柴黄清胰活血颗粒对重症急性胰腺炎模型大鼠JAK2/STAT3信号通路的影响

目的观察柴黄清胰活血颗粒对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)模型大鼠炎症反应、病理损伤以及JAK2/STAT3信号通路的影响,为柴黄清胰活血颗粒的临床应用提供理论依据。方法将64只大鼠随机分为假手术组16只、模型复制组48只。模型复制组采用胰胆管注射5%牛磺胆酸钠进行模型复制。将模型复制成功的大鼠随机分为模型组、柴黄清胰活血颗粒组及阳性对照(AG-490)组,每组16只。假手术组、模型组、阳性对照组予以生理盐水灌胃,柴黄清胰活血颗粒组大鼠予以1.6 g·kg^(-1)柴黄清胰活血颗粒溶液灌胃,每8 h 1次。阳性对照组大鼠术前30 min腹部皮下注射8 mg·kg^(-1)的AG-490注射液。术后各组按照术后12、24 h的时间点分别取8只大鼠,暴露腹主动脉并采血、剪取胰腺组织。HE染色观察胰腺组织病理变化并进行病理评分;生化法检测血清淀粉酶、脂肪酶活性;ELISA法检测血清白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;免疫组化法检测胰腺组织p-JAK2、p-STAT3的活性;Western Blot法检测胰腺组织JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达水平。结果与相应时点的假手术组比较,模型组胰腺组织HE染色可见胰腺腺泡结构被明显破坏,有明显充血、水肿、白细胞浸润,病理评分升高,血清淀粉酶、脂肪酶含量增加,血清IL-6、IL-8、TNF-α水平升高,p-JAK2、p-STAT3免疫组化阳性表达量升高,JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达量上升(均P<0.05)。与相应时点的模型组比较,柴黄清胰活血颗粒组胰腺组织HE染色改善,病理评分下降,血清淀粉酶、脂肪酶活性下降,血清IL-6、IL-8、TNF-α水平下降,p-JAK2、p-STAT3免疫组化阳性表达量下降,JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达量下降(均P<0.05)。与柴黄清胰活血颗粒组比较,阳性对照组胰腺组织HE染色无明显变化,且病理评分、血清淀粉酶、脂肪酶、IL-6、IL-8、TNF-α及p-JAK2、p-STAT3免疫组化阳性表达量,JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达量的差异无统计学意义(P>0.05)。结论柴黄清胰活血颗粒可减轻重症急性胰腺炎模型大鼠炎症反应,其机制可能是通过抑制JAK2/STAT3信号通路,从而发挥对重症急性胰腺炎的治疗作用。

柴黄清胰活血颗粒对重症急性胰腺炎模型大鼠IKK/IκB/NF-κB信号通路的影响

目的:基于IKK/IκB/NF-κB信号通路探讨柴黄清胰活血颗粒对重症急性胰腺炎的作用机制。方法:将实验大鼠用随机法分为模型对照组、柴黄清胰活血颗粒8 g/kg组,每组16只,以3.5%牛磺胆酸钠制备大鼠重症急性胰腺炎(SAP)模型,另设正常对照组,各组灌胃相应药物或生理盐水,每4 h给药1次。术后12 h及24 h分别采集各组8只大鼠动脉血与胰腺组织。生化法检测各组大鼠血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIP);实时定量PCR技术检测胰腺组织NF-κB抑制物激酶(IKKβ)、核因子κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA;蛋白免疫印迹法检测IKK/IκB/NF-κB通路相关蛋白;免疫组化法检测核因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组血清AMY和LIP活性均明显升高(P<0.05);12 h、24 h胰腺匀浆液中IKKβ、IκBαmRNA明显上调(P<0.05),p-IκBα蛋白在12 h和24 h均明显上调,IκBα蛋白两个时间均明显下调(P<0.05)。与模型对照组比较,柴黄清胰活血颗粒血清12 h(1.6 g/kg×3次)、24 h(1.6 g/kg×5次)AMY和LIP活性、胰腺匀浆液中IKKβmRNA、IKKβ和p-IκBα蛋白表达量均下降,NF-κB p65阳性表达量及评分均降低,24 h较12 h表达更低,IκBαmRNA及IκBα蛋白表达量升高(P<0.05)。结论:柴黄清胰活血颗粒治疗SAP的机制可能与抑制IKK/IκB/NF-κB信号通路,减少炎症介质释放有关。