运用二代测序技术确认PCR-SSOP法检出的HLA罕见等位基因

目的:确认PCR-序列特异性寡核苷酸探针(SSOP)法检出的4例磁珠探针HLA基因分型结果格局异常和3例模棱两可结果样本的HLA真实基因型。方法:对HLA高分辨组织配型血样采用PCR-SSOP法检出的4例磁珠探针HLA基因分型结果格局异常和3例模棱两可结果进一步采用PCR-直接测序分型(SBT)技术和二代测序(NGS)技术复检确认。结果:采用PCR-SSOP方法检出4例磁珠探针HLA基因分型结果格局异常的样本,加做SBT及NGS两种方法复检后结果显示,样本1的HLA-A分型结果与已知基因型不完全匹配,NGS分析显示,该等位基因与同源性最接近的等位基因A*31:01:02:01在第2外显子154位G>A变异,导致28位编码氨基酸由缬氨酸变为蛋氨酸(p.Val28Met),样本2的HLA-C结果为C*03:119, 06:02,样本3的HLA-C结果为C*03:03, 07:137,样本4的HLA-B结果为B*55:02,55:12。采用PCR-SSOP方法检出3例模棱两可结果样本,加做SBT及NGS两种方法复检后结果显示,样本5的HLA-B结果为B*15:58, 38:02,样本6的HLA-DRB1结果为DRB1*04:05, 14:101,样本7的HLA-DQB1结果为DQB1*03:34,05:02。其中等位基因C*03:119、C*07:137和DRB1*14:101均未收录于中国造血干细胞捐献者资料库的常见及确认等位基因(CWD)表2.4版本。结论:PCR-SSOP法磁珠探针HLA基因分型结果格局异常提示可能为HLA罕见等位基因或新等位基因,需要测序验证。

孕早期自发性流产与胚胎停育男性因素病例对照研究

目的探寻对孕早期自发性流产、胚胎停育具临床诊断价值的精液实验指标。方法 (1)应用非匹配的病例对照研究方法 ,调查病例组[孕早期有自发性流产和(或)胚胎停止发育现症史妇女的配偶31 5例]与对照组(正常生育男性52例+不育男性116例)精子核蛋白不成熟度、精子形态学、精液常规等多项实验指标水平,Logistic回归分析筛选影响因素;(2)以筛选出指标的临界值将病例组分为正常和异常2组,后者又分为经药物治愈和未经治疗两种状况,跟踪观察各组其配偶自发流产/胚胎停育、分娩状况的差异性。结果 (1)精子核蛋白不成熟度与孕早期自发性流产、胚胎停育有关(OR=1.060,95%CI:1.036～1.086), ROC曲线下面积0.734,临界值为32%;(2)病例组中精子核蛋白不成熟者其配偶自发流产/胚胎停育率、分娩率分别为:未治疗病例6 1.4%(5 1/8 3)、3 8.6%(32/83),治愈病例1 3.5%(1 2/89)、86.5%(77/89),两者相比差异具统计学意义(P<0.0001);病例组中精子核蛋白成熟者其配偶自发流产/胚胎停育率、分娩率为46.1%(47/1 02)和53.9%(55/1 02),与核蛋白不成熟未治疗病例配偶妊娠结局(自发流产/胚胎停育率分娩率分别为61.4%和38.6%)比较,差异具统计学意义(P<0.05)。结论精子核蛋白不成熟是孕早期自发性流产、胚胎停育的男性危险因素,但经药物治疗精子不成熟度得以改善后,可明显减少女方自发流产/胚胎停育率和提高分娩率。