CNAS⁃CL06体系良好运行对动物实验数据科学性的积极作用

药品生物制品检验检测机构的动物实验室承担着检测和科研工作的重要支撑任务。本文梳理了中检院CNAS⁃CL06质量管理体系在运行中积累的管理经验,为同类机构在运行中提供借鉴,以保障动物实验数据的科学性。本实验动物机构顺利通过了CNAS实验动物机构认可,并在现场监督评审中按时完成了整改,同时依据《实验动物饲养和使用机构质量和能力认可准则》(CNAS⁃CL06)开展体系定期自查。在自查过程中一边检查问题一边完善体系内容,从动物采购、职业健康安全、动物疾病治疗与护理、设施运行突发事件演练等几方面着手,充实了质量管理体系内容,确保体系持续有效运行,保障了动物实验数据的有效性和标准化,同时在动物实验平台共享方面贡献了中检院的管理思路,为动物实验的云平台建设提供硬件和软件支撑。本文旨在根据工作实际探索形成实验动物行业质量管理模式,为制定和执行国家标准、行业/团体标准、认可认证标准等机构提供基础数据,为开展动物实验的机构提供可供探讨的管理模式,也为推动整个动物实验的规范化、科学化发展水平夯实基础。

基于科研范式变革的实验动物资源创新发展

实验动物是支撑生命科学和生物医药等领域科技创新的重要基础科研条件之一。随着科研范式的变革,准确把握科学前沿和国家重大需求,进一步凝练实验动物资源创制与发展中的难点和疑点,对加快推动实验动物新品种/新品系开发和动物模型创制与发展具有重要意义。本文梳理了我国实验动物资源建设和应用情况,就应对新形势下的科研范式变革中存在的主要问题进行了深入探讨,展望了我国实验动物资源发展新动向,以期为实验动物新资源研究开发提供新视角。

英国动物试验年度统计报告的分析与启示

实验动物资源调查是一项系统性和公益性的科技基础性工作,对于推动科技进步、促进基础学科发展、支撑经济社会发展和保障国家安全具有重要战略意义和不可替代的作用。研究分析比较英国动物试验年度统计报告的框架结构和统计指标,为我国实验动物资源调查提供参考。

小麦粉熟化过程中脂类变化规律研究

探究小麦粉熟化过程中脂质含量变化,粗脂肪甘油酯、脂肪酸组成与含量变化,代谢产物过氧化值、共轭二烯、丙二醛含量变化规律。结果表明:小麦粉熟化过程中总脂肪和结合态脂肪含量总体呈现下降趋势,游离态脂肪含量在熟化前期(0~30 d)呈现下降趋势,而在熟化后期(30~60 d)变化较小,脂肪不断消耗;甘油三酯最终水解为甘油一酯和脂肪酸,脂肪酸呈现先降后升的趋势;小麦粉中脂肪酸组成主要为亚油酸,随熟化时间的延长,25、40℃条件下亚油酸含量先降低后升高再降低,15℃亚油酸含量先降低后升高;小麦粉熟化温度越高,共轭二烯和过氧化值升高越快,而丙二醛含量与温度呈负相关。

动物源性生物制品病毒灭活/去除工艺的验证

目的对动物源性生物制品病毒灭活/去除工艺进行验证。方法针对不同动物源性制品,选择相关的指示病毒,对4个厂家不同的病毒灭活/去除工艺进行效果验证。结果各工艺均可灭活/去除指示病毒4Logs以上,均为有效的灭活/去除病毒工艺。结论4个厂家的灭活/去除病毒工艺均可保证制品的安全性。

国内外不同体制下实验动物管理政策体系和标准体系的分析与启示

目的阐述我国实验动物管理制度的优势,找出存在的短板,提出完善与强化我国实验动物管理政策体系和标准体系的对策与建议。方法分析国内外实验动物管理政策体系和标准体系架构。结果我国还没有一部实验动物管理的法律,与国际上的通用要求存在较大差距;与国际先进标准相比较,我国实验动物标准内容相对滞后,标准之间缺乏系统性和协调性。结论加强实验动物工作法制化管理,推动《条例》修订和地方标准的制定与实施效果,为进一步提升实验动物为我国科技创发展的服务能力奠定基础。

实验小鼠弓形虫检测方法的建立和应用

目的建立小鼠弓形虫抗体检测方法。方法制备抗原片和可溶性抗原,免疫小鼠制备阳性对照血清,确定了IFA和ELISA检测方法的最适工作条件。根据弓形虫B1基因序列,合成一对寡聚脱氧核糖核苷酸片断,建立PCR检测体系。结果与IHA法相比较,ELISA、IFA的抗体检出率均显著高于IHA,抗体滴度分析,ELISA抗体滴度高于IFA法。对弓形虫感染鼠不同组织进行PCR检测,可检出特异性扩增条带。结论建立的IFA和ELISA检测方法具有灵敏度高、重复性好,结果判定明确等优点,是比较有效的监测方法。建立了弓形虫PCR检测体系,经对弓形虫DNA及病鼠各组织的初步检测,证明本PCR体系具有较高的敏感性和特异性。

兔出血症病毒RT-PCR方法的研究

目的建立检测兔出血症病毒的RT-PCR方法。方法自感染RHDV致死的兔肝脏组织中提纯病毒,提取病毒总RNA,以RT-PCR方法扩增出368 bp的基因片段。将RT-PCR产物克隆到T载体中,并对重组质粒测序。结果PCR产物的测序结果与文献报道的序列一致,敏感性试验结果表明,可检测到10-7病毒滴度。结论建立的检测RHDV RT-PCR方法具有很高的特异性和敏感性。

兔出血症病毒血凝试验及血凝抑制试验影响因素的探讨

目的 探讨影响血凝、血凝抑制实验结果的各种可能因素。方法 比较 7种微量反应板在不同稀释系统和不同血清处理方法情况下进行血凝和血凝抑制试验的结果。结果 找出了图谱清晰 ,反应结果规律、稳定的实验条件。结论 为我国国标的进一步完善提供了实验依据。

全国药检系统实验动物工作情况及建议

目的为提升药检系统实验动物工作对食品、药品、医疗器械检验检测工作的技术支撑能力和服务保障水平提供依据和参考。方法采用调查问卷的方式对调查数据进行汇总统计,全面了解我国药检系统实验动物的生产、使用和管理水平,分析存在的主要问题,提出建设性意见。结果与结论建议加强机构管理和人员队伍的建设,提高实验动物质量,丰富实验动物资源,推动实验动物工作的可持续发展。

小鼠肺支原体抗体ELISA检测法的建立

目的 建立小鼠肺支原体抗体ELISA检测法。方法 采取与国外试剂盒比较的方法。结果 符合率达 10 0 % ,检测 9个单位送检的 184份普通级小鼠血清 ,肺支原体抗体检出率为 97% ,清洁级小鼠血清 86份 ,3份为阳性 (3.5 % ) ,检测 92份SPF级小鼠血清 ,均为阴性 ,具有特异性强 ,灵敏度高 ,结果判定明确 ,可靠等优点。

鼠痘病毒抗体制备方法的研究

目的 通过鼠痘病毒抗体的制备摸索鼠源性多抗的大量生产方法。方法 用完全福氏佐剂乳化的鼠痘抗原经腹腔注射免疫 10只昆明小鼠 ,共免疫 4次 ,其间腹腔注射一次液体石蜡。结果 试验中 7只小鼠产生腹水 ,平均每只产 10 6ml ,最高达 2 6ml,腹水总产量是血清总产量的 15倍。同一只小鼠腹水抗体效价在不同采取时间保持稳定 ,不同小鼠间腹水抗体效价差异较大 ,在 1∶32 0～ 1∶5 12 0之间。腹水通过 5 6℃ 30min灭活处理后 ,效价没有变化 ,灭活处理的腹水冻存于 -4 0℃的条件下 ,6个月内经反复冻融效价基本保持不变 ,未经灭活的腹水冻存后效价下降明显。结论 用腹腔免疫诱发腹水可得到产量较大 ,效价较高的特异性抗体。

猴B病毒抗体ELISA检测方法的建立和应用研究

目的 建立猴B病毒抗体ELISA检测方法。方法 采用方阵滴定法 ,比较不同血清稀释度、3种酶结合物、2种抗原对检测结果的影响 ,与国外同类参比实验室进行检测结果的比较 ,确定ELISA法的最佳实验条件。结果 HSV抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为 1∶2 0 0 0时 ;或B病毒抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为1∶4 0 0 0时 ,阴性血清和阳性血清的A值差距最大。与国外B病毒检测专业实验室的检测结果符合率分别为98 0 2 %和 97 5 2 %。结论 建立了猴B病毒抗体的ELISA检测方法 ,提高了检测方法的准确性。

实验小鼠肾匀浆中酯酶-3的实验室测定能力验证结果评价

目的通过实验小鼠肾匀浆中酯酶-3项目的检测比对,了解全国实验动物质量检测实验室的水平,促进各实验室加强质控。方法按照CNAS批准的能力验证方案,制备样品并将稳定性和均匀性合格的样品作为能力验证样品,进行随机编号,随作业指导书一起发放给参加单位。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品预检结果完全一致的判为优秀结果;除杂合型判定以外的结果均一致的判定为满意结果,否则判为不满意结果。结果共10个实验室报名参加本次比对试验,其中优秀结果 0个实验室;满意结果的有9个实验室,占参加比对实验室的90.0%;不满意结果 1个实验室,占参加比对实验室的10.0%。结论本次能力验证项目反映了各参与实验室在实验小鼠肾匀浆中酯酶-3的总体检测能力较高,但检测细节及部分实验室技术水平还有待提高。

2003-2008年我国实验猴BV抗体检测结果及抗体水平变化规律的分析

目的对近年来我国实验猴BV(猴疱疹病毒Ⅰ型)抗体检测结果进行比较分析,以了解我国实验猴BV感染情况及其抗体水平变化规律,为我国实验猴质量控制及标准化提供依据。方法根据国标中ELISA方法 ,对2003～2008年我国11个单位送检的2个品种猴血清进行BV抗体检测,并对检测结果进行统计分析。结果检测的4612份猴血清中,有1843份BV抗体呈阳性,阳性率为39.96%;6年中检测猴群BV抗体阳性率基本在30%～50%。幼年(≤2岁)、青年(2.1～4.0岁)、成年(4.1～6.5岁)、老年(≥6.5岁)4个不同年龄段猴BV感染率分别为26.28%、31.53%、53.74%、87.27%。不同年龄感染率差异显著(P<0.01)。雌猴BV感染率(35.91%)高于雄猴(34.93%),但两者差异不显著(P>0.05)。结论不同年龄猴BV感染率不同,随着年龄的增长BV感染率升高。

实验小鼠肾匀浆中苹果酸酶-1和异柠檬酸脱氢酶-1实验室检测能力验证结果评价

目的通过实验小鼠肾匀浆中苹果酸酶-1和异柠檬酸脱氢酶-1检测能力验证计划,了解实验动物检测机构检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,通过样品制备,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,发样给参加单位,并附作业指导书。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品预检结果一致的判为满意结果,不一致或未能提交结果的判为不满意结果。结果共有10个实验室参加本次能力验证项目,其中满意结果的实验室8个,占总参加机构的80%,不满意的实验室有2个,占20%。结论实验动物质量检测机构在实验小鼠肾匀浆中苹果酸酶-1和异柠檬酸脱氢酶-1的检测能力较高,实施能力验证计划能够反映实验室的检测水平。

2009—2013年北京地区实验动物质量抽检结果分析

目的通过对2009-2013年北京地区实验动物微生物、寄生虫、遗传质量抽检结果的回顾和总结,为实验动物的生产、管理和检测提供参考。方法按照现行国家和地方实验动物检测的相关标准,由北京市实验动物管理办公室依法对北京地区具备资质的实验动物生产单位进行抽样,委托检测机构进行检测,并发布质量报告。依据报告数据,对5年中北京地区不同级别大小鼠、豚鼠、兔、犬、猴、小型猪等实验动物的质量进行分析和评价。结果 5年抽检动物总数和批次逐年递增,批次合格率则有递减趋势。SPF级、清洁级、普通级动物均有不同程度的微生物和寄生虫感染,其中弓形虫感染在5年中均有检出。普通级动物的免疫抗体不达标率持续存在,并且有联合感染及上升趋势。有3个批次近交系小鼠遗传质量检测不合格。结论实验动物质量监督抽检是确保质量的有效手段,对实验动物行业发展和生命科学及生物医药卫生事业的发展至关重要。

实验树鼩空肠弯曲菌、沙门氏菌和志贺菌多重荧光定量PCR方法的建立

目的为实验树鼩微生物检测提供一种快速、简便、灵敏,并且特异性强的空肠弯曲菌、沙门氏菌和志贺菌多重荧光定量PCR检测方法。方法根据空肠弯曲菌的Hip O区域、沙门菌的in V区域和志贺菌的ipa H区域设计特异性引物和探针,并进行单病原定量PCR检测验证;后分析多重PCR的灵敏度和特异性,并使用该多重PCR方法检测实验树鼩样品。结果本研究的PCR要素可用于空肠弯曲菌、沙门氏菌及志贺菌等单种菌的实时荧光定量PCR扩增。多重定量PCR扩增出了空肠弯曲菌、沙门氏菌和志贺氏菌标准扩增曲线;该方法的灵敏度为1×103ng/μL;特异性检测未从其他参考菌株中检出阳性。结论该多重定量PCR方法在实验树鼩微生物检测中具有很好的应用和推广前景。

2003-2007年我国实验小鼠病毒抗体检测结果与分析

目的了解国内近5年来小鼠病毒感染情况,为我国实验小鼠质量控制及标准化工作提供依据。方法依据国家标准对2003-2007年我国21个省/市、47个单位送检39个品系小鼠及小鼠血清进行病毒抗体检测,并对检测结果进行比较分析。结果不同等级3659只(份)小鼠及血清中,除汉坦病毒外,其他10种病毒均有不同程度感染,抗体阳性率在0.24%～5.66%。结论我国实验小鼠病毒监测工作及质量控制仍需加强。