雌二醇经雌激素受体调控分拣蛋白相关受体A对小鼠海马神经元树突棘密度和突触蛋白表达的影响

目的探讨雌二醇(E_(2))调控分拣蛋白相关受体A(SorLA)表达对小鼠海马神经元树突棘密度和突触蛋白表达的影响及机制。方法32只C57BL/6雌性小鼠随机分为假手术(sham)组、卵巢切除(OVX)组、卵巢切除+E_(2)组(OVX+E_(2))组、卵巢切除+氟维司琼(Fu)+E_(2)组(OVX+Fu+E_(2))组,通过Western blotting和免疫组织化学染色检测小鼠海马CA1区SorLA表达;40只C57BL/6雌性小鼠随机分为假手术+空白病毒(sham+NC-sgRNA)组、卵巢切除+空白病毒(OVX+NC-sgRNA)组、卵巢切除+空白病毒+E_(2)(OVX+NC-sgRNA+E_(2))组、卵巢切除+SorLA敲降病毒+E_(2)组(OVX+Sorl1-sgRNA+E_(2))组,通过高尔基染色检测小鼠海马CA1区神经元树突棘密度;通过Western blotting和免疫组织化学染色检测小鼠海马CA1区突触后致密蛋白95(PSD-95)和突触蛋白1(SYN1)表达。结果与sham组相比,和OVX组和OVX+Fu+E_(2)组SorLA蛋白表达显著降低(P<0.05),和OVX+E_(2)组差异无显著性(P>0.05);与sham+NC-sgRNA组相比,OVX+NC-sgRNA组和OVX+Sorl1-sgRNA+E_(2)组树突棘密度和PSD-95、SYN1表达显著降低(P<0.05),与OVX+NC-sgRNA+E_(2)组差异无显著性(P>0.05)。结论E_(2)可通过雌激素受体上调SorLA表达,进而增加小鼠海马神经元树突棘密度和突触蛋白表达。

锌铁转运蛋白9在睾酮调节小鼠海马突触可塑性过程中的作用

目的:研究睾酮通过锌铁转运蛋白9(ZIP9)对海马CA1区神经元突触后致密蛋白95(PSD95)表达的非基因组效应及其作用机制.方法:腺相关病毒感染3月龄C57BL/6小鼠海马CA1区神经元,敲低锌铁转运蛋白9(ZIP9)表达,并通过Western Blot实验检测敲低效率;Golgi-cox染色实验观察去势手术或ZIP9-RNAi预处理后膜不通透性类固醇偶联物睾酮-胎牛血清白蛋白(T-BSA)对小鼠海马CA1区神经元树突棘密度的影响;Western Blot实验观察去势手术或ZIP9-RNAi预处理后,T-BSA对小鼠海马CA1区神经元PSD95蛋白、细胞外调节蛋白激酶1/2(Erk1/2)磷酸化和总蛋白、真核起始因子4E(eIF4E)磷酸化和总蛋白水平的影响.结果:海马CA1区可见病毒感染后绿色荧光GFP标记神经元,Western Blot结果显示ZIP9-RNAi预处理后海马CA1区ZIP9蛋白表达显著降低;Golgi-cox染色实验结果显示去势手术后小鼠海马CA1区神经元树突棘密度显著降低,T-BSA可抑制去势手术后树突棘密度的降低,而ZIP9-RNAi预处理显著抑制T-BSA对小鼠海马CA1区神经元树突棘密度的恢复作用;Western Blot实验结果显示去势手术后小鼠海马CA1区PSD95蛋白水平、Erk1/2和eIF4E磷酸化蛋白水平显著降低,T-BSA可恢复去势手术后上述蛋白的降低,而ZIP9-RNAi预处理显著抑制T-BSA对上述蛋白的恢复作用,但对Erk1/2和eIF4E总蛋白水平未见显著影响.结论:T-BSA可通过ZIP9介导的Erk1/2-eIF4E信号通路影响PSD95蛋白的表达,进而影响海马神经元突触可塑性.