猪流行性腹泻病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

根据Gen Bank登录的猪流行性腹泻病毒（PEDV）毒株（登录号KJ960180）的M基因保守序列,设计1对扩增片段大小为299 bp的特异性引物,经PCR扩增、克隆、测序鉴定后,提取质粒作为阳性标准品,建立了PEDV的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法。该方法在1.21×10^3~1.21×10^8拷贝/μL范围内呈现良好的线性,相关系数（R2）为0.999,扩增效率为99%,扩增产物的熔解曲线为单个特异峰,产物Tm值为85.5~86℃,最低检测限为1.21×10^1拷贝/μL。本研究建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、重复性好、成本低且操作简单,适用于PEDV的早期诊断、定量研究和流行病学监测。

GnRH-I主动免疫对猫睾丸和附睾发育的影响

探讨麦芽糖结合蛋白-促性腺素释放激素六聚体（MBP-GnRH-I6）主动免疫对猫睾丸和附睾的影响。选取12周龄左右,体重1.0～1.2kg健康雄猫10只,随机分成免疫组（n=5）与对照组（n=5）。16周龄时给免疫组猫每只颈部肌肉注射MBP-GnRH-I6,22周龄时加强免疫1次。以同样的方式与剂量给对照组猫每只注射MBP。免疫前称重,以后每2周称重1次。28周龄时手术摘除睾丸和附睾,称重,取组织进行石蜡切片,HE染色,光学显微镜下观察组织结构变化,并用Motic Image Plus 2.0软件分析图片。免疫后,免疫组雄猫的体重与对照组相比没有差异（P〉0.05）。免疫组雄猫的睾丸和附睾重量减少（P〈0.05）。组织切片显示：免疫组睾丸的曲精小管管腔内较空荡,细胞层数减少;附睾管内没有精子,附睾管腔变小,静纤毛变短。曲精小管与附睾管的纵径、横径、周长和面积与对照组相比明显减小（P〈0.05）。曲精小管内的精原细胞、初级精母细胞、精子细胞和精子显著小于对照组（P〈0.05）。本试验表明GnRH-I主动免疫不影响猫的体重增长,但抑制猫的睾丸和附睾的发育。