应用免疫磁珠-PCR技术分选及检测尿中的膀胱癌细胞

建立以微卫星不稳定性为指标，免疫磁珠－ＰＣＲ技术检测尿中的肿瘤脱落细胞的方法。用膀胱癌单克隆抗体ＢＤＩ－１与磁珠结合，制备出免疫磁珠ＢＤＩ－１－ＩＭＢ，与膀胱癌细胞有特异性吸附效应，而对人直肠癌细胞ＬＯＶＯ无此作用。结合ＰＣＲ技术，建立了分选及检测血尿中的膀胱癌细胞株ＥＪ细胞的方法。结果显示尿液中有５个ＥＪ细胞即可被分选及检测出。该方法是一种特异强，敏感性高，简便快速的检测技术。

生物导弹——制服膀胱癌的新武器

1906年德国著名的免疫学家埃利希首次提出对肿瘤进行导向治疗的设想。他认为把能与肿瘤特异结合的分子与能杀死癌细胞的药物结合在一起就可以制备出一种在体内能特异杀死肿瘤细胞,而不损伤正常组织的杂交分子,他将这种分子称作“魔弹”。在以后漫长的岁月里虽然有些科学家想使埃利希的这一设想付诸实践。

抗人膀胱癌单克隆抗体的^（99m）Tc标记及荷瘤裸鼠放射免疫显像

抗人膀胱癌单克隆抗体ＢＤＩ－１通过２－巯基乙醇直接还原法标记９９ｍＴｃ制备了９９ｍＴｃ－ＢＤＩ－１。质量控制实验结果表明，标记率为６９．９％，分离纯后标记抗体的放化纯度高于９０％。标记抗体的免疫活性分数为８１％，亲和常数为１．２２×１０－９Ｍ－１。在上述结果基础上，研究了标记抗体在荷人膀胱癌裸鼠体内的分布及放射免疫显像。９９ｍＴｃ－ＢＤＩ－１经尾静脉注射后，分别在４、１６及２２小时γ照相后断颈处死小鼠，取脏器称湿重并计数。９９ｍＴｃ－ＢＤＩ－１注射后２２小时肿瘤清晰显示，肿瘤对标记抗体的吸收率为２０．７％ＩＤ／ｇ；平均Ｔ／ＮＴ为１０．５２，最小Ｔ／ＮＴ为２．９０（肿瘤／肾脏）；最大Ｔ／ＮＴ为２０．７（肿瘤／小肠或肌）。

抗人膀胱癌免疫毫微球的制备及活性检测

人膀胱癌单克隆抗体ＢＤＩ－１通过异型双功能交联剂ＳＰＤＰ与载阿霉素人血清白蛋白毫微球偶联，制备了免疫毫微球ＤＢＩ－１－ＨＳＡ（ＡＤＲ）－ＮＳ。此免疫毫微球在体外对人膀胱场细胞ＢＩＵ－８７及Ｅ－Ｊ有特异杀伤效应，而对人直肠癌细胞Ｌｏｖｏ无杀伤；荷瘤裸鼠体内实验表明，此免疫毫微球可明显抑制人膀胱癌细胞的生长。

免疫毒素导向治疗膀胱癌的实验与临床研究

用抗人膀胱癌单克隆抗体ＢＤＩ－１与苦瓜毒素（ＭＤ）通过化学交联制备的抗人膀胱癌免疫毒素（ＢＤＬ－１－ＭＤ）在体外可以特异地杀伤人膀胱癌细胞；在载瘤裸鼠体内可以明显地抑制人膀胱癌的生长。临床对１８例膀胱癌患者施行膀胱灌注免疫毒素的导向治疗，其中肿瘤Ⅰ级６例，Ⅱ级７例，Ⅲ级５例；首发瘤１４例，复发瘤４例。随访８～２８个月，平均１２．５个月，１７例未复发，１例复发（５．５％）。表明ＢＤＬ－１－ＭＤ在清除膀胱内小于１ｃｍ小瘤灶及防止术后复发方面具有明显效果。

^(99m)Tc标记单克隆抗体膀胱内灌注诊断膀胱癌

目的使放射免疫显像诊断膀胱癌更加简便、安全、可靠。方法采用抗人膀胱癌单克隆抗体ＢＤＩ－１通过２－巯基乙醇直接还原法标记９９ｍＴｃ（９９ｍＴｃ）制备了９９ｍＴｃ－ＢＤＩ－１。结果标记率为６９．９％，放化纯度大于９５％。３３例患者接受了通过膀胱内灌注的放射免疫显像诊断，其中４例非膀胱癌患者均未见显像，２９例膀胱癌患者肿瘤显像阳性率为８８．５％。原发和复发肿瘤均可获得清晰的显像，显像肿瘤最小为０．５ｃｍ，肿瘤细胞分级包括Ｇ１～Ｇ３。显像结果与膀胱镜检结果完全符合者占６５．２％，１１例多发肿瘤中有７例（６３．６％）显像结果在肿瘤数目、位置及大小上与膀胱镜检有所差异。结论该方法为膀胱癌的诊断提供了一种新的安全有效的手段。

膀胱癌染色体微卫星不稳定性及杂合性丢失

目的 探讨染色体微卫星不稳定性（ ＭＳＩ） 及杂合性丢失（ＬＯＨ） 在膀胱癌早期诊断中的意义。 方法 运用位于４ 、５ 、９ 、２１ 号染色体上的四对微卫星标志，结合ＰＣＲ 银染技术，分别检测２２例膀胱癌患者肿瘤组织及尿脱落细胞染色体ＭＳＩ及ＬＯＨ。 结果 肿瘤及尿液标本ＭＳＩ的发生率分别为２３ ％ 、１９ ％ ，ＬＯＨ 发生率分别为４１ ％ 、１８ ％ ，至少有一个位点出现ＭＳＩ或ＬＯＨ 分别为５９ ％ 及３２ ％ 。不同年龄、性别、临床分期、肿瘤组织分级的患者ＭＳＩ与ＬＯＨ 的发生率差异均无显著性（ Ｐ＞０ ．０５） 。 结论 检查尿液中肿瘤脱落细胞的ＭＳＩ及ＬＯＨ 可能成为膀胱癌筛选及监测复发的辅助方法。

前列腺癌放射免疫显像的实验研究

采用二巯基乙醇直接还原法将Ｔｃ９９ｍ放射性核素标记抗人前列腺癌单克隆抗体ＹＤＰＣ，标记物经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ５０柱，获得纯化的标记抗体ＹＤＰＣ９９ｍＴｃ，薄层层析检测其放射化学纯度为９７％。ＹＤＰＣ９９ｍＴｃ经尾静脉注射入荷人前列腺癌裸鼠体内，２４小时后行γ照相，可以得到前列腺癌的特异显像，而同一裸鼠体内的人直肠癌移植瘤没有显像。结论：ＹＤＰＣ９９ｍＴｃ放射免疫显像具有前列腺癌特异性。