缺氧诱导因子1α基因修饰牙髓干细胞的体外成骨及成血管分化

背景:如何有效地修复和重建临界骨缺损是临床医学的难题。牙髓干细胞作为转基因靶细胞修复受损组织或器官具有一定优势。目的:探究缺氧诱导因子1α对牙髓干细胞体外成骨及成血管的作用。方法:选取临床上12-18岁患者因正畸治疗需要拔除的健康、完整双尖牙的牙髓组织分离、培养牙髓干细胞,实验组将缺氧诱导因子1α基因转染至牙髓干细胞,对照组不做任何处理,采用qPCR检测缺氧诱导因子1α的基因表达以及Western blot检测成骨及成血管因子的蛋白表达。结果与结论:(1)牙髓干细胞为短梭形的成纤维样细胞,细胞呈集落式生长。(2)缺氧诱导因子1α基因稳定转染至牙髓干细胞内,随着时间延长缺氧诱导因子1α基因表达逐渐增高,至14 d达到高峰,21 d明显降低。(3)与对照组相比,实验组的成血管相关因子表达水平更高。转染后1 d,血管内皮生成因子、基质细胞衍生因子1、促血管生成素2、胎盘生长因子蛋白表达明显增高,4 d达到高峰,随后实验组成血管相关蛋白表达虽略有降低,但与对照组相比明显增高。(4)与对照组相比,实验组的成骨相关因子表达水平更高。转染后1 d,人骨形态发生蛋白2、骨钙蛋白、Runt相关转录因子2蛋白表达明显增高,4 d达到高峰。(5)结果表明,缺氧诱导因子1α能够促进牙髓干细胞成骨及成血管因子的表达。

多发性钙化上皮瘤1例及基因检测分析

钙化上皮瘤(calcified epithelioma,CE)也称为毛母质瘤(pilomatricoma,PM),是起源于毛囊外根鞘细胞的外胚层良性肿瘤。一般单发于上肢、躯干及面颈部,多发性钙化上皮瘤在临床上更是罕见。本文报告1例多发性钙化上皮瘤并进行相关基因检测,结合相关文献进行讨论,为临床诊疗提供参考。

曲拉通X-100对制备脱细胞真皮基质影响的实验研究

目的探讨由曲拉通X-100制备脱细胞真皮基质(ADM)的最佳浓度及作用时间,为表皮细胞种植于ADM形成组织工程化口腔黏膜提供实验依据。方法取大鼠2cm×2cm大小的皮肤56块,置于0.25% Dispase试剂中4C下孵育48小时,轻轻去掉表皮,随机分成7组,分别浸入0.1%、0.2%、0.3%、0.5%、1%、3%、10%的曲拉通X-100中作用36～80小时。取标本制作组织切片,HE染色,大体、光镜观察。结果光镜检查结果显示,制备出的脱细胞真皮基质主要由胶原纤维网架构成;曲拉通X-100浓度较低(0.1%～0.5%)时,皮肤脱净细胞成分的时间随浓度升高而逐渐缩短,各浓度间有明显差异(P均<0.01),而当浓度>0.5%时,皮肤脱净细胞时间与浓度无关,组间无显著差异(P>0.05)。结论曲拉通X-100制备大鼠ADM的最佳浓度为0.5%,时间为(45±2.82)小时。

一种脱细胞真皮基质制备方法的初探

目的 :应用Dispase和TritonX - 1 0 0处理大鼠皮肤 ,探索脱细胞真皮基质的制备条件。方法 :将大鼠皮肤用Dispase 4℃条件下孵育 ,去表皮后 ,再用TritonX - 1 0 0室温孵育 ,并不停地摇荡 ,取标本 ,常规HE染色 ,光镜观察。结果 :单独应用Dispase处理大鼠皮肤即使作用 72h ,仍不能将皮肤中的所有细胞成分去除 ,如再用TritonX - 1 0 0处理 ,可有效地去除皮肤中的细胞成分。结论 :大鼠皮肤经Dispase4℃条件处理 4 8h ,去表皮后 ,再用TritonX - 1 0 0室温处理 4 8h并不停地摇荡 ,可完全去除大鼠皮肤中的所有细胞成分 。

成釉细胞瘤的临床病理及其与复发的关系

目的对比分析成釉细胞瘤不同类型的临床病理特点及其与复发的关系。方法对228例成釉细胞瘤患者的病理类型和复发率进行回顾性研究。结果228例成釉细胞瘤患者中有一般型成釉细胞瘤145例,单囊型成釉细胞瘤80例,周边型成釉细胞瘤3例;前两种病理类型患者平均就诊年龄(岁)分别为32.63±14.68和24.83±10.15,两者间有显著性差异(P<0.001);平均病程(月)分别为25.54±38.24和10.99±20.36,两者间有显著性差异(P<0.005)。一般型和单囊型成釉细胞瘤复发率分别为31.72%和15.00%,两者间有显著差异(P<0.01);在一般型成釉细胞瘤中丛状型和滤泡型两种主要亚型的复发率分别为17.65%和12.90%,两者间无显著差异(P>0.05)。结论单囊型成釉细胞瘤多见于青少年,发病年龄较一般型小,病程较一般型短,复发率比一般型低;而一般型中两种主要类型丛状型和滤泡型的复发率无明显差别。

153例成釉细胞瘤X线分析

目的总结成釉细胞瘤的X线特点。方法对病理确诊的有完整X线资料的153例成釉细胞瘤病例的X线表现进行回顾性分析,比较不同组织病理类型的成釉细胞瘤X线表现。结果①本组包含一般型成釉细胞瘤96例,单囊型成釉细胞瘤57例;有多房型X线影像82例(53.59%),单房型X线影像71例(46.41%);②本组一般型成釉细胞瘤X线表现为单房型35例(36.46%),多房型61例(63.54%)。本组单囊型成釉细胞瘤X线表现为单房型36例(63.16%);多房型21例(36.84%);两种组织类型中单房型和多房型X线表现率比较有显著统计学差异(P(0.05)。③本组有滤泡型成釉细胞瘤13例,其中X线表现为蜂窝型7例(53.85%);非滤泡型一般型成釉细胞瘤83例,X线表现为蜂窝型5例(6.02%)。二组中蜂窝型X线表现所占比例比较有显著差异(P(0.05)。结论单囊型成釉细胞瘤主要表现为单房型影像,一般型成釉细胞瘤主要表现为多房型影像,蜂窝型影像多见于滤泡型成釉细胞瘤。

高速涡轮钻在下颌阻生第三磨牙拔除中的临床应用

目的评价高速涡轮钻法拔除下颌阻生第三磨牙作用,探求一种为临床医师及患者所乐于接受的较为简单易行拔除方法。方法门诊下颌近中低位阻生及水平阻生第三磨牙250例随机分为实验组130例(采用高速涡轮钻拔除)和对照组120例(采用凿劈法拔除),比较两组手术时间、术后疼痛、张口受限程度及干槽症发病率。结果纳入观察范围的250颗牙齿,两组手术时间及干槽症的发病率比较有显著统计学差异(P<0.05);两组术后疼痛和张口受限程度的构成比存在显著性差异(P<0.05)。结论高速涡轮能准确断开牙齿位置,卸载邻牙阻力彻底,去除骨阻力快捷,能很好的执行治疗计划,明显减轻病人痛苦及恐惧心理,显著缩短手术时间,明显减轻患者术后疼痛、张口受限,避免了干槽症等不良反应。

大鼠萎缩腮腺中肌上皮细胞增殖状态的观察

目的 采用免疫组化双染技术观察大鼠腮腺主导管结扎后萎缩腺体内肌上皮细胞（myoepithelial cell, MEC）的增殖变化规律。方法 采用Wistar大鼠建立腮腺主导管结扎动物模型,结扎大鼠右侧腮腺主导管诱导腺体萎缩,HE染色观察正常腮腺及主导管结扎后1、3、5、7、14、21、30、60、90、120、150、180天萎缩性腮腺的组织学变化,采用免疫组化双重染色法定量分析MEC在腮腺萎缩不同时间点的数量、增殖率及分布情况。结果 HE染色示：主导管结扎后,腮腺腺泡细胞出现凋亡消失,大量导管样结构形成,纤维组织增生并伴有炎性细胞浸润。免疫组化染色示：导管结扎后第3天,MEC发生快速增殖,5天时增殖率达到顶峰,随后MEC增殖率降低,30～150天时MEC增殖率均维持较低水平,180天时难以观察到增殖的MEC且MEC细胞总数显著减少。结论 结扎腮腺导管诱导腺体萎缩的过程中,MEC在萎缩早期表现出较强的增殖能力,5天时达到顶峰,随后增殖活力下降,30～150天MEC增殖活性均处较低水平,180天时已观察不到增殖的MEC。

脱细胞异体真皮基质研究进展

脱细胞真皮基质是近几年国外兴起的一种真皮替代物,是利用特定的方法将皮肤中的细胞成分去除,仅保留真皮中含胶原网架的细胞外基质。本文重点介绍了脱细胞真皮基质的制备、应用以及其免疫原性等特点。

腮腺主导管结扎后腺体的组织学变化

目的:探讨腮腺导管结扎后腺体组织的生物学变化。方法:用SD大鼠建立动物模型,将其右侧腮腺主导管结扎;定期获取标本,制备组织切片,利用苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色及形态计量等方法,观察术后不同阶段腮腺组织中腺泡、肌上皮细胞、导管及间质的形态变化及体积分数。结果:腮腺主导管结扎后,腺体组织开始萎缩,其中腺泡体积分数逐渐减少,至30d时已完全消失;间质、导管及肌上皮细胞体积分数增加;各时间组中各组织成分的体积分数与对照组均有显著差异(P<0.05);萎缩后的腺体最终由扩张及增生的导管、间质(主要含纤维结缔组织)及肌上皮细胞组成。结论:腮腺主导管结扎后可促使腺体发生萎缩,从而避免腮腺区域术后涎瘘等并发症的发生。

Survivin和PDCD5在黏液表皮样癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨存活素(Survivin)和细胞程序性死亡因子5(PDCD5)在黏液表皮样癌组织中的表达及临床意义。方法:采用免疫组化Elivision二步法检测20例正常腮腺组织(A组)、40例多形性腺瘤(B组)及45例黏液表皮样癌(C组)组织中Survivin和PDCD5蛋白的表达情况。结果:(1)Survivin在A、B、C组中表达阳性率分别为10%、27.5%、55.6%(χ2=14.556,P<0.01),PDCD表达阳性率分别为85%、65%、33.3%(χ2=17.439,P<0.01);(2)Survivin和PDCD5的表达与肿瘤的分化程度、有无淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05);(3)Survivin和PDCD5在黏液表皮样癌中的表达呈负相关(χ2=4.500,P=0.034,γs=-0.316)。结论:Survivin高表达,PDCD5低表达在在黏液表皮样癌发生发展中可能发挥作用。

以Triton X-100和脱氧胆酸钠为萃取剂制备兔脱细胞神经基质:有最佳时间吗?

背景：与其他脱细胞神经基质制备方法相比，化学萃取的去细胞同种异系（体）神经组织内细胞成分可以较完全地清除，进一步减少了发生免疫排斥反应的可能性，并能较好地保留神经支架的完整性，但制备过程中的相关问题有许多尚需讨论。目的：应用Triton X-100和脱氧胆酸钠化学萃取剂处理新西兰大白兔的面神经，提出脱细胞神经基质制备的所需试剂及最佳时间。设计、时间及地点：随机分组，对比观察细胞学实验，于2009-02/06在滨州医学院附属医院口腔科学实验室完成。材料：3月龄新西兰大白兔15 只，体质量2.5~3.0 kg。Triton X-100、脱氧胆酸钠由美国Sigma 公司提供。方法：取兔双侧面神经，在手术显微镜下去除神经表面的脂肪组织和神经外膜，将其分为每段10 mm长，共66条。将66条神经随机分成11 组，每组6条。除正常对照组外，其余10 组均放入培养皿中，先用蒸馏水室温下浸浴12 h ，以使细胞和髓鞘在低渗液体中膨胀，使部分细胞被胀破;然后将其中5组置于3% Triton X-100 12，24，36，48，60 h，室温下振荡，另外5组用3%Triton X-100和4%脱氧胆酸钠先后作用12 h（为1个周期），室温下反复振荡1~5个周期。主要观察指标：常规苏木精-伊红染色，光镜下观察去细胞程度及纤维管道结构的完整性。结果：单独应用Triton X-100处理神经即使作用60 h，仍不能将神经中的所有细胞成分去除，且许旺细胞基底膜有较大破坏；Triton X-100配合脱氧胆酸钠处理处理2个周期，可有效地去除神经中的细胞成分及神经纤维髓鞘和轴突，保留完整的许旺细胞基底膜，周边可见神经外膜和束膜。结论：大白兔面神经经 Triton X-100和脱氧胆酸钠室温处理2个周期，并不停地振荡，可完全去除神经组织中的所有细胞成分，保留完整的许旺细胞基底膜，得到脱细胞的神经基质。

Bcl-2及Bax在大鼠腺体萎缩过程中的表达及临床意义

目的：探讨大鼠腮腺主导管结扎后B cell lymphoma 2（Bcl-2）、Bcl-2-associated X protein（Bax）在腺体萎缩过程中的表达及临床意义。方法：对72只Wistar大鼠进行不同时间点腮腺主导管结扎建立腮腺萎缩模型;分别于术后1、3、5、7、14、21、30、60、90、150、180 d取材,采用免疫组织化学染色法检测Bcl-2、Bax在不同时间点的表达及分布情况。结果：主导管结扎后7 d多数腺泡细胞萎缩消失。Bcl-2和Bax在正常腺体组织中呈低水平表达。主导管结扎后不同时间点Bcl-2和bax在腺体中呈高表达,3 d时Bax表达达到峰值（1.99±0.10）,21 d时Bcl-2的表达达到峰值（3.02±0.10）,随后Bcl-2及Bax表达均降低。Bcl-2/Bax比值在1~21 d升高,随后降低并趋于稳定。结论：腮腺主导管结扎后Bax、Bcl-2的表达与腮腺萎缩过程相关。

碱性成纤维细胞生长因子促进血管再生的研究进展

缺血坏死是临床常见棘手问题。其发病机制至今仍不十分清楚，普遍认为血供不足和缺血再灌注损伤是其两个重要原因。bFGF对新生血管形成过程中的多个环节如毛细血管基底膜降解、内皮细胞迁移增生、胶原合成、小血管腔形成等均有明显促进作用，是体内发现的最为有效的促血管再生因子之一。

HIF-1α基因修饰的牙髓干细胞成血管的体外研究

目的 :探讨低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)基因对体外诱导牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)成血管分化方法并进行鉴定。方法 :取拔除的健康、完整的前磨牙标本20例,提取DPSCs细胞,采用Strol-1、CD146分子进行鉴定。根据DPSCs是否转染HIF-1α基因分为实验组和对照组,RT-PCR法测定HIF-1αm RNA表达,Western印迹检测培养1、4、7、14 d不同时间段HIF-1α及成血管相关因子VEGF、SDF-1、Ang-2及PDGF的表达情况。采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析。结果 :倒置相差显微镜观察,DPSCs多数细胞呈圆形、椭圆形类,免疫荧光观察到Strol-1、CD146均呈绿色荧光。实验组HIF-1α蛋白、m RNA随着时间的延长,表达水平越来越高,差异显著(P<0.05)。实验组转染后1、4、7、14 d后与对照组相比,HIF-1α蛋白、m RNA显著增高(P<0.05)。对照组血管相关因子VEGF、SDF-1、Ang-2和PDGF随时间的延长,其表达水平无显著差异(P>0.05)。实验组VEGF、SDF-1、Ang-2和PDGF随培养时间延长,其表达水平逐渐升高,不同时间点间差异显著(P<0.05)。与对照组相比,转染后1、4、7、14 d差异显著(P<0.05)。结论:HIF-1α基因修饰DPSCs能够成功体外诱导其血管分化作用,为进一步血管形成研究奠定了基础。

口腔颌面外科标准化病人资料库的建立及其在临床教学中的应用

标准化病人（standardized patients）,又称专业化模拟病人,指那些经过标准化、系统化培训后,能准确表现病人实际临床问题的正常人或病人。标准化病人在我国医学教育中的临床医学、口腔医学等教学领域以及住院医生培训、执业医师资格考试等方面逐步得到应用。

PBL病案分析法在口腔颌面外科临床教学中的应用

为探讨PBL病案分析法在口腔颌面外科临床教学中的应用效果,对采用PBL病案分析法教学与采用典型病例讲授法的学生进行对比研究。结果表明PBL病案分析法对提高教学质量,培养学生独立的临床思维和提高学生发现问题、思考问题与解决问题的能力具有积极意义。

标准化病人结合CBL模式在口腔外科教学中的应用

目的探讨标准化病人结合CBL教学在口腔颌面外科临床教学中的教学效果。方法将在我院见习的五年制口腔医学专业52名学生随机分为实验组和对照组。实验组采用SP+CBL教学模式,对照组采用CBL教学模式。比较两组学生的理论以及临床技能操作成绩,并采取调查问卷的形式了解学生对教学效果的评价。结果SP+CBL教学模式组理论成绩和临床技能操作成绩优于CBL教学模式组,差异有统计学意义(P<0.05),且问卷调查显示学生对SP+CBL教学模式效果满意(P<0.05)。结论SP+CBL教学模式优于传统的CBL教学模式,可以提高口腔颌面外科临床教学质量。

脱细胞真皮基质修复硬腭软组织缺损的实验研究

目的:研究同种异体脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)移植于硬腭黏骨膜与骨面之间,Ⅰ型胶原的变化情况,为其应用于腭裂软组织缺损的治疗提供实验依据。方法:取12周龄雌性Wistar大鼠60只,将大鼠硬腭黏骨膜从骨面剥离,将ADM基底膜面面向黏骨膜置入黏骨膜与骨面之间。分别于术后6、14、28、56 d随机处死动物15只,取硬腭部软组织标本行Ⅰ型胶原免疫组织化学染色观察,计数各时点标本中Ⅰ型胶原纤维束直径值,进行单因素方差分析。结果:ADM移植后Ⅰ型胶原纤维束直径值统计分析显示,Ⅰ型胶原纤维束逐渐进行改建,直径逐渐增加.移植后28 d达到正常真皮水平。结论:同种异体脱细胞真皮基质移植于硬腭黏骨膜和骨面之间.胶原改建良好,可以保护硬腭骨面免于坏死。

脱细胞真皮基质胶原网架转归的研究进展

脱细胞真皮基质是最近几年兴起来的一种天然生物材料,已有在神经外科、耳鼻咽喉、烧伤整形、牙周病学等学科领域的研究报道。笔者着重就其结构与特性、异体移植后的生物学转归及其机制的研究进展作一综述,为临床应用提供理论依据。