葛根素抑制大鼠膀胱逼尿肌舒缩活动实验

目的探讨葛根素对大鼠逼尿肌舒缩活动的影响及其作用机制。方法 56只SD雌性大鼠于T10处横断脊髓建立骶上脊髓损伤大鼠模型,随机分为葛根素10 mg组、葛根素20 mg组、葛根素30 mg组、对照组,每组14只,按组别分别腹腔注射葛根素注射液10 mg、20 mg、30 mg及等体积0.9%氯化钠注射液,1次/d,连续1个月后,行尿动力学检测,比较各组膀胱最大容量(maximum bladder capacity,MBC)、漏尿点压(bladder leak point pressures,BLPP)及膀胱收缩频率(contraction frequency,CF),Western blot检测葛根素组膀胱T型钙离子通道亚型(α1G)及酪氨酸激酶受体(C-kit)表达情况。结果尿动力学显示葛根素组MBC[(3.375 0±0.074 7)ml]较对照组[(0.804 9±0.114 1)ml]增大,BLPP[(23.82±0.31)cm H2O(1 cm H2O=0.098 k Pa)]和CF[(5.24±0.12)次/s]均较对照组BLPP[(29.62±1.82)cm H_2O]、CF[(8.72±0.38)次/s]下降(P<0.01);葛根素组内MBC 30 mg组[(3.982 6±0.162 7)ml]>20 mg组(3.261 9±0.135 2)ml和10 mg组(2.836 7±0.216 5)ml,BLPP10 mg组[(25.08±1.71)cm H_2O]、20 mg组[(23.78±1.37)cm H_2O]和30 mg组[(22.68±1.91)cm H_2O]依次降低,CF在10 mg组、20 mg组、30 mg组依次降低,分别为(6.13±0.15)次/s、(5.21±0.22)次/s、(4.34±0.12)次/s(P<0.01);Western blot示葛根素10 mg组、20 mg组、30 mg组α1G表达量依次下降,分别为(0.832±0.065)、(0.541±0.051)、(0.324±0.059),C-kit表达量在葛根素10 mg组、20 mg组、30 mg组中分别为(0.673±0.059)、(0.519±0.019)、(0.316±0.038)(P<0.01)。结论葛根素可抑制膀胱逼尿肌的收缩活动,其机制可能与膀胱逼尿肌内C-kit和α1G下调有关。

5-Aza-CdR对DU145前列腺癌细胞系RNF180基因去甲基化作用的初步研究

目的通过观察去甲基化药物5-Aza-Cd R对DU145前列腺癌细胞系RNF180基因的影响,探讨前列腺癌细胞系中肿瘤抑制基因RNF180失活的机制和原因。方法运用MTT法检测不同浓度(0、1、2、5、10、15、20μmo I/L)5-Aza-Cd R对前列腺癌细胞增殖能力的影响,同时筛选出1个最适药物浓度(5μmo I/L);分别采用Western blotting、实时PCR、甲基化特异性PCR(MSP)法检测最适药物浓度处理前后前列腺癌细胞中RNF180的表达情况。结果在一定范围内,5-Aza-Cd R对前列腺癌细胞DU145增殖能力的影响随着药物浓度的增加和药物处理时间的增长而加强(P<0.05);最适药物浓度处理后的前列腺癌细胞中RNF180蛋白及m RNA的表达量比处理前明显升高(P<0.05),而启动子区的甲基化程度明显降低。结论 5-Aza-Cd R能够逆转RNF180基因在DU145前列腺癌细胞中的高甲基化状态,解除RNF180基因表达沉默的状态。

RNF180启动子区甲基化在前列腺癌中的作用机制

目的通过检测RNF180启动子区甲基化改变来阐明前列腺癌发生和演进过程中RNF180表达的意义。方法分别采用Western blotting、RT-PCR、甲基化特异性PCR(MSP)及亚硫酸氢盐测序(BSP)法检测人前列腺癌细胞系(PC3、LNCap和DU145)与人正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)中RNF180的表达情况;采用免疫组化法检测人前列腺癌组织芯片上前列腺癌及癌旁组织中RNF180蛋白的表达。结果前列腺癌细胞中RNF180基因的m RNA及蛋白的表达量明显低于正常前列腺上皮细胞(P<0.05),而前列腺癌细胞中RNF180启动子区的甲基化水平却明显高于正常前列腺上皮细胞;RNF180蛋白在前列腺癌组织中的表达量明显低于相应的癌旁组织。结论 RNF180启动子区在前列腺癌细胞中呈高度非完全性甲基化状态,这也可能是RNF180在癌细胞和癌组织中表达下降或沉默的原因之一。

钩藤碱抑制骶上脊髓损伤大鼠膀胱T型钙通道的机制

目的探讨钩藤碱对骶上脊髓损伤（SCI）大鼠的膀胱功能障碍治疗作用与膀胱逼尿肌T型钙通道受体亚型（alG）表达改变的关系。方法将60只SD大鼠随机分为钩藤碱组、对照组、假手术组，每组20只，造模后分别腹腔注射钩藤碱5mr／（kg·d）、等体积生理盐水、不给予药物干预。用尿动力仪评估膀胱功能；膀胱组织苏木素-伊红（HE）染色；用免疫组织化学法检测膀胱酪氨酸激酶受体（C—kit）、alG的表达。结果钩藤碱组膀胱最大容量较对照组增加（64．00±0．42）％、漏尿点压及收缩频率分别下降（16．004-0．31）％和（13．00±0．26）％（P〈0．01）。HE染色显示钩藤碱组逼尿肌紊乱及水肿程度较对照组低。免疫组织化学检测显示钩藤碱组大鼠C—kit、alG受体表达量较对照组明显下降。结论钩藤碱可抑制膀胱Cajal间质细胞（ICCs）表面ctlG的表达，从而降低骶上脊髓损伤后大鼠膀胱逼尿肌兴奋性。