实时荧光PCR法检测食品中亚利桑那沙门氏菌

沙门氏菌(Salmonella)是食品检测过程中最常见的致病菌之一,亚利桑那沙门氏菌(Salmonella arizonae)又是沙门氏菌中比较难鉴定的亚种。该实验通过实时荧光聚合酶链式反应(PCR)方法快速准确的检测亚利桑那沙门氏菌和其他沙门氏菌。根据GenBank公布的亚利桑那沙门氏菌和其他沙门氏菌gud D基因序列,分别设计引物和Taqman探针。使用10株不同血清型的沙门氏菌标准菌株、88株沙门氏菌分离株和29株食品中常见食源性致病菌进行实时荧光PCR特异性实验。结果显示,该实验所设计的引物探针特异性非常好。实时荧光PCR灵敏性试验结果表明,检测灵敏度可达到1～10 CFU/m L的添加浓度。经模拟污染样品验证,所建立的实时荧光PCR方法与传统方法的检测结果相一致,具有检测周期短、操作简便的优势。

沙门氏菌传统血清凝集分型和分子血清分型试剂盒方法比较

目的验证沙门氏菌血清分型试剂盒的适用性,考核本实验室传统沙门氏菌血清分型技术,扩充沙门氏菌的分型方法,寻找更有效、更快捷的沙门氏菌分型方法。方法保存的样品菌株库中随意挑选33株沙门氏菌和6株标准菌株,首先确证为沙门氏菌,然后分别采用传统的玻片血清凝集方法和分子血清分型试剂盒对其进行分型,最后采用16S rRNA系统发育树对试验菌株进行聚类分析。结果2种分型手段的匹配率高达94.9%,其中YP 281 Salmonella havana和YP 639 Salmonella liverpool没有匹配到,这2株菌在试剂盒数据库中不存在,但本实验利用传统血清分型手段可以对这2株菌进行准确分型,其中YP 281是本实验室对GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》表B.1外成功分型的沙门氏菌。结论本实验室传统血清凝集分型技术合格。沙门分子血清分型试剂盒具有较好的适用性,能更快速、更方便对沙门氏菌进行分型。

灭菌乳中嗜热脂肪芽孢杆菌商业无菌的最低可视浓度的测定

目的测定灭菌乳中嗜热脂肪芽孢杆菌的商业无菌最低可视浓度。方法随机购买3种不同品牌的灭菌乳,分别添加105、104、103、102、101、100CFU/mL浓度的嗜热脂肪芽孢杆菌制成模拟样品,分别对培养4、7、9、10 d的样品按照GB 4789.26-2013《食品安全国家标准食品微生物学检验商业无菌检验》的检验方法检测。结果培养7d和10d后的3种品牌模拟样品从编号(X-1)-(X-5)(X代表表1中样品信息编号)均可在视野范围内观察到嗜热脂肪芽孢杆菌,同时镜检发现培养10 d后样品中的嗜热脂肪芽孢杆菌并无百倍或百倍以上增殖也无菌落形成芽孢。对培养10 d后的模拟样品进行菌落计数验证以上结论。结论灭菌乳中嗜热脂肪芽孢杆菌商业无菌最低可视浓度为101CFU/mL。灭菌乳中嗜热脂肪芽孢杆菌在培养10d后无明显增殖,也无菌落进入休眠状态。表明灭菌乳中污染嗜热脂肪芽孢杆菌符合商业无菌相对无菌标准。

实时荧光PCR鉴定婴幼儿配方食品中克罗诺杆菌的研究

目的建立一种能够快速准确鉴定克罗诺杆菌的实时荧光聚合酶链式反应(PCR)方法,并对食品样品和人工污染样品进行克罗诺杆菌检验。方法根据克罗诺杆菌DNA旋转酶B亚基(gyrB)基因保守区序列设计引物和探针。通过特异性试验、绝对灵敏度、相对灵敏性试验、抗干扰试验对所建立方法进行方法学验证。采用人工污染样品增菌液进行方法灵敏度试验。结果本研究建立的方法能够特异性扩增7种克罗诺杆菌,但对与其亲缘关系较近的其他肠杆菌及食品中较为常见的其他致病菌均无扩增,表明本研究建立的方法具有很好的特异性和抗干扰能力。采用阪崎克罗诺杆菌验证绝对灵敏度达1~10 pg,相对灵敏度可以达到10^(3)CFU/mL。在基因组水平和培养物水平均具有很好的抗干扰能力。人工污染样品在36℃增菌24 h后检测灵敏度可以达到10^(0)CFU/mL。结论本研究所建立的实时荧光PCR方法对婴幼儿配方食品样品中的克罗诺杆菌的检测具有快速、特异、灵敏和稳定的特点,可以为传统婴幼儿配方食品中的克罗诺杆菌的检验提供技术参考。