,野栖型生境大林姬鼠的生物分配量最大 ,高于黑线姬鼠的生物量。携带的HV均为汉城型 (SEO) ,带病毒宿主主要为褐家鼠、小家鼠 ,分别占 97.2 0 %和 2 .80 %。不同调查点阳性率 :昌平区11.49%、海淀区西北部 7.5 8%、海淀区中南部 6.3 8%、延庆县 3 .5 7% ,门头沟区和怀柔区均为 0。 9种生境的阳性率分别是 :11.88% (养殖场 )、10 .44 % (垃圾场 )、8.82 % (食堂 )、8.16% (工地 )、6.85 % (菜地 )、0 (农梯田、低矮灌木、山林和民房 )。总体家栖性生境和野栖型生境二者之间差异有显著性 (χ2 =4.65 8,P =0 .0 3 1)。结论 北京地区不同生境的鼠类密度、群落构成有不同程度的差异 ;鼠类及其HV感染空间分布广泛 ,尚未?

云南西部地区居民区小型兽类携带病原体检测

目的了解云南西部地区居民区小型兽类携带病原体情况,为自然疫源性疾病的防治提供科学依据。方法在滇西地区8个州(市)中抽取的10个县(市、区)40个自然村中,随机抽取800户家庭(每村20户),进行室内捕鼠,采集鼠脾脏标本并提取基因组DNA,鼠肺标本提取RNA,运用聚合酶链反应(PCR)或免疫学方法,检测鼠疫、巴尔通体、伯氏疏螺旋体、巴贝西原虫、人粒细胞无形体、埃立克体、汉坦病毒等病原体。结果捕获9种421只小型兽类,采集脏器样本404份,血清样本325份。检出鼠疫F1抗体两种方法共同阳性血清1份;扩增到巴尔通体枸橼酸合酶(gltA)基因64份,阳性率为15.84%,基因分析表明属6种基因型;检出伯氏疏螺旋体5S^23S rRNA间隔区基因5份,阳性率为1.24%,系统发育树显示均为Borrelia afzelii型;检出1例复合感染。其余病原体检测均为阴性。结论滇西地区室内小型兽类感染病原体种类多,分布广,对人类健康有一定的危害,需加强监测并采取预防控制措施。

北京市城区鼠间汉坦病毒感染的流行病学研究

目的了解北京城区中心地带鼠间汉坦病毒(HV)感染状况及其病毒型别差异。方法选取北京城区某方圆约1km两街区之内的食物资源丰富、场所隐蔽的中、小餐饮行业、蔬菜集贸市场及周边垃圾堆、卫生死角等生态环境,从2003年12月至2004年11月每月连续采用夹夜法捕鼠,计算鼠密度和鼠种构成。应用间接ELISA法检测鼠血清IgG抗体;针对汉坦病毒M基因部分片段设计汉城型汉坦病毒(SEOV)特异性引物,应用RTPCR法检测宿主动物携带HV情况,阳性标本直接测序。利用Excel和SPSS软件分析宿主动物HV感染的动态特征。最后用DNASTAR软件对获得序列进行比较分析。结果共捕获啮齿动物229只,平均鼠密度6.41%(229/3570),褐家鼠和小家鼠分别为餐饮业、农贸市场生境的优势鼠种。褐家鼠血清抗体阳性率3.51%(6/171),带病毒率为0.58%(1/171);小家鼠血清抗体阳性率为6.90%(4/58),带病毒率为1.72%(1/58)。病毒检出率以11、12月最高,抗体水平冬春季(1、4月)最高,与春季人群肾综合征出血热(HFRS)流行季节基本一致。2份扩增阳性标本(分别来源于小家鼠和褐家鼠)均为SEOV,差异为5.40%,系统发育分析显示他们位于2个不同的较小分支,但均位于Z37支系。结论北京城区2种主要的HV宿主在一些鼠害重点行业密度仍较高,虽然HV基础感染率不高,但持续存在,为春季人群HFRS发病高峰的重要影响因素。来自2个不同宿主的HV基因有一定的差异。小家鼠的传播作用有所加强,应予重视。

西尼罗病毒RT-PCR检测方法的建立及其初步应用

目的 建立西尼罗病毒 (WestNilevirus ,WNV)RT PCR检测方法 ,为WNV感染的诊断和流行病学调查奠定基础。方法 选择Vero E6细胞进行WNV培养 ,通过乳鼠脑内接种病毒培养液获得WNV感染脑组织。在病毒基因组E区和C区设计 3对引物 ,以WNV培养液 ,建立并优化病毒核酸RT PCR分析方法。然后 ,以此对感染蚊虫模拟标本和乳鼠脑组织进行检测。PCR产物测序后 ,用Blast进行同源性分析。结果 用RT PCR在WNV培养液中扩增出与预期大小一致的核苷酸片段 ,并通过改变循环数 ,模板稀释倍数等参数对该方法进行了优化 ;将建立的方法用于检测感染蚊虫模拟标本和感染乳鼠脑组织 ,均检测出WNV目的基因片段 ,且扩增效果与病毒培养液无明显差异 ;套式PCR能显著提高检测的敏感性 ( 10 8-10 9倍 )。结论 本研究建立的WNVRT PCR检测方法具有较高的敏感性 。

我国东北部分地区宿主动物感染汉坦病毒的分子流行病学调查

目的了解我国东北部分地区宿主动物携带汉坦病毒状况及其型别。方法采用夹夜法捕鼠，针对不同型别汉坦病毒M片段设计引物，应用RT—PCR检测带毒状况，阳性标本测序，对M片段变异大的标本再进行S片段的扩增测序，获得序列用clustalX（1．83）和Phylip3．63进行分析。结果共捕获鼠类宿主220只，平均阳性率为3．64％，不同鼠种间阳性率差别有统计学意义。其中从棕背鼠平鼠Jilin-54、Jilin-59检测到汉滩型汉坦病毒，从褐家鼠Jilin-99、Ji—lin-106标本中检测到汉城型汉坦病毒。而从大林姬鼠HU-32、Jilin—AP10和HLJ-47中得到的汉坦病毒M片段均与HTNV原型株76-118同源性最高（95．35％～97．42％）；来源吉林（毗邻俄罗斯远东地区）大林姬鼠的Jilin-AP06的汉坦病毒M片段与我国病人分离株B78、H5同源性最高（97.25％～95.33％），与来源俄罗斯远东地区大林姬鼠的Amur类汉坦病毒AP111株同源性为93．48％，与来自吉林大林姬鼠的Jilin93同源性为80．80％，与76-118同源性为80.80％，与朝鲜大林姬鼠分离株Soochong-1同源性为88.24％。Jilin-AP06S片段同其他株的同源性与M片段的结果一致。结论我国东北部分地区宿主动物携带汉坦病毒的型别多样，我国大林姬鼠中存在Amur类病毒感染。

基于空间信息技术的北京市肾综合征出血热宿主动物感染与环境因素关系研究

目的探讨北京市肾综合征出血热(HFRS)宿主动物的感染情况与环境因素之间的关系。方法选择北京市9个区(县)作为研究试验区,设立14个调查点,对HFRS动物宿主感染情况进行调查,应用全球定位系统对调查点进行定位,在ArcGIS软件支持下,建立调查点矢量图层,并与北京市1∶100 000地形图、北京市Landsat-7 TM卫星遥感影像图及北京市高程图进行叠加,分别提取调查点周围2 km缓冲区内的平均海拔,校正植被指数及土地利用信息,导出后在SPSS 13.0中分析宿主感染情况与环境因素的联系。结果不同地区间HFRS动物宿主密度和带毒率的差异具有统计学意义;宿主带毒率和带毒指数与园地、水浇地面积成正相关关系;宿主带毒情况和校正植被指数之间无相关性;褐家鼠带毒率与海拔、水浇地面积之间呈正相关关系。结论北京地区肾综合征出血热动物感染情况与土地利用等地理环境因素有关,提示应根据不同地理环境特点采取有针对性的防控措施。

驻石某部肾综合征出血热流行病学调查

目的探讨某部肾综合征出血热(HFRS)的流行状况、啮齿动物间汉坦病毒(HV)感染特点及HV基因型,为HFRS的预防控制提供科学依据。方法夹夜法捕鼠,计算鼠密度,确定鼠种构成。针对HV基因M片段部分序列设计2种型特异性引物,应用RTPCR法检测宿主动物带病毒情况。结果共捕获宿主动物14只,血清抗体阳性率为21.43%,RTPCR扩增检测出阳性标本1份,为褐家鼠,分型为汉城型阳性标本。密切接触人群血清抗体阳性率为3.64%。结论该地区存在汉城型HV感染,提示应加强疫情监测,防止疫情的扩大蔓延。

一种抗菌复合材料对SARS冠状病毒灭活效果评价

为评价含有抗菌添加剂的复合材料脲醛树脂对SARS冠状病毒的灭活作用,采用细胞培养法,对污染在该抗菌材料表面的SARS冠状病毒灭活效果进行了试验观察,同时,以不含抗菌剂的相同材料作对照。结果,在室温下,含有抗菌剂的脲醛树脂材料对涂抹在其表面的SARS冠状病毒作用4h和8h,病毒滴度均有显著降低(P<0.05)。作用48h后病毒滴度降低4个log以上,经传代未见典型细胞病变,说明作用48h后已无存活病毒。而对照组至72h仍有较高的病毒滴度。结论,含有抗菌添加剂的复合材料脲醛树脂对SARS冠状病毒有明显灭活作用。

云南省蚊媒病毒分离物的初步鉴定

本研究对前期从云南蚊虫获得的病毒分离物作进一步鉴定，以明确其分类地位。采用甲病毒通用引物进行RT—PCR检测，在5株病毒分离物扩增出目的基因片段。新分离株4株来自三带喙库蚊，1株来自中华按蚊。它们可使白蚊伊蚊细胞（C6／36）、猴肾细胞（Vero）及金黄地鼠肾细胞（BHK-21）发生规律性细胞病变。核苷酸序列分析显示5株病毒与盖塔病毒（Getahvirus，GETV）同源性最高，与GETV中国云南YN0540株、河北株HB0234、海南株M1及南韩株、LEIVMPR株、鹭山病毒的同源性为96．4％～99．2％，5株病毒之间的同源性为98．4％～100％。系统进化分析结果显示，新分离株与上述GETV处于同一进化分支。以上结果证实5株病毒分离物为盖塔病毒。

沙棘油抗突变作用的实验研究

自然环境中存在多种致突变致畸，致癌物质，人们发掘它们．用以预防和治疗由此所引发的不良效应，这已成为国内外学者关注的热点．植物中主要的抗诱变成分有多酚、芳香异硫氨酸盐，香豆素．黄酮，双萜类、维生素A类、维生素C．α-生育酚，硒盐和植物固醇类等．沙棘属于胡类子科沙棘属植物，含有多种生物活性物质，它能提高机体免疫力的效应已为实验所证实．

褐家鼠不同脏器中汉坦病毒自然感染的差异

为了解野外褐家鼠不同脏器中自然感染汉坦病毒状况和带毒量的差异,选取经检测鼠肺组织中HV-RNA并呈阳性的鼠个体20只,采用巢式RT-PCR检测这些个体心、肝、肺、脾和肾5种共85份脏器中的HV,对阳性标本重复扩增后直接测序,用DNASTAR软件对获得序列进行比较分析。另外,针对汉城型汉坦病毒株Z37-M片段全序列设计定量PCR特异性引物,采用SYBRGreen实时定量PCR法,检测上述85份不同脏器中HV带毒量情况与相对差异。结果显示:RT-PCR对除肺脏之外的其它脏器中HV-RNA的检出率较低(11/65),不同个体肺组织来源的HV-M片段变异较多,其中A→G碱基变异类型占1/3强。从11份除肺之外的脏器中扩增到的HV-M基因序列和其对应同一褐家鼠个体肺脏HV-M片段相比,其碱基差异不大;一肺脏来源的与该个体其他脏器来源的HV-M片段两个位点存在A→G差异,并分别导致两位置氨基酸差异。定量检测结果显示:褐家鼠不同脏器中HV-RNA检出率差异有统计学意义(χ2=16.10,P=0.003),总体阳性率大小为肺>肝>肾>心>脾;肺脏中病毒的分布比其他脏器更为普遍。带毒量也以肺脏中最高,其它脏器之间HV带毒量没有显著性差异(χ2=8.79,P=0.088)。这些结果说明:褐家鼠肺脏是HV侵犯与贮存的主要靶器官,HV基因在该器官中可能更易发生变异。这对进一步了解HV在宿主体内的贮存规律、传播及其在流行病学上的意义将有所裨益。

西安地区汉坦病毒L及S部分片段的编码序列分析

应用巢氏PCR法从陕西西安地区间接免疫荧光抗原初检为阳性的黑线姬鼠标本中扩增汉坦病毒的L和S片段部分序列。序列分析显示：不同标本来源的汉坦病毒均为汉滩型病毒，彼此之间L和S部分片段序列同源性较高，与贵州地区优势汉滩型病毒S2／L4群毒株同源性最高，分别为95．0％～97．0％和97．7％～99．3％，但与该地区已报道的汉坦病毒同源性较低。系统发育树显示：所有来自西安的病毒株处在同一个进化分支上，但可分成两个较小的分支。证实目前检测到的西安地区流行的汉坦病毒株与贵州地区汉滩型病毒株亲缘关系最近，而与当地既往流行毒株的差异较大，究竟是西安地区汉坦病毒流行株发生了变化还是当地同时流行多种毒株还有待于进一步研究证实。

北京地区汉坦病毒宿主动物生态流行病学调查

目的了解北京地区啮齿动物间汉坦病毒(HV)感染状况、HV基因型及其与宿主动物的关系。方法夹夜法捕鼠,计算鼠密度,确定鼠种构成。针对HV基因M片段部分序列设计2种型特异性引物,应用RT-PCR法检测宿主动物带毒情况,并用ClustalX(5.0)和DNAClub软件对序列进行分析。采用SPSS软件分析宿主动物HV感染的流行病学特征。结果共捕获宿主动物295只,褐家鼠为优势鼠种,占71.53%。其次为小家鼠,占14.58%。RT-PCR检测宿主带病毒率,其中褐家鼠阳性率为18.01%,小家鼠为2.33%。对5份扩增阳性标本进行序列测定并对其核苷酸序列进行分析,结果显示均为汉城型(SEO)病毒。不同性别的褐家鼠HV感染率之间差异无统计学意义(χ2=0.032,P>0.05);不同体重的褐家鼠HV感染率之间差异有统计学意义(χ2=16.900,P<0.001),体表有、无疤痕的褐家鼠之间HV感染,差异有统计学意义(χ2=30.441,P<0.001)。结论北京地区存在较为广泛的汉城型HV感染,目前尚未发现汉滩型HV疫源地。褐家鼠为北京地区HV优势宿主和主要带毒鼠,宿主动物种群特征与HV感染具有不同程度的相关性。

一起SARS爆发流行的调查研究

目的 分析一起SARS爆发流行的病例分布特点 ,了解传播途径 ,为有效控制SARS的发生与蔓延提供科学依据。 方法 采用回顾性调查和现场流行病学调查方法 ,对SARS局部爆发进行调查 ,利用Exce15 0软件和SPSS10 0软件分析该起SARS病例的时间分布、空间分布和人群分布及聚集性特征。根据传播链分析传播关系。 结果 由首发病例 (指征病例 )引起感染或继发感染病人 79例 ,年龄分布在 19～ 69岁 ,男性占 5 1 89% ,女性占48 11%。发病人群包括护士、医生、同期住院患者、家属、其他人员人员 ,分别占 3 6 71%、12 66%、7 5 9%、10 13 %和3 2 99%。病例分布有四个时段 ,医护人员发病时间主要集中于第一、二个高峰时段 ,院内非医护人员和院外人员发病时间集中第三高峰 ,医务人员家属发病时间主要分布在第四个时段。密切接触是SARS传播的主要途径 ,尤其是近距离接触病例获得感染的机会比较大 ,SARS病例空间分布主要集中在几个科室 , 结论 该起SARS流行分布具有明显的聚集性 ,为典型的院内SARS爆发感染 ;医务人员应对飞沫和接触性传播采取严格的控制措施 ,加强对该病的防范意识。

北京海淀城郊鼠类携带汉坦病毒的相关危险因素研究

目的 了解北京市海淀区城郊宿主动物携带肾综合征出血热病毒状况 ,分析宿主动物带毒相关危险因素。 方法 夜夹法捕鼠 ,计算鼠密度 ,确定鼠种构成。应用RT -PCR扩增M片段部分序列检测宿主带病毒率 ,根据检测结果应用Logistic回归分析通过SPSS( 9 0 )软件分析宿主动物感染的可能危险因素。 结果 共捕获宿主动物 2 3 8只 ,褐家鼠为优势鼠种 ,占 70 5 9%。其次为小家鼠 ,占 2 5 2 1%。RT -PCR检测宿主带病毒率 ,褐家鼠为 14 2 9% ,小家鼠为 0。就褐家鼠而言 ,尽管成鼠阳性率高于幼鼠 ,雄鼠阳性率高于雌鼠 ,但成鼠和幼鼠间、雌鼠和雄鼠间带毒率差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,但扩增阳性鼠和扩增阴性鼠体重的差异有非常显著性 (P <0 0 0 1)。多因素分析显示宿主感染危险因素最重要的鼠个体因素尤其是体重。 结论 北京市海淀区城郊汉坦病毒感染的主要宿主动物是褐家鼠 ,采样点的鼠密度与带毒率非正相关 ,但二者可能存在更复杂的关系。

自然感染的宿主动物和病人体内汉城型汉坦病毒S片段末端序列多样性研究

在汉城型汉坦病毒（Seoulvirus，SEOV）长期感染的Vero—E6细胞过程中发现，病毒在持续感染过程中存在RNA3’末端序列缺失现象，可能对病毒的持续感染有重要作用。而自然感染的宿主动物或病人体内病毒RNA末端序列的变异情况并不清楚。本文从SEOV感染的病例血块以及SEOV检测阳性的褐家鼠肺组织中提取RNA，测定病毒s片段末端序列，并进行RNA二级结构模拟。结果发现，自然感染的宿主动物褐家鼠体内的SEOVS片段5’末端、3’末端及双末端均可出现序列缺失，而感染病例体内的病毒仅在一个克隆检测到3’末端序列缺失。与长期感染的Vero．E6细胞感染模型中仅存在较短的3’末端序列缺失现象不同，宿主动物的克隆既有较短的3’末端序列缺失，也有5’末端和双末端序列缺失，另外还有典型的大片段序列缺失。不同序列缺失类型的RNA序列二级结构模型存在显著差异。自然感染的宿主动物和病人体内的SEOVS片段序列末端存在序列缺失多样性，但前者的多样化程度更高。因此我们认为这些序列缺失可能受宿主因素影响，并与病毒对宿主的持续感染相关。

北京昌平鼠间汉坦病毒感染时间动态变化的调查

目的了解鼠类自然感染汉坦病毒(HV)时间动态变化。方法选取北京昌平南口镇某部驻地,从2002年8月至2004年5月采用夹夜法捕获鼠形动物,针对汉坦病毒M基因部分片段设计SEOV和HTNV型特异性引物,应用RT-PCR法检测宿主肺组织中携带HV-RNA及其型别情况;应用ELISA法和间接IFAT检测IgG抗体。利用SPSS软件分析宿主动物HV感染的时间动态特征。结果共捕获啮齿动物296只,平均感染率11%。整个调查周期总体宿主种群密度波动不大,局部小生境(养殖场)种群波动明显。优势宿主褐家鼠平均种群密度与其感染率变化之间具相关性(r=0.594,P=0.023),养殖场褐家鼠密度与HV感染率之间相关性极显著(r=0.746,P=0.008)。褐家鼠性比和阳性率变化之间不具统计学意义相关性(r=0.541,P=0.086)。成幼比和阳性率变化之间则具显著相关性(r=0.697,P=0.046)。结论北京昌平鼠间汉坦病毒感染长期持续存在,其感染率与种群密度随时间呈现动态变化,两者之间具有相关性,并因生境而异。优势宿主种群结构特征及其动态变化与HV感染也存在较为复杂的关系。