兽用疫苗生产中常用细胞系的致瘤性研究

为确保生物制品研发及生产中使用的细胞基质的安全性,本试验对疫苗研发、生产中常用的7种细胞系的致瘤性进行了系统研究。将90只裸鼠随机平均分成9组,每组10只,试验组分HEK-293细胞组、HEK-293T细胞组、LLC-PK1细胞组、Marc145细胞组、PK15细胞组、Vero细胞组、ST细胞组、BHK-21细胞阳性对照组、胎猪原代二倍体肾上皮细胞阴性对照组,每组分别接种10只裸鼠。持续观察5周和12周后,对裸鼠进行剖检和病理组织学检测。试验结果显示,HEK-293细胞组、LLC-PK1细胞组、Marc145细胞组、PK15细胞组、Vero细胞组、ST细胞组接种后持续观察了12周,接种部位均无肿瘤发生;HEK-293T细胞接种裸鼠后接种部位出现肿块,病理组织学切片显示为鳞状细胞癌细胞;BHK-21阳性对照细胞组在接种部位产生了明显的肿块,猪原代肾上皮细胞阴性对照组接种部位无肿块,试验结果成立。由此可见,HEK-293细胞、LLC-PK1细胞、Marc145细胞、PK15细、Vero细胞、ST细胞均无致瘤性,在限定代次内可用于生物制品活疫苗生产,而HEK-293T具有较强的致瘤性,不能用于活疫苗生产,用于灭活苗生产时应进一步评价其安全性。

猪SLA-1分子结合多肽特性分析及功能验证

本文利用软件对我国商品猪群中表达频率较高的SLA-1*080101等位基因进行分析,找出了该等位基因所呈递的多肽抗原的第2位和第9位氨基酸的偏好性,确定该等位基因的结合多肽残基基序为:X-(L/V/I/T/M)-X-X-X-X-X-X-(Y/F/M)。再结合表位预测软件,预测了6条口蹄疫病毒CTL表位,并通过动物试验验证,确定其中2条具有较强的细胞免疫反应(P1和P4)。本试验结果为开发口蹄疫细胞免疫疫苗,完善现有产品保护性能提供了科学依据。

猪SLA-1体外表达及其结合多肽的筛选

本文将猪群中表达频率较高的SLA-1*1301胞外区及SLA-β2 m基因序列片段合成后连接到pET21a(+)原核表达载体上,构建出pET21a-SLA-1*1301和pET21a-SLA-β2m重组表达质粒。通过IPTG诱导大肠杆菌刺激产生大量的相关目标产物,再将所获得的质量比较高的SLA-1*1301胞外区表达蛋白、SLA-β2m蛋白分别与6条软件预测的口蹄疫细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位多肽进行蛋白复性和纯化,通过蛋白纯化仪分析,结果显示,其中4条预测口蹄疫CTL表位多肽可以形成稳定的SLA I-β2m-表位多肽复合体,表明该4条多肽可能为口蹄疫的CTL表位肽,对将来开发细胞免疫疫苗和相关免疫增强剂有重要的指导意义。

牛主要组织相容性复合物BoLA基因研究进展

牛主要组织相容性复合体MHC（BoLA）与移植排斥反应和免疫反应密切相关,是免疫学研究的重要内容。本文简述了牛BoLA分布、结构及其功能,介绍BoLA与疾病易感性,免疫应答调控之间的关系及表达产物结构方面的研究。1简介主要组织相容性复合物（major histocompatibility complex,MHC）是动物体内由紧密连锁、高度多态的基因座位所组成的一个基因家族。

3种口蹄疫O型抗体检测试剂盒对疫苗免疫牛血清抗体检测的比较试验

为了提供检测结果准确且操作便捷的试剂盒,本试验应用两种商品化试剂盒和本实验室研制的一种基于合成肽包被抗原的间接ELISA试剂盒同时对口蹄疫疫苗免疫后14、21和28 d的150份免疫牛血清进行口蹄疫O型抗体水平的检测,并对3种试剂盒测定结果的符合程度、重复性和便捷性进行了比较。试验结果表明3种试剂盒测得的抗体水平检测结果之间高度符合,且3种试剂盒各自的检测结果重复性良好,基于合成肽包被抗原的间接ELISA试剂盒在操作便捷性方面优势明显。

牛口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法的建立

根据牛口蹄疫O型3个拓扑型VP1序列设计3条合成肽,以此为包被抗原建立牛口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法,并对该方法敏感性、特异性和重复性进行验证。结果显示,该方法敏感性为96.7%,特异性为99.1%,批内和批间变异系数分别为2.1%-9.8%和3.5%-10.7%。与2种商品化试剂盒比较,符合率分别为93.5%和85.9%。结果表明,该方法敏感性好、特异性强、稳定性高,可用于牛口蹄疫O型抗体水平检测。

猪口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法的建立

根据猪口蹄疫O型流行毒株VP1序列设计出5条合成肽,以固相法合成并以此合成肽作为包被抗原建立猪口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法,并对该方法敏感性、特异性、重复性等进行验证。结果表明:该检测方法敏感性为96.0%,特异性为99.1%,批内与批间重复试验变异系数小于10.0%。比对试验结果显示,该检测方法与UBI猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒符合率为93.2%,与中国农业科学院兰州兽医研究所口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒符合率为85.7%。该猪口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法敏感性好、特异性强、稳定性高、操作简便,可用于检测O型口蹄疫抗体水平。

口蹄疫疫苗细胞免疫评价方法

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病.该病因宿主范围广、传染性强、传播迅速,严重危害发病地区的畜牧业发展,造成巨大的经济损失.目前,口蹄疫已经被世界动物卫生组织（OIE）列为A类传染病,发病地区和国家的畜产品进出口贸易将受到严重限制.口蹄疫病毒分为A、O、C、Asia、SAT1、SAT2、SAT3七个血清型.各个血清型之间缺乏交叉保护性,不同血清型的亚型和分离株间的抗原变异很大,给口蹄疫的防疫工作增加了难度.目前口蹄疫的防治以免疫接种为主,我国目前采用的疫苗主要为灭活苗和合成肽疫苗,农业部已将口蹄疫列为我国强制免疫的传染病之一.

酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素在猪体内的药代动力学研究

健康猪口服酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素(AIV),不同时间点采血,高效液相色谱法测定血药浓度,残数法拟合药时曲线,计算药动学参数。结果表明,6头猪口服AIV(20mg/kg体重)后,其药动学表现有吸收因素二室模型特征。最佳药时曲线方程为:C=0.654.e-2.059 3.t+0.981 3.e-3.097 3.t-1.635 3.e-63.319 7.t;吸收半衰期(t1/2Ka)为0.014 9±0.012 7d,消除半衰期(t1/2Ke)为0.113 8±0.055 5d,药时曲线下面积(AUC)为0.604 5±0.068 3(μg/mL).d。表明酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素在猪体内吸收迅速,消除相对较慢。

青岛市崂山区北宅街道做好“旅游+”文章助力全域旅游示范区创建

青岛作为知名的海滨旅游城市,红瓦绿树碧海蓝天是她的名片,素有“东方瑞士”的美誉,同时青岛也是国家历史文化名城、重点历史风貌保护城市、首批中国优秀旅游城市等。其中,崂山区北宅街道打造的全域旅游,也是青岛市的一张靓丽名片。

牛外周血T淋巴细胞增殖试验条件的优化

淋巴细胞增殖试验是体外检测T淋巴细胞功能的一种方法。淋巴细胞在体外培养条件下，与特异性抗原或非特异性有丝分裂原共同培养，使淋巴细胞的代谢和形态发生一系列的变化，可以使较小的淋巴细胞转化为体积较大、代谢旺盛，且能进行有丝分裂的淋巴母细胞。转化的淋巴细胞不仅能呈现出成熟的母细胞形态及蛋白质和核酸的增加，还能合成和释放细胞因子。因此可以使用淋巴细胞增殖试验反映机体的免疫状态。

MTT法评价猪口蹄疫合成肽疫苗的细胞免疫应答

为评价猪口蹄疫合成肽疫苗免疫猪后的细胞免疫应答,用含有E、F两种多肽抗原的猪口蹄疫合成肽疫苗免疫猪,二免后两周采血分离猪外周血淋巴细胞,再用E、F两种合成肽及二者混合物对淋巴细胞刺激培养48 h,用MTT法检测特异性T淋巴细胞增殖反应。结果显示,在抗原E、F混合物浓度为50μg/mL时,抗原对免疫组淋巴结细胞的刺激增殖作用显著高于未免疫对照组(P<0.01)。表明,该猪口蹄疫合成肽疫苗免疫猪能有效引起特异性T淋巴细胞免疫应答。

Influence of diffusion time on steel-mushy Al-7graphite bonding

The bonding of steel plate to Al 7graphite slurry was conducted using casting rolling technique. The influence of diffusion time on interfacial mechanical property and structure of bonding plate was studied. The results show that: under the condition of 510 ℃ for preheat temperature of steel plate and 32% of solid fraction of Al 7graphite slurry, the relationship between interfacial shear strength S and diffusion time t is S =25.3+4.47 t- 0.133t 2 +0.001t 3 . When diffusion time is 22.5 s, the largest interfacial shear strength 69.9 MPa is got, and the corresponding interface is made up of Fe Al compound and Fe Al solid solution alternatively and in a right proportion.

柱式反应器合成7-氨基-3-去乙酰氧基头孢烷酸的实验研究

7-氨基-3-去乙酰氧基头孢烷酸(7-ADCA)是一种重要的医药中间体,主要用于合成头孢类抗生素,目前工业上所使用的生产7-ADCA的搅拌式反应器对反应中的固定化酶的破坏作用特别大,为此本文着重研究了流化床和固定床反应器,并就反应时间、功率消耗方面与搅拌式反应器进行了对比,得出固定床反应器反应效果与搅拌式相当,但其功率消耗小,对酶的破坏小,是很好的替代反应器;另外还测定了固定化酰化酶的动力学参数:米氏常数、最大反应速率、底物抑制常数,数值具体分别为:Km=9.650 3 mmol/L、Vm=0.902 4 mmol/L、Ks=256.2 mmol/L。