BMP15对藏鸡等级卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响

为探究骨形态发生蛋白15(Bone Morphogenic Protein 15,BMP15)对体外培养的藏鸡等级卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响,研究体外分离、培养并鉴定藏鸡等级卵泡F1颗粒细胞后,用0、25、50、100 ng/mL四种不同浓度的BMP15蛋白单独处理或者联合25 ng/mL促卵泡素(FSH)处理细胞,72 h后采用ELISA法检测不同处理组细胞培养液中的孕酮含量。同时,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测不同处理组细胞中孕酮合成关键基因StAR、CYP11A1和HSD3B1 mRNA相对表达量。结果显示:免疫组化法鉴定体外分离培养的藏鸡F1卵泡颗粒细胞卵泡刺激素受体(FSHR)抗体阳性率95%以上;BMP15单独处理细胞后,随着BMP15浓度的升高,孕酮分泌量呈下降的趋势,且100 ng/mL处理组的孕酮分泌量极显著低于其他组(P<0.01);BMP15联合FSH处理细胞后,随着BMP15浓度的升高,孕酮分泌量呈现上升的趋势,其中100 ng/mL处理组的孕酮分泌量极显著高于其他组(P<0.01);不同处理组细胞中孕酮合成关键基因StAR、CYP11A1和HSD3B1 mRNA相对表达量与孕酮分泌量趋势基本一致。结果表明,体外BMP15蛋白单独处理抑制藏鸡等级卵泡颗粒细胞孕酮的分泌,但是联合FSH处理促进孕酮的分泌。

SMAD4基因在藏猪卵巢组织中的表达分析

藏猪是我国青藏高原特有的珍贵品种,但因其繁殖能力低下,使得藏猪产业的发展受到严重阻碍,影响农牧民经济效益。为探究藏猪繁殖性状效应的基因分子机制,本文以藏猪及大约克猪的卵巢组织为研究对象,利用RT-q PCR技术从m RNA层面对调控藏猪繁殖性状的SMAD4基因的表达情况进行分析。结果表明,在卵巢组织中,藏猪SMAD4基因的表达量高于大约克猪,两者间差异极显著(P<0.01),推测SMAD4基因可能是参与调节藏猪繁殖性能的重要功能基因。本研究可为下一步开展SMAD4基因对藏猪繁殖性能的影响提供参考依据。

藏猪和大约克猪CKM基因多态性及表达差异分析

【目的】本研究旨在探究猪CKM基因的多态性及其mRNA表达水平,通过对CKM基因起始密码子上游3 kb区域进行多态性检测,发现了单核苷酸多态性位点C-1185T和C-1324T,且该位点符合哈迪-温伯格定律(P<0.05)。【方法】利用实时荧光定量PCR技术对CKM基因在藏猪和大约克猪不同组织的mRNA表达量进行检测。【结果】发现在同一品种猪种,CKM基因的mRNA表达水平从高至低依次为背最长肌>背脂>肝脏组织,不同猪种内CKM基因在背最长肌、背脂和肝脏组织中存在差异表达,在背最长肌中,藏猪(TP)极显著高于大约克猪(YY)(P<0.01),在背脂中,大约克猪(YY)显著高于藏猪(TP)(P<0.05),在肝脏组织中,藏猪(TP)极显著高于大约克猪(YY)(P<0.01)。【结论】推测CKM基因与骨骼肌的生长发育呈负相关。本研究为下一步深入开展CKM基因功能研究奠定基础。

藏猪行为学探究

藏猪行为学是藏猪适应内外环境变化而形成的一种日常表现行为,关乎藏猪选种选育和饲养管理。本研究对藏猪日常生活习性(活动、卧息、采食、饮水、打斗、排泄、配种、产仔、哺乳、异常)的观察结果进行了一系列的数据统计与分析。结果表明:(1)夜晚保育猪活动与卧息的时间与种公猪、哺乳母猪存在极显著差异(P<0.01)。(2)藏猪的饮食具有选择性和竞争性,采食和饮水往往同时进行,保育猪采食时间显著高于哺乳母猪和种公猪(P<0.05),且哺乳母猪全天的饮水次数要显著高于保育猪和种公猪(P<0.05)。(3)种公猪的打斗次数显著高于保育猪(P<0.05)。(4)哺乳母猪在哺乳前期与中后期的哺乳方式和哺乳时间差异显著(P<0.05)。藏猪的行为特性受到养殖模式和生存环境的影响,但同时也决定了藏猪饲养工艺和圈舍的设计。本研究为藏猪的良种选育和饲养管理提供了科学的理论依据。

高原环境下藏猪与大约克猪血液生理生化指标测定与比较

藏猪是青藏高原特有的小型猪种。藏猪的血液生理生化指标能够有效地反映出机体的健康状况及对高原环境的适应性。本试验通过对高海拔环境下饲养的藏猪和大约克猪血液生理生化指标的测定与比较,发现藏猪的红细胞数目(RBC)、血小板数目(PLT)和血小板压积(PCT)指标显著低于大约克猪(P<0.05),白球比(A/G)极显著低于大约克猪(P<0.01)。说明藏猪由于长期的自然选择,已适应了高原低氧环境,生理生化指标未有明显变化;而大约克猪由低地迁入高原,机体对高原低氧环境作出了适应性应答,生理生化指标发生明显变化。充分体现了藏猪的抗高寒、耐缺氧、耐粗饲和抗病能力强的优良特性,这将为后期深入开展藏猪的良种繁育体系建设、新品系培育等工作奠定坚实基础。

藏猪和大约克猪MYL1基因多态性及差异表达分析

为研究猪不同品种的MYL1基因的多态性及mRNA表达差异。本试验以藏猪和大约克猪作为实验动物,采用一代测序技术对藏猪(59头)和大约克猪(58头)MYL1基因起始密码子上游3 kb区域进行多态性检测;利用实时荧光定量PCR技术检测MYL1基因在背最长肌、背脂、肝脏组织差异表达情况。结果表明:藏猪和大约克猪在起始密码子上游3 kb区域发现T-159A突变位点并呈极显著差异(P<0.01);MYL1基因在背最长肌表达量最高,其次是背脂,肝脏的最低,在背最长肌中藏猪MYL1基因表达量极显著高于大约克猪(P<0.01),在背脂和肝脏组织中,藏猪MYL1基因表达量显著高于大约克猪(P<0.05)。推测T-159A位点可能是参与肌肉生长发育的重要调控位点。本研究为下一步开展MYL1基因对猪生长性能及其肉品质的影响提供参考依据。

藏猪MYL1基因的克隆及生物信息学分析

为了克隆藏猪肌球蛋白轻链1 (myosin light chain 1, MYL1)基因编码区序列,并对其进行生物信息学分析,试验根据NCBI网站GenBank中公布的野猪MYL1基因mRNA序列(登录号为NM;14374.2)设计特异性引物,以提取的藏猪背最长肌组织总RNA反转录得到的cDNA为模板,对藏猪MYL1基因编码区序列进行PCR扩增,将目的基因进行测序,应用生物信息学分析软件对藏猪MYL1基因编码区序列的同源性、蛋白质的结构和功能(氨基酸组成、一般理化性质、疏水性、二级结构及三级结构、磷酸化位点、跨膜螺旋结构和信号肽亚细胞定位及蛋白网络互作)进行分析。结果表明:藏猪MYL1基因编码区序列全长为453 bp;藏猪与野猪的亲缘关系最近,与斑马鱼的亲缘关系最远;藏猪MYL1基因编码区序列与野猪、牛、智人、马、绵羊、犬、穴兔、家鼠、鸡和斑马鱼的核苷酸序列相似性分别为100%、92.1%、91.4%、91.2%、91.2%、90.5%、90.3%、89.2%、80.6%和68.2%;藏猪MYL1蛋白存在19种氨基酸,由150个氨基酸组成;藏猪MYL1蛋白分子质量为16 657.86 u,分子式为C;H;N;O;S;,脂肪系数为79.33,理论等电点pI为4.63,不稳定系数为37.81,负电荷氨基酸残基(Asp+Glu)总数为26个,正电荷氨基酸残基(Arg+Lys)总数为15个,理论半衰期为30 h,为亲水蛋白;二级结构中α螺旋占比最大(58.67%),其次为无规则卷曲(24.67%),β转角(8.67%)和延伸链(8.00%)占比较小;三级结构与二级结构预测结果相符合;氨基酸序列中共有16个磷酸化位点,其中有8个丝氨酸磷酸化位点,6个苏氨酸磷酸化位点,2个酪氨酸磷酸化位点;无跨膜螺旋结构,为非跨膜蛋白;无信号肽,为非分泌蛋白;主要定位于细胞质(47.8%)中,在细胞核约占26.1%,在细胞骨架约占8.3%,在内质网、高尔基体、分泌系统的囊泡、液泡中均约占4.3%;与TNNC2蛋白及MYH1、MYH3、MYH7等蛋白之间存在互作网络关系,与TNNC2蛋白相关系数高达0.999,与肌球蛋白重链家族MYH1、MYH3和MYH7蛋白相关系数分别为0.979,0.975和0.971,与MYBPC1和TPM1蛋白相关系数均为0.969,与TPM2和TNNI3蛋白相关系数均为0.965。说明藏猪MYL1基因可能具有较强大的生物学功能。