天麻素通过CCR5/JAK1/STAT1信号通路抑制缺血缺氧新生小鼠小胶质细胞介导的炎症反应

目的:探究天麻素(GAS)通过C-C趋化因子受体5(CCR5)对新生小鼠缺血缺氧性脑损伤(HIBD)后小胶质细胞JAK1/STAT1信号通路及其介导的炎症反应的影响。方法:选择新出生10 d的C57BL/6J小鼠48只,随机分为假手术(sham)组、HIBD模型组和HIBD与GAS联合处理(HIBD+GAS)组;体外培养BV-2小胶质细胞,分为对照(Con)组、氧糖剥夺(OGD)组、OGD+GAS组、GAS组、Maraviroc(MVC)组、OGD+MVC组和OGD+MVC+GAS组。通过RT-qPCR检测CCL4和CCR5的mRNA表达变化,Western blot检测CCR5、p-JAK1、p-STAT1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)蛋白的表达变化,免疫荧光双标染色检测CCR5、p-JAK1和p-STAT1的表达变化。结果:(1)与sham组相比,HIBD组小鼠缺血侧胼胝体区CCL4和CCR5的mRNA水平,以及CCR5、p-JAK1和p-STAT1的蛋白水平明显增高(P<0.05),而HIBD+GAS组中CCL4和CCR5 mRNA水平,以及CCR5、p-JAK1和p-STAT1的蛋白水平显著低于HIBD组(P<0.05)。(2)与Con组相比,OGD组BV-2细胞中CCR5、p-JAK1和p-STAT1蛋白水平明显增高(P<0.05),而OGD+GAS组BV-2细胞中CCR5、p-JAK1和p-STAT1蛋白水平显著低于OGD组(P<0.05)。(3)CCR5拮抗剂MVC在0~80μmol/L范围内不会导致显著的BV-2细胞死亡。与OGD组相比,MVC+OGD组p-JAK1、p-STAT1、TNF-α和IL-1β蛋白水平显著降低(P<0.05),而MVC+OGD组与OGD+MVC+GAS组无明显差异。结论:GAS可通过靶向CCR5抑制小胶质细胞p-JAK1/p-STAT1通路及相关炎症因子的表达,发挥神经保护作用。

天麻素对新生大鼠缺血缺氧脑损伤中小胶质细胞NOX2表达的影响

目的:研究天麻素(GAS)对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤后脑内激活的小胶质细胞表达NADPH氧化酶2(NOX2)的影响。方法:将39只3 d龄新生SD大鼠随机分为假手术组(sham)、缺血缺氧模型组(HIBD)、以及HIBD与GAS联合处理组(HIBD+GAS)。利用左侧颈总动脉结扎结合缺氧箱(8%O_(2),92%N_(2))缺氧2 h制备HIBD模型。采用Western Blot和免疫荧光双标染色检测大鼠左侧胼胝体区NOX2的表达。结果:与sham组相比,HIBD组大鼠胼胝体区NOX2表达明显增高(P<0.05),并且主要表达在活化的小胶质细胞;GAS处理后HIBD大鼠胼胝体区小胶质细胞活化减弱,同时NOX2表达降低(P<0.05)。结论:GAS可能通过降低新生大鼠脑内小胶质细胞NOX2的表达,发挥其神经保护作用。

新生大鼠缺氧后脉络丛中血管紧张素转化酶的表达变化

目的:观察新生大鼠缺氧后脉络丛(CP)组织结构的病理改变及血管紧张素转化酶(ACE)的表达变化,探讨缺氧后脉络丛的病理变化与脑缺氧的关系。方法:将54只新生SD大鼠随机分为对照组(control)和缺氧组(hypoxia)。利用缺氧箱(8%02,92%N2)缺氧2 h制备新生大鼠缺氧模型。采用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠脑室内脉络丛的形态,通过免疫组织化学染色和Western Blot检测脉络丛中ACE的表达与分布。结果:缺氧后大鼠脑室周边的室管膜上皮细胞界限不清、排列不规则、游离面微绒毛减少;脉络丛上皮细胞疏松水肿、结构紊乱,毛细血管管壁不完整。脉络丛ACE蛋白表达明显升高(P<0.05),以缺氧后1 d达到高峰。结论:缺氧可导致新生大鼠脉络丛损伤,ACE蛋白表达升高。

天麻素对氧糖剥夺诱导的小胶质细胞Notch信号通路的影响

目的:研究天麻素(GAS)对氧糖剥夺(OGD)激活的BV2细胞Notch通路表达的影响。方法:BV2细胞分成4组,分别为对照组(control)、氧糖剥夺组(OGD)、OGD联合0.17 mmol/L GAS处理组(OGD+GAS-L),和OGD联合0.34 mmol/L GAS处理组(OGD+GAS-H)。免疫荧光双标染色和Western Blot检测Notch通路相关蛋白Notch-1、NICD、RBP-JK和Hes-1的表达变化。结果:与control组相比,OGD组中的Notch-1、NICD、RBP-JK和Hes-1表达明显增高(P<0.05);GAS干预后上述蛋白表达均明显降低(P<0.05);而不同浓度的GAS治疗组之间无明显差异(P>0.05)。结论:GAS能抑制OGD诱导的BV2细胞中Notch通路相关分子的表达。

NOX2在激活小胶质细胞中的表达及天麻素干预对其的影响

激活的小胶质细胞介导的炎症反应参与了多种中枢神经系统疾病的病理过程,活化的小胶质细胞释放的炎症因子会加重神经元的损伤。因此抑制小胶质细胞的过度激活及其介导的炎症反应,可能是治疗此类中枢神经系统疾病的重要策略。本文主要研究NAPDH氧化酶2(NOX2)在体外脂多糖(LPS)激活的小胶质细胞中的表达以及天麻素干预对其的影响。

天麻素通过SOX2/β-catenin通路抑制脂多糖诱导的小胶质细胞活化

目的:研究天麻素(GAS)对脂多糖(LPS)激活的BV2小胶质细胞性别决定区Y框蛋白2(SOX2)/β-连环蛋白(β-catenin)通路表达的影响。方法:体外培养BV2小胶质细胞,分为对照组(Control)、LPS刺激组(LPS)、LPS+0.17 mmol/L GAS处理组(LPS+GAS-L)、LPS+0.34 mmol/L GAS处理组(LPS+GAS-H)、SOX2抑制剂丙萘洛尔(PR)处理组(PR)、LPS+PR处理组(LPS+PR)、LPS+PR+GAS处理组(LPS+PR+GAS)。通过CCK-8检测PR对BV2小胶质细胞活力的影响,并通过Western Blot和免疫荧光双标染色检测SOX2、β-catenin、甘露糖受体(CD206)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达变化。结果:PR在0~40μmol/L范围内不会引起显著的BV2小胶质细胞死亡;LPS刺激组中SOX2、β-catenin和TNF-α蛋白表达明显增强,而CD206表达显著降低(P<0.05)。GAS干预后SOX2、β-catenin和TNF-α表达显著减少,而CD206明显升高(P<0.05);与LPS组相比,用PR阻断SOX2后β-catenin和TNF-α蛋白表达显著降低(P<0.05),而PR与GAS联合应用与单纯GAS干预组相比,β-catenin和TNF-α蛋白表达无明显差异。结论:天麻素可能通过抑制SOX2/β-catenin通路减轻小胶质细胞的激活,发挥抗炎作用。