畜禽粪便量概算及污染状况分析

为评价雅安市畜禽养殖业污染情况,根据2020年雅安市各区县畜禽饲养量和各类畜禽排泄系数估算粪便产生量,计算总氮(TN)、总磷(TP)土地承载力,评估粪便污染风险。结果显示:(1)雅安市畜禽废弃物资源较少,2020年畜禽粪便年产生量是258.87万t,折合猪粪当量是239.59万t,农用地TN负荷80.22 kg/hm^(2),TP负荷是18.25 kg/hm^(2),农用地猪粪当量负荷是0.30 kg/hm^(2),总体评价是Ⅰ,表明现阶段的畜禽粪便对环境的影响较小;(2)雅安市各区县中,雨城区和汉源县的畜禽粪便TN负荷超过170 kg/hm^(2)的限制,雨城区和汉源县的畜禽粪便TP负荷超过35 kg/hm^(2)的限制;(3)以耕地、园地和草地为主要的消纳途径,雨城区的畜禽粪便污染物对环境有风险;汉源县和天全县的畜禽粪便污染物对环境稍有风险。

常态化疫情防控下教学动物医院在培养学生实践技能中的作用

2020年初,受新冠肺炎疫情影响,各高校均推迟开学时间。但为实现"延迟开学不停学"的目标,各高校教学动物医院遵循教育部发布《关于在疫情防控期间做好普通高等学校在线教学组织和管理工作的指导意见》,并结合自身优势,为更好培养本校动物医院学生的实践能力,均选择性开展了动物医院线上各科室培训系列直播课程,通过教学动物医院多元化线上诊疗指导和线上门诊病例分享指导等措施,创建教学动物医院自制案例视频库,利用信息化手段,建立QQ和微信分享群,开展教学动物医院直播示教病例通道,加强教学动物医院虚拟仿真实验教学平台建设,做到教学、疫情防控两不误。

中药组方“回乳康”对回乳期奶牛血清E、P4和TGF-β1含量的影响

【目的】探究中药组方"回乳康"对回乳期奶牛血清雌激素(Estrogen,E)、孕酮(Progesterone,P4)和转化生长因子β1(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)含量的影响。【方法】选取即将干乳日产奶量为(15.42±0.71)kg的健康奶牛80头,随机分为4组,每天饲喂0(对照组)、400、500和600 g"回乳康"中药,采用逐渐干奶法回乳,分别在回乳第0、1、3、5、7、9和11天采集奶牛尾静脉血,并记录奶牛单日产奶量,采用ELISA法检测血清E、P4和TGF-β1含量。【结果】0、400、500和600 g处理回乳时间分别为11、7、5和5 d;各组奶牛血清E含量在回乳期均随时间推移呈下降趋势,对照组下降趋势较中药组慢;对照组奶牛血清P4含量在回乳期变化不显著,而中药组奶牛血清P4含量均随时间推移呈上升趋势,在回乳期之后下降,但下降后仍极显著高于对照组;各处理回乳期奶牛血清TGF-β1含量均呈上升趋势,而在回乳期之后中药组奶牛血清TGF-β1含量呈下降趋势;回乳期奶牛血清E、TGF-β1含量和日产奶量两两间均呈极显著相关,血清P4含量与血清E、TGF-β1含量、日产奶量均无显著相关性。【结论】在奶牛回乳过程中,添加中药组方"回乳康"能显著促进回乳期奶牛回乳,E是奶牛回乳的负调控激素,TGF-β1是正调控因子,而P4对回乳无明显影响。

奶牛胎盘脂联素、瘦素、内脂素与犊牛初生重相关性研究

旨在探究奶牛胎盘组织中脂联素(Adiponectin)、瘦素(Leptin)、内脂素(Visfatin)与犊牛初生重的相关性。选取规模化养殖场正常分娩奶牛56头,按犊牛初生重划分为A(≤40kg)、B(40~45kg)、C(≥45kg)3组,分娩后立即手术采集胎盘组织,用RT-PCR和ELISA检测胎盘组织脂联素、瘦素和内脂素mRNA和蛋白表达水平,分析其与犊牛初生重的相关性。结果表明,随着犊牛初生重增加,奶牛胎盘组织脂联素、内脂素mRNA和蛋白表达水平均逐渐上升,瘦素先降低再升高;C组瘦素mRNA表达水平显著高于B组(P<0.05),A组和B组、C组间差异均不显著(P>0.05),脂联素和内脂素在A、B、C 3组间差异不显著(P>0.05);A、B组脂联素蛋白表达水平差异不显著(P>0.05),C组脂联素显著高于A组和B组(P<0.05),瘦素和内脂素在A、B、C 3组间表达水平差异不显著(P>0.05);母牛胎盘脂联素、瘦素mRNA和蛋白表达水平均与犊牛初生重极显著正相关(P<0.01),母牛胎盘内脂素mRNA和蛋白表达水平均与犊牛初生重相关性不显著(P>0.05);母牛胎盘脂联素、瘦素、内脂素mRNA和蛋白表达水平两两之间均呈极显著正相关(P<0.01)。综上表明,奶牛胎盘中均有脂联素、瘦素和内脂素表达,胎盘脂联素、瘦素、内脂素相互协调对犊牛宫内生长发育发挥作用,其中脂联素和瘦素对犊牛初生重影响较大而内脂素影响较小。本研究结果为进一步研究奶牛胎盘组织中脂联素、瘦素、内脂素对犊牛初生重的作用机理提供参考。

复方天然植物制剂对奶牛回乳效果及调控激素的影响

【目的】探究复方天然植物制剂对奶牛回乳效果及回乳期奶牛血清胰岛素(INS)、氢化可的松(HC)、生长激素(GH)和胰岛素生长因子1(IGF-1)含量的影响。【方法】试验于2016年1—6月进行,选择四川省某规模化奶牛场半封闭统一舍饲,体重(582±41)kg、第2—4胎中国荷斯坦奶牛150头。从中选取体况良好,健康,乳房、乳汁均正常,即将进入回乳期,产奶量为(15.42±0.71)kg的妊娠后期即将干乳的健康奶牛80头。随机分为A、B、C、D组,每组20头,均采用逐渐干奶法回乳,回乳开始当天记为第0天,A组为对照组,不饲喂复方天然植物制剂。B、C、D组均从回乳开始第1天,每日上午8:00分别饲喂复方天然植物制剂400、500、600g,回乳完成后停止饲喂复方天然植物制剂。复方天然植物制剂由麦芽,朴硝,升麻,柴胡,香附,薏仁,蚕蜕,白术,黄芩,知母,苏梗,芡实,五味子,蒲公英,甘草等按一定比例组成。分别采集奶牛回乳期第0、1、3、5、7、9和11天尾静脉血,置于未加抗凝剂的离心管中,室温下静置1h,置离心机352×g离心10min,转移上层血清于EP管中,-20℃冻存。采用双抗体夹心酶联免疫吸附技术(ELISA)法检测血清INS、HC、GH和IGF-1含量,并记录回乳期奶牛单日产奶量。【结果】A、B、C、D 4组奶牛回乳时间分别为11、7、5、5天。各组回乳期奶牛血清IGF-1和HC含量均呈下降趋势,且对照组下降趋势较各复方天然植物制剂组慢,复方天然植物制剂组血清IGF-1、HC和GH含量在回乳期后回升,对照组血清INS含量上升趋势较各复方天然植物制剂组慢,第0至1天,各组奶牛血清HC、IGF-1和GH含量差异均不显著(P>0.05);第3—7天,A组奶牛血清HC、GH和IGF-1含量极显著高于B、C、D组(P<0.01),而血清INS含量极显著低于B、C、D组(P<0.01);第9天,A、D组奶牛血清HC含量均显著高于C组(P<0.05),A、B组奶牛血清GH和IGF-1含量均极显著低于C、D组(P<0.01),A组奶牛血清INS含量极显著低于B、C、D组(P<0.01);第11天,A组奶牛血清HC、GH和IGF-1含量极显著低于B、C、D组(P<0.01),A组奶牛血清INS显著低于D组(P<0.05),但极显著低于B、C组(P<0.01);C、D组奶牛血清IGF-1、GH、HC和INS含量在整个回乳期均差异性不显著(P>0.05)。在奶牛回乳期,产奶量、HC、GH和IGF-1两两间均呈极显著正相关(P<0.01),INS与产奶量、HC、GH和IGF-1均呈极显著负相关(P<0.01)。【结论】复方天然植物制剂能显著促进回乳期奶牛回乳,饲喂500g/日复方天然植物制剂,奶牛回乳时间为5d,回乳效果即可达到最佳。回乳期奶牛血清INS、HC、IGF-1含量和产奶量变化两两间均呈极显著相关,IGF-1、GH和HC对奶牛回乳起负向调控功能,而INS对奶牛回乳起正调控作用。

回乳期奶牛血清GH、INS、HC、TGF-β1和IGF-1含量变化

为探究回乳期奶牛血清中生长激素(GH)、胰岛素(INS)、氢化可的松(HC)、转化生长因子β1(TGF-β1)和胰岛素样生长因子1(IGF-1)含量的变化及其相关性。试验选择规模化奶牛场日产奶量为(15.43±2.10)kg,即将干乳的妊娠后期健康中国荷斯坦奶牛20头。干乳开始当天记为第0天,分别采集第0、1、3、5、7、9和11天奶牛尾静脉血,ELISA法检测血清中GH、INS、HC、TGF-β1和IGF-1含量并对结果进行统计学处理,分析其在奶牛回乳过程中的变化规律及其相关性。结果显示,回乳期奶牛血清GH、INS、HC和TGF-β1含量在第0至1天变化不显著(P>0.05);血清GH和HC含量第3至11天依次降低且差异均极显著(P<0.01),其中血清HC含量第3天极显著高于其余各天(P<0.01);血清INS含量第3至11天依次升高且差异均极显著(P<0.01);血清TGF-β1含量第3至11天差异性均不显著(P>0.05);血清IGF-1含量依次呈阶梯式下降趋势,第0天和第1天、第3天和第5天、第7天和第9天、第9天和第11天之间均差异不显著(P>0.05),但第0至1天、第3至5天、第7至11天3阶段之间差异极显著(P<0.01)。回乳期奶牛血清GH、INS、TGF-β1和IGF-1含量变化两两间呈极显著相关(P<0.01);HC含量变化与GH、INS和IGF-1含量变化均呈极显著相关(P<0.01),与TGF-β1含量变化呈显著负相关(P<0.05)。

奶牛静脉血和脐静脉血脂联素、瘦素及IGF-1表达水平与犊牛初生体质量相关性研究

为探究奶牛静脉血及脐静脉血中脂联素(adiponectin)、瘦素(leptin)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)与犊牛初生体质量间的相关性。选取规模化养殖场54头正常分娩奶牛,按犊牛初生体质量划分为A(≤40kg),B(40~45 kg),C(≥45 kg)3组,采集分娩奶牛静脉血及脐静脉血,用ELISA方法检测静脉血中脂联素、瘦素和IGF-1的表达水平,分析其间的相关性及与犊牛初生体质量的相关性。结果表明,奶牛静脉血脂联素、瘦素和IGF-1表达水平两两之间均呈极显著正相关(P<0.01),但奶牛静脉血脂联素、瘦素和IGF-1表达水平与犊牛初生体质量相关性均不显著(P>0.05);脐静脉血脂联素、瘦素和IGF-1表达水平两两之间均呈极显著正相关(P<0.01),脐静脉血脂联素、瘦素和IGF-1表达水平均随犊牛初生体质量增加而逐渐升高,且分别与犊牛初生体质量呈极显著正相关(P<0.01);奶牛静脉血脂联素、瘦素和IGF-1表达水平均极显著高于脐静脉血(P<0.01),而奶牛静脉血脂联素、瘦素和IGF-1的表达水平与脐静脉血中表达水平相关性均不显著(P>0.05)。据此得出,奶牛静脉血和脐静脉血中均有脂联素、瘦素和IGF-1表达,奶牛静脉血中及脐静脉血中脂联素、瘦素和IGF-1均各自相互协调发挥作用;奶牛静脉血脂联素、瘦素和IGF-1均对犊牛初生体质量影响不显著,但脐静脉血脂联素、瘦素和IGF-1均对犊牛初生体质量影响极显著,该结果可为进一步研究脂联素、瘦素和IGF-1对犊牛初生体质量的影响机制奠定基础。

中药组方“回乳康”对回乳期奶牛血清PRL、GH和STAT5含量的影响

为探究中药组方"回乳康"对回乳期奶牛血清催乳素(PRL)、生长激素(GH)和信号转导和转录激活因子5(STAT5)含量的影响。试验选择规模化奶牛场产奶量为15.42±0.71 kg的妊娠后期,即将干乳的健康奶牛80头。随机分为A、B、C和D组,每组20头,采用逐渐干奶法回乳,干乳开始当天记为第0 d,A组为对照组,不饲喂"回乳康",B、C、D组均从回乳开始第1 d,每日上午8:00分别饲喂"回乳康"400、500、600 g,回乳完成后停止饲喂。分别采集奶牛回乳期第0、1、3、5、7、9和11 d尾静脉血,并记录奶牛单日产奶量,ELISA法检测血清PRL、GH和STAT5含量。结果显示,各组回乳期奶牛产奶量均随时间推移降低,A、B、C和D组回乳时间分别为11、7、5和5 d。各组PRL、GH和STAT5含量均呈下降趋势,GH和STAT5含量在回乳期后回升,且A组下降趋势较各中药组慢,C组PRL、GH、STAT5含量及产奶量均分别与D组差异不显著(P>0.05);回乳期奶牛血清PRL、GH、STAT5含量与产奶量两两间均呈极显著正相关(P<0.01)。综上,饲喂500 g/日"回乳康"即可使奶牛回乳效果达到最佳。

复方中药对奶牛回乳效果及泌乳相关因子的影响

【目的】探究复方中药对奶牛回乳效果及回乳期奶牛血清泌乳相关因子胰岛素样生长因子1(IGF-1)、信号转导和转录激活因子5(STAT5)和转化生长因子β1(TGF-β1)含量的影响。【方法】选取规模化奶牛场妊娠后期、即将干乳、产奶量为(15.42±0.71)kg的的健康奶牛80头。随机分为A、B、C、D组,每组20头,采用逐渐干奶法回乳,回乳开始当天记为第0天,A组为对照组,不饲喂复方中药,B、C、D组均从回乳第1天开始,每日上午8:00分别饲喂复方中药400、500、600 g,回乳完成后停止饲喂复方中药。分别采集回乳期奶牛第0、1、3、5、7、9和11天尾静脉血,并记录奶牛单日产奶量,ELISA法检测回乳期奶牛血清IGF-1、STAT5和TGF-β1含量。【结果】回乳期各组奶牛产奶量均随时间推移降低,A、B、C、D组回乳时间分别为11、7、5、5 d。在奶牛回乳期,各组奶牛血清IGF-1和STAT5含量均随时间推移呈下降趋势,并在回乳期后回升,而各组奶牛血清TGF-β1含量均呈上升趋势,并在回乳期后下降;回乳期奶牛产奶量与IGF-1和STAT5含量均分别呈极显著正相关(P<0.01),与TGF-β1含量呈极显著负相关(P<0.01);IGF-1与STAT5含量呈极显著正相关(P<0.01),而TGF-β1与IGF-1、STAT5含量分别呈极显著负相关(P<0.01)。【结论】复方中药能明显促进回乳期奶牛回乳,饲喂500 g/日即可达到最佳回乳效果。在奶牛回乳期,IGF-1和STAT5是奶牛回乳的负调控因子,而TGF-β1是奶牛回乳的正调控因子。

子宫内膜Toll样受体和核苷酸结合寡聚体结构域蛋白表达及功能研究进展

Toll样受体(TLR)和核苷酸结合寡聚体结构域蛋白(NOD)是先天性免疫应答中识别各种病原微生物保守结构的模式识别受体,与多种病毒和细菌感染性疾病相关。子宫内膜在雌性动物生殖和免疫过程中扮演特殊且重要的角色,既受到卵巢激素调控对精子及胎儿产生免疫耐受,又识别入侵的病原。研究发现,子宫内膜表达多种TLR和NOD,影响动物的发情、妊娠和免疫。文章综述了TLR和NOD的组成、结构及功能,并总结了子宫内膜TLR和NOD的表达及其介导动物发情、妊娠和免疫的相关作用。

脐静脉血脂联素、胰岛素和IGF-1含量与犊牛初生质量的相关性

选取规模化养殖场正常分娩奶牛54头,按犊牛初生质量划分为A组（≤40kg）9头、B组（40-45kg）25头、C组（≥45kg）20头共3组,母牛分娩后立即采集脐静脉血,ELISA法检测血液脂联素、胰岛素和胰岛素样生长因子-1（IGF-1）含量,分析其间的相关性及与犊牛初生质量的相关性。结果表明,3组脐静脉血中均有脂联素、胰岛素和IGF-1表达,随犊牛初生质量增加,脐静脉血中脂联素、胰岛素和IGF-1含量均逐渐增加。其中A组脂联素含量显著低于C组（P〈0.05）,A、B组和B、C组脂联素含量均分别差异不显著（P〉0.05）;A、B组胰岛素、IGF-1含量均分别显著低于C组（P〈0.05）;A、B组胰岛素、IGF-1含量均分别差异不显著（P〉0.05）;脐静脉血脂联素、胰岛素和IGF-1含量均分别与犊牛初生质量呈极显著性正相关（P〈0.01）;脐静脉血脂联素、胰岛素和IGF-1含量两两间均呈极显著性正相关（P〈0.01）;公犊牛脐静脉血脂联素和胰岛素含量均略高于母犊牛脐静脉血,而公犊牛脐静脉血IGF-1含量略低于母犊牛脐静脉血,但脐静脉血脂联素、胰岛素、IGF-1含量在公、母犊间差异均分别不显著（P〉0.05）。据此得出,脐静脉血均有脂联素、胰岛素和IGF-1表达;脐静脉血脂联素、胰岛素和IGF-1含量均对犊牛初生质量影响较大;但脐静脉血脂联素、胰岛素、IGF-1含量在公、母犊间差异性均不显著;为进一步研究脐静脉血脂联素、胰岛素和IGF-1对犊牛宫内生长发育的影响机理提供参考。

奶牛泌乳启动调控激素的研究进展

哺乳动物泌乳启动都是在一系列激素的调控作用下完成的。奶牛的泌乳启动受到多种激素的共同调控,处于非妊娠期的奶牛乳腺在经过特定激素的刺激后,都会在一定程度上出现泌乳现象。本文对奶牛催乳素PRL、雌激素E、胰岛素INS、生长激素GH和孕酮P4与泌乳启动的关系进行了综述,为研究泌乳启动和奶牛产奶量等提供重要理论基础。

回乳期奶牛血清PRL、E_2、P_4和STAT5含量的变化规律

为探究回乳期奶牛血清中促乳素(PRL)、雌二醇(E2)、孕酮(P4)、信号转导和转录激活因子5(STAT5)含量和产奶量变化规律及其相关性,选择规模化奶牛场产奶量为(15.43±0.60)kg,将干乳的妊娠后期奶牛20头为研究对象。干乳开始当天记为第0天,分别在第0、1、3、5、7、9和11天上午8:00采集奶牛尾静脉血,ELISA法检测血清中PRL、E2、P4和STAT5含量并对结果进行统计学处理,分析其在奶牛回乳过程中的变化规律及其相关性。结果表明:回乳期奶牛血清PRL含量和产奶量在0~1d变化不显著(P>0.05),3~11d依次降低且差异极显著(P<0.01);血清E2含量0~1d、3~5、7~9d、9~11d之间差异均不显著(P>0.05),依次呈阶梯式下降趋势;血清STAT5含量同样呈下降趋势,回乳0~5d、7~11d差异不显著(P>0.05),但0~5d与7~11d两阶段间差异极显著(P<0.01);血清P4含量从回乳0~11d变化不显著(P>0.05);回乳期奶牛产奶量与PRL、E2、STAT5含量呈极显著正相关(P<0.01),PRL、E2和STAT5含量变化两两间均呈极显著正相关(P<0.01);P4含量变化与PRL、E2、STAT5含量和产奶量变化的相关性均不显著(P>0.05)。综上所述,在奶牛回乳期间,血清中PRL、E2和STAT5含量均呈降低趋势并显著正相关,而P4含量变化不显著且与其他激素无显著相关性,为进一步研究泌乳相关激素调控奶牛回乳的作用机理提供理论依据。

奶牛静脉血、胎盘组织、脐静脉血及犊牛静脉血脂联素与犊牛初生重相关性研究

为探究奶牛静脉血、胎盘组织、脐静脉血和犊牛静脉血中脂联素之间及与犊牛初生重的相关性,选取规模化养殖场正常分娩奶牛54头,按犊牛初生重将奶牛分为3组:A组,≤40kg,9头;B组,40~45kg,25头;C组,≥45kg,20头。分别采集分娩奶牛颈静脉血、胎盘组织、脐静脉血及犊牛颈静脉血,ELISA法检测血液及胎盘组织脂联素水平,相关分析法分析各样品之间及与犊牛初生重的相关性。奶牛静脉血脂联素水平((29.15±4.02)mg/L)高于脐静脉血((13.79±1.14)mg/L)与犊牛静脉血((13.46±0.94)mg/L)脂联素水平,差异极显著(P<0.01),脐静脉血脂联素水平高于犊牛静脉血脂联素水平,但差异性不显著(P>0.05);奶牛静脉血脂联素水平与胎盘组织、脐静脉血、犊牛静脉血脂联素水平以及胎盘组织脂联素水平与脐静脉血、犊牛静脉血脂联素水平相关性均不显著(P>0.05),脐静脉血脂联素水平与犊牛静脉血脂联素水平极显著正相关(P<0.01);犊牛初生重与奶牛静脉血脂联素水平无显著相关性(P>0.05),与脐静脉血、胎盘组织脂联素水平极显著正相关(P<0.01),与犊牛静脉血脂联素水平显著正相关(P<0.05);奶牛静脉血、胎盘组织、脐静脉血脂联素水平及犊牛静脉血脂联素水平在公、母犊间差异均不显著(P>0.05)。脐静脉血、胎盘组织脂联素水平对犊牛初生重有非常显著的影响,犊牛静脉血脂联素水平对犊牛初生重具有一定影响,而奶牛静脉血脂联素水平对犊牛初生重的影响不显著;奶牛静脉血、脐静脉血、胎盘组织及犊牛静脉血脂联素水平在公、母犊间差异均不显著。

血清瘦素和胰岛素与犊牛初生重相关性

本实验旨在研究分娩奶牛(Bos taurus)、犊牛和脐静脉血瘦素、胰岛素之间的相关性及与犊牛初生重的相关性,为探究瘦素、胰岛素对犊牛初生重的影响机理提供理论数据。实验选取规模化养殖场正常分娩奶牛54头,按犊牛初生重划分为A组(≤40 kg)9头、B组(40~45 kg)25头、C组(≥45 kg)20头共3组,分别采集分娩奶牛、犊牛和脐静脉血,ELISA法检测血清瘦素、胰岛素含量。多组间采用单因素方差分析和双变量Pearson分析瘦素和胰岛素在各部位静脉血中表达的相关性及与犊牛初生重的相关性。结果表明:(1)奶牛静脉血瘦素、胰岛素含量极显著高于犊牛静脉血和脐静脉血(P<0.01),奶牛静脉血瘦素、胰岛素含量与犊牛静脉血和脐静脉血瘦素、胰岛素相关性均不显著(P>0.05);(2)瘦素、胰岛素含量在犊牛静脉血与脐静脉血之间均差异不显著(P>0.05),犊牛静脉血瘦素、胰岛素含量与脐静脉血瘦素、胰岛素均分别呈极显著正相关(P<0.01);(3)奶牛静脉血和脐静脉血中瘦素与胰岛素含量均呈显著正相关(P<0.05),而犊牛静脉血中瘦素与胰岛素相关性不显著(P>0.05);(4)犊牛初生重与奶牛静脉血瘦素、胰岛素含量均不相关(P>0.05),但与犊牛静脉血和脐静脉血瘦素含量显著正相关(P<0.05),与犊牛静脉血和脐静脉血胰岛素含量极显著正相关(P<0.01);(5)奶牛静脉血、犊牛静脉血和脐静脉血瘦素和胰岛素含量在公犊牛与母犊牛间均无显著差异(P>0.05)。可见,奶牛静脉血、犊牛静脉血和脐静脉血均有瘦素、胰岛素表达,且其含量奶牛静脉血显著高于犊牛静脉血和脐静脉血。奶牛静脉血瘦素、胰岛素含量与犊牛初生重相关性不显著,而犊牛静脉血和脐静脉血瘦素、胰岛素含量与犊牛初生重显著正相关性。

鉴别犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法的建立

本研究针对野毒株与疫苗株的H基因设计特异性引物,通过优化反应体系和反应程序,建立了一种鉴别犬瘟热病毒(CDV)野毒株与疫苗株的SYBR GreenⅠ实时荧光定量方法。检测结果表明,该方法能特异性地检测CDV野毒株,与CDV疫苗株、犬细小病毒、犬腺病毒、犬冠状病毒和犬副流感病毒均无交叉反应。其标准曲线的相关系数达0.987。检出敏感性达6.22×101copes/L,比常规PCR检测方法高100倍。应用本方法检测了42份临床疑似CD样品,其中41份为野毒株感染,随机选取15份阳性样本进行H基因克隆测序,通过进化树分析显示它们均属于Asia-Ⅰ型,与疫苗株H基因相比同源性较低,核苷酸的同源性在90.3%~91.3%之间,氨基酸同源性在96.3%~97.2%之间。该方法的建立为临床上CDV的鉴别检测提供了依据。