丹参酮对大鼠睑板腺上皮细胞增生、分化及脂质合成的影响

目的观察不同剂量丹参酮的2种主要单体成分隐丹参酮和丹参酮ⅡA对体外原代培养的SD大鼠睑板腺上皮细胞增生、分化及其脂质合成的影响。方法取清洁级2月龄SD大鼠,分离取出双眼睑板腺组织并与3T3滋养细胞共培养5d。隐丹参酮和丹参酮ⅡA用二甲基亚砜(DMSO)配制成不同浓度,按照培养液中添加的隐丹参酮和丹参酮ⅡA浓度不同将混合培养的细胞分为0.125μmol/L药物组、0.250μmol/L药物组、0.500μmol/L药物组、1.250μmol/L药物组和2.500μmol/L药物组,分别加入相应浓度的隐丹参酮或丹参酮ⅡA处理细胞48h,溶剂对照组仅加入相应体积的DMSO溶剂。采用免疫荧光染色法测定睑板腺组织冰冻切片和睑板腺细胞克隆细胞中角蛋白14(K14)和p63的定位和表达;采用实时荧光定量PCR法检测睑板腺细胞克隆中K16、细胞增生相关抗原(Ki67)及CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)的基因表达情况;采用结晶紫染色和油红O染色法分别评估睑板腺上皮细胞的克隆形成率和脂质合成情况。结果睑板腺细胞体外原代培养至第4~5天可见克隆形成,至培养第7天克隆面积明显增大,克隆细胞中p63和K14蛋白表达阳性。与溶剂对照组比较,0.500μmol/L隐丹参酮组、1.250μmol/L隐丹参酮组和2.500μmol/L隐丹参酮组Ki67mRNA相对表达量明显升高,0.500μmol/L丹参酮ⅡA组和1.250μmol/L丹参酮ⅡA组细胞中Ki67mRNA相对表达量明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);不同浓度隐丹参酮或丹参酮ⅡA组细胞中K16和C/EBPαmRNA相对表达量总体比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。睑板腺细胞克隆内未见油红O染色,克隆边缘交界处细胞团出现堆积状油红O阳性染色。1.250μmol/L隐丹参酮组睑板腺细胞平均克隆形成率为(2.55±0.20)%,高于溶剂对照组的(2.05±0.13)%,差异有统计学意义(t=4.379,P<0.05);1.250μmol/L丹参酮ⅡA组睑板腺细胞的平均克隆形成率为(2.25±0.20)%,与溶剂对照组比较差异无统计学意义(t=1.616,P>0.05)。结论隐丹参酮和丹参酮ⅡA可以促进睑板腺细胞增生,但不影响睑板腺上皮细胞的分化及脂质合成。隐丹参酮可促进睑板腺细胞体外克隆的形成。

一种基于胚胎干细胞构建角膜上皮样组织的新方法

目的利用Rock抑制剂联合低氧-常氧培养方式构建基于胚胎干细胞(ESCs)的组织工程角膜上皮。方法应用贴壁培养作为分化方式,用全反式维甲酸(RA)+骨形态发生蛋白4(BMP4)诱导人源ESCs细胞系H1向角膜上皮样细胞分化。以SHEM与KSFM培养基1∶2混合配比作为扩增基础培养基,分别添加或不添加Rock抑制剂Y27632,扩增ESCs来源的角膜上皮样细胞。将诱导后的角膜上皮样细胞接种于去上皮羊膜载体上,在低氧、常氧、低氧-常氧相结合等不同条件下构建组织工程角膜上皮。通过形态学、实时荧光定量PCR反应(RTFQ-PCR)、免疫荧光法检测诱导效果、ESCs来源角膜上皮样细胞的扩增能力及组织工程角膜上皮表型。结果与对照组比较,诱导组诱导后8 d ESCs标志物Oct4 mRNA,Notch信号通路相关因子Notch1、Jagged1 mRNA以及Wnt信号通路的相关因子c-myc和Cyclin D1 mRNA的相对表达量显著降低,表皮外胚层标志物p63和K18 mRNA的相对表达量显著增加,差异均有统计学意义(t=14.63、20.15、93.50、11.60、19.30、18.44、22.63,均P<0.05)。与Y27632未添加组相比,Y27632添加组细胞的p63、K14 mRNA相对表达量以及Notch信号通路受体Notch1和Jagged1 mRNA相对表达量显著升高,Wnt信号通路下游靶向基因c-myc和CylinD1 mRNA相对表达量明显降低,差异均有统计学意义(t=20.29、59.22、2.90、39.59、5.32、10.14,均P<0.05);2个组K18 mRNA的相对表达量无明显变化,差异无统计学意义(t=1.38,P>0.05)。Y27632添加组用低氧-常氧相结合的方式构建ESCs来源的上皮片较持续低氧或常氧培养复层化更明显,排列更紧密,并全层表达上皮细胞标志物Pan-CK和K18及上皮干细胞标志物p63和K14。结论Y27632的添加可增加ESCs来源角膜上皮样细胞的增生能力,激活Notch信号通路,抑制Wnt信号通路。采用低氧-常氧相结合的方式,利用添加Y27632的培养基扩增构建ESCs来源的组织工程角膜上皮有助于上皮片的复层化。

内源性鼻疽诺卡菌眼内炎一例

患者,男,67岁。因"左眼突然眼痛、视力下降伴同侧头痛10 d"于2019年12月30日在厦门大学附属厦门眼科中心就诊。患者3个月余前四肢及躯干无明显诱因出现斑块状皮下淤血(见图1),就诊于当地医院,诊断为"过敏性皮炎",自诉涂抹"藏药"治疗2个月后缓解(用药情况不详)。近期患者体质量减轻约10 kg,常感乏力、头晕,病因不明。既往有高血压病、糖尿病以及肾病病史数年,药物控制基本稳定。有青霉素、磺胺类药物过敏史。无眼部外伤史及手术史。