甲基丙烯酸环氧丙酯诱导基因突变的序列分析

本文采用双链DNA直接测序法对GMA诱导的质粒PBR322突变体(AP^RTc^s)的部分基因片段进行序列测定,结果表明:①GMA诱导的基因突变类型为缺失型和插入型,缺失的频率(28％)远大于插入频率(18％),C和G的缺失远大A和T的缺失。碱基缺失和插入导致移码突变。②GMA诱导的基因序列的改变,其作用方式并非随机。5′- CNCCN-3′为高度敏感的作用序列(专一性序列)。③GMA在三个富含C和G区域诱导很强的突变作用,尤其在397-418区段,突变频率高达36.3％,可认为该区域为热点区。

新诱变剂甲基丙烯酸环氧丙酯对质粒限制酶酶谱的改变

甲基丙烯酸环氧丙酯(glycidyl methacrylate,GMA)作为粘合剂的主要成分,在我国广泛应用于航空及其它工业,对环境造成一定污染.可归入环境诱变剂类物质.已知GMA不仅能与哺乳类基因组DNA发生共价结合,在一定浓度下还可诱导人和大鼠血淋巴细胞及雄性小鼠配子细胞的DNA修复合成,以及抑制S期DNA半保留复制.进一步的研究发现GMA能与质粒pBR322结合,并引起其损伤。

谷胱甘肽S-转移酶异质性研究

本文以不同状态的大鼠肝细胞为对象,采用生化和病理学方法研究了谷胱甘肽S-转移酶(GST)的异质性。根据GST同工酶酶谱分忻、GST活性改变状况和GST同工酶表达活性的改变等结果,表明GST无论在正常状态或病理状态下均具有显著的异质性。

与肝“癌前”病变相关的特异性的谷胱甘肽S-转移酶同工酶

化学致癌的两阶段学说认为,细胞癌变须经过“起动”、“促进”(或“促进”+“发展”)等阶段。“起动”是不可逆的,它涉及细胞内某些特异性基因结构或表达上的改变。若这一改变保持稳定持久,则可作为“癌前”病变的标志。

谷胱甘肽S-转移酶的异质性

谷胱甘肽S-转移酶(GST)已知具有多种功能和性质,特别是它与药物代谢(解毒)、细胞癌变、抗药性等方面的关系,已经或正在受到重视。

谷胱甘肽S－转移酶pi基因与表达载体pSV2－neo重组体的构建

７３４ｂｐ的ＧＳＴ－ｐｉｃＤＮＡ从质粒ｐＧＰ５中回收后，采用平端连接技术将其重组到真核表达载体ｐＳＶ２－ｎｅｏ上，筛选出正向连接重组体ｐＳＶ２－ＧＴ￣Ｓ和反向连接重组体ｐＳＶ２－ＣＴ￣ＡＳ。

蛋白激酶Cξ亚型基因及UrotensinⅡ基因中各有一个单核苷酸位点与中国北方汉族人群2型糖尿病相关

目的采用单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)标记,在以往中国北方汉族人群2型糖尿病相关基因定位区域(1p36.33-p36.23)内寻找疾病易感基因位点。方法通过生物信息学方法在公共SNP数据库中查找定位区域内10个候选基因中的23个SNP位点,用单碱基延伸反应(singlebaseextension,SBE)法对北方汉族人群散发2型糖尿病患者(192例)及对照组(172例)进行分型及病例-对照关联分析。结果23个SNP位点中有8个为中国北方人群常见SNP位点;对病例组和对照组分型分析显示,位于蛋白激酶Cξ亚型(PRKCZ)基因中的一个位点(rs436045)及urotensinⅡ(UTS2)基因中的一个位点(rs228648),其等位基因频率在两组的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论上述两个SNP位点可能和中国北方汉族人群2型糖尿病相关,以上结果为进一步研究上述两个位点所在的基因与2型糖尿病的关系提供了理论依据。

细胞提取液直接等电聚焦电泳条件的改进

等电聚焦电泳(IEF)作为生化分离分析的一种重要的方法,通常须遵循一些共同的操作规则,如样品的脱盐、适当的上样量和两性载体的选择等。厂家在出品IEF仪时所提供的操作说明书通常只适用于纯品或一般样品,按此要求。

中国人CAPN10基因单核苷酸多态性的分布及其在北方汉族2型糖尿病人群中的关联分析

目的检测始发现于墨西哥裔美国人群中的2型糖尿病易感基因CAPN10的单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)在中国人群中的分布,并探讨其与中国北方汉族人群2型糖尿病的关联关系。方法对27份取自中国不同民族人群DNA标本进行测序,以确定CAPN10基因中的SNP位点分布;选择其中5个位点,用单碱基延伸(single-baseextension,SBE)法对156例北方汉族正常人和173例2型糖尿病患者DNA标本进行SNP分型及病例-对照关联分析;对文献报道的易感基因CAPN10中的3个阳性位点进行单体型分析,并对其中1个位点在68个2型糖尿病家系(377例)中进行传递不平衡检验(transmission-disequilibriumtest,TDT)和同胞传递不平衡检验(sibtransmission-disequilibriumtest,STDT)。结果在所检测的8936bp长度范围内共检出40个SNP,平均约223bp出现1个SNP,各多态性在基因中呈不均匀分布;中国人CAPN10的SNP与文献报道的墨西哥裔美国人群中该基因多态性存在较大的差异;所选择的5个SNP位点等位基因频率分布在正常人群和2型糖尿病患者间的差异无统计学意义(P>0.05);上述3个阳性位点单体型频率在两组人群间差异无统计学意义(P>0.05);TDT和STDT均无统计学意义(P>0.05)。结论CAPN10基因SNP具有民族差异;

甲胎蛋白特异启动元件介导的肝癌靶向性基因治疗的体外实验研究

目的采用体外培养的肿瘤细胞系探讨甲胎蛋白特异启动元件介导的靶向性肝癌基因治疗。方法将２．２ｋｂ的重组人甲胎蛋白（ＡＦＰ）基因顺式调控元件克隆于胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因的上游，构建逆转录病毒载体ＬＸ２．２ＣＤ。再以此载体和另一不含ＡＦＰ基因调控元件的逆转录病毒载体ｐＣＤ２分别转染３种肝癌细胞系和１种肺腺癌细胞系，筛选出整合ＣＤ基因的抗Ｇ４１８克隆，并进行细胞生长抑制实验。结果５氟胞嘧啶（５ＦＣ）对用ＬＸ２．２ＣＤ转染的ＡＦＰ阳性肝癌细胞具有特异杀伤作用，而对ＡＦＰ阴性的肝癌细胞和非肝癌细胞无杀伤作用。结论在细胞水平实现了对ＡＦＰ阳性肝癌细胞的靶向性基因治疗。

蛋白激酶Cξ亚型基因内SNP的连锁不平衡分析

目的对中国北方汉族人群2型糖尿病候选易感基因蛋白激酶Cξ亚型(PRKCZ)内的单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphismSNP)标记进行群体相关分析及连锁不平衡linkagedisequilibriumLD分析,寻找疾病相关单体型。方法通过生物信息学方法在公共SNP数据库中查找PRKCZ基因中的SNP位点,用单碱基延伸反应(singlebaseextensionSBE)法对北方汉族散发2型糖尿病患者173例及对照组152例进行分型及病例-对照关联分析和LD分析,构建SNP单体型区段(haplotypeblock)。结果PRKCZ基因中有多个SNP位点与疾病相关,它们在病例组和对照组构成不同的haplotypeblock结构。由5个SNP位点组成的单体型频率在两组人群间存在显著差异。结论PRKCZ基因内由5个SNP位点组成的单体型可能和中国北方汉族人2型糖尿病相关,进一步从统计学角度证实了PRKCZ基因为该人群疾病易感基因。

应用单核苷酸多态性技术筛查2型糖尿病易感基因

目的利用单核苷酸多态性(SNP)标记熏在中国北方汉族2型糖尿病相关基因定位区域(1p36.33-p36.23、1q24.3-25.1及1q42.12-42.13)内寻找疾病易感基因位点以及与疾病相关的单倍型。方法通过公共SNP数据库和对样本库全基因测序寻找SNP位点的途径,在定位区域内选择了33个候选基因中的124个SNP位点,用测序法对236例北方汉族散发2型糖尿病患者及152例正常对照个体进行SNP基因分型及病例-对照关联分析,并对具显著性差异的SNP位点进行单倍型分析。结果124个SNP位点中有4个SNP位点的分布频率在病例组和正常对照组存在显著差异穴P<0.05雪,分别为sAC基因中的rs203849(P=0.005,OR=1.60)和rs203826(P=0.016,OR=1.60),PANK4基因中的rs7535528(P=0.028,OR=1.45)和CASP9基因中的rs884363(P=0.043,OR=1.37)。在这4个SNP位点构成的组合型中发现,有2种组合型的频率分布在病例组与对照组之间差异有显著性穴P<0.001雪。此外,对sAC基因的单倍型分析发现,有4种单倍型与疾病发生相关。结论sAC、PANK4和CASP9基因为中国北方汉族人群2型糖尿病候选易感基因,这3个基因可能在2型糖尿病易感性上有协同作用。

全反式维甲酸与单纯疱疹病毒胸苷激酶基因对胶质瘤的协同杀伤作用

背景与目的:细胞间缝隙连接通讯(gapjunctionalintercellularcommunication,GJIC)是介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessimplixvirusthymidinekinase,HSV-tk)基因治疗中旁观者效应的重要机制。全反式维甲酸(all-trans-retinoticacid,ATRA)可能通过上调胶质瘤细胞GJIC和抑制肿瘤细胞生长的双重作用,促进HSV-tk基因治疗的疗效。本研究的目的在于证实HSV-tk和ATRA联合应用对胶质瘤细胞的协同杀伤作用。方法:分别以1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L3种浓度的ATRA作用于培养的大鼠C6胶质瘤细胞,并研究ATRA对C6胶质瘤细胞分化、增殖、GJIC及connexin43(Cx43)基因转录等方面的影响。将C6细胞与稳定表达HSV-tk基因的C6tk细胞按不同比例混合,分别在含GCV和不同浓度ATRA或仅含GCV的培养基中培养,并于药物作用7天后用MTT法检测旁观者效应。结果:经3种浓度的ATRA作用后,C6胶质瘤细胞均显示出细胞分化的形态学特征。C6细胞的增殖也明显受到ATRA的抑制,绝大多数的活细胞都静止于G1期,100μmol/LATRA对C6细胞增殖的抑制尤其明显,并诱导细胞凋亡。经3种浓度的ATRA分别作用后,C6细胞的GJIC也明显提高,而Cx43基因的转录未受明显影响。旁观者效应实验的结果显示,3种浓度的ATRA均可以明显增强旁观者效应。

中国人2型糖尿病的基因分型和定位

目的 对中国人２ 型糖尿病即非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）家系基因组ＤＮＡ进行基因分型及基因定位。 方法 采用分布于１～２２ 号染色体及Ｘ染色体上的３５８ 对荧光标记的微卫星引物，进行多重ＰＣＲ，ＰＣＲ扩增产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）分离，然后进行电泳图谱及信息收集。应用ＧｅｎｅｓｃａｎＴＭ ３．０ 软件和Ｇｅｎｏ－ｔｙｐｅＴＭ ２．１ 软件进行基因分型和基因定位。 结果 在３５ 个家系中共有１９３ 个微卫星标志能准确进行基因分型。共得４１ ４９５ 个基因型。经过多点连锁分析和患病同胞对分析，初步确定在１，１０，１２，１８，２０号染色体上存在ＮＩＤＤＭ 相关基因位点。 结论 用全基因组扫描技术可以对中国人２ 型糖尿病相关基因位点进行基因分型和基因定位。

中国汉族人群2型糖尿病30个候选基因相关性分析

目的鉴定中国汉族人群2型糖尿病易感基因。方法对30个候选基因进行单核苷酸多态性(SNP)的发现、基因分型,并进行单倍型构建。对群体资料的SNP和单倍型数据进行病例-对照研究,并在77个trio家系中进行传递不平衡检验(TDT)。应用报告基因法对1个阳性SNP位点rs5210的基因表达调控作用进行分析。结果KCNJ11基因的几个SNP位点与中国汉族人群2型糖尿病相关,其中rs5219的等位基因频率,rs5210、rs2285676和rs5219的基因型频率,以及由rs5219和rs5215构成的单倍型GA的频率,在病例组和对照组间差异具有显著性(P<0·05),单倍型GA的TDT检验也具有统计学差异(P<0·05)。报告基因分析显示rs5210两个等位基因的基因表达调控作用差异具有显著性(P<0·05)。结论KCNJ11基因是中国汉族人群2型糖尿病易感基因之一。

自体成纤维细胞注射移植的存活性初探

为观察自体成纤维细胞移植后在体内成活和分泌胶原情况 ,体外培养兔自体成纤维细胞 ,部分细胞3H TdR掺入 ,标记和未标记的 8× 10 1 0 L- 1 细胞悬液 ,分别注射于兔耳背侧真皮浅、深层交界处 3次。 5月后取材 ,进行放射自显影 ,H E染色 ,天狼猩红染色观察 ,发现3H TdR掺入标记的细胞依然存活 ;注射部位出现大量的幼稚型成纤维细胞 ;真皮厚度增加 ,实验组为 14 0 2 6± 6 31(× 5 μm) ,对照组为 12 7 6 6± 4 78(× 5 μm) (P <0 0 1) ;Ⅲ型胶原含量增加 ,实验组为 2 6 3± 1 4 1(cm2 ) ,对照组为 1 0 5± 0 90 (cm2 ) (P <0 0 5 )。表明自体成纤维细胞注射移植后 ,能够在体内长期存活并分泌新生Ⅲ型胶原 ,为临床应用提供了初步、可靠的理论依据。

细胞骨架与血糖调节

细胞骨架由微丝、微管和中间丝构成,参与血糖调节这一复杂的生理过程,在胰岛素分泌、胰岛素功能和糖代谢相关酶类的细胞内分布等方面具有重要的作用。本文将从以上三个方面,对细胞骨架与血糖调节的关系加以综述。

一个参与血糖调节的新基因

目的克隆血糖调节基因。方法按本室以往建立的方法制备大鼠血糖自动调节模型,以灌输生理盐水为对照;取其骨骼肌,采用差异显示技术(DDRT-PCR),获得差异表达基因片段,经狭缝杂交和Northern杂交分析,排除假阳性片段,确定真正的差异表达序列标签(EST),并以其为探针筛选大鼠骨骼肌cDNA文库。结果获得一个新的全长cDNA,命名为Fang-2,GenBank收录号为AF399874。经采用Blast软件(NCBI)分析显示,Fang-2是人类troponinT在大鼠中的同源物,其同源性为78%,表明该家族蛋白具有保守性。在高浓度的葡萄糖刺激大鼠后,和对照大鼠相比,Fang-2的表达下降。结论从大鼠骨骼肌中克隆到一个参与血糖调节的新基因,该基因可能通过其表达下调控制或部分控制某些目前未知的机制而达到调节血糖水平的作用。

Fudenine———个新的与血糖调节相关的膜蛋白

确定 Fudenine是否为一个新的膜蛋白。方法用绿色荧光蛋白（ GFP）对 Fudenine进行体内定位，以 GFP(一种代谢稳定的蛋白 )定位于细胞质中，作为对照。将融合质粒 Fudenine- GFP瞬时转染 CBRH7919和 L- 6TG两种细胞， 48 h后荧光显微镜下观察。结果报告质粒 GFP表达产物定位于胞质中，而融合质粒产物定位于细胞膜上。结论 Fudenine是一种膜蛋白，它可能与其同源基因 prominin和 AC133抗原有相似的功能，在血糖调控和信号转导等方面发挥作用。

中国汉族人群Ⅱ型糖尿病家系1号染色体易感基因的精细定位

目的通过增加微卫星位点密度、扩大样本量,对以前定位到1号染色体上的中国北方汉族人群2型糖尿病相关易感基因研究结果进行验证。方法运用基因组扫描的方法,经多重PCR、电泳、GeneScan及Genotyper程序分析获取位点信息,最后经参数及非参数连锁分析,得到相关的P值、NPL值(Z值)。结果共扫描了5个区域34个位点,检出约12000个基因型。经GENEHUNTER2.0软件分析,其中的8个位点可能与糖尿病相连锁(P<0.05,NPL值最大为2.17),它们分布于3个区域,尤其是第1个区域(1p36.3-1p36.23),其每一个位点都显示与糖尿病相连锁,前后分布于1个长达16.9cM的范围内。另外2个区域未检出阳性结果。结论证实了全基因组扫描所获得的结果。尤其是,在所研究的1P末端区域,所有研究位点都显示与疾病连锁,这些位点分布在一个很宽的范围内,提示该区域可能蛰伏着多个糖尿病易感基因。