内蒙古地区传统发酵乳中乳酸菌的分离与鉴定

对内蒙古地区传统发酵乳中乳酸菌进行分离并鉴定。以蒙古族传统发酵乳为材料,采用传统的细菌纯培养分离方法分离乳酸菌株,通过形态学特征及生理生化试验初步确定乳酸菌的基础上,进一步利用细菌16S r DNA基因序列分析和系统发育进化树构建,对其种属进行分析鉴定。分析鉴定结果显示,分离得到的29株乳酸菌共鉴定为2个属,6个种。2个属分别为乳酸杆菌属(Lactobacillus)和肠球菌属(Entercoccus),6个种分别为短乳杆菌(Levilaccillus brevis,4株)、植物乳杆菌(Lactiplantibacillus plantarum,8株)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis,9株)、鸡肠球菌(Enterococcus gallinarum,3株)、蒙氏肠球菌(Enterococcus mundtii,1株)、耐久肠球菌(Enterococcus durans,4株)。该研究采集的发酵乳样品中乳酸菌资源丰富,代表着内蒙古蒙古族传统发酵乳制品中优势性乳酸菌菌种,为优良发酵剂的研发奠定了微生物资源基础。

牛乳质量检测方法的研究进展及其对乳品安全的意义

随着我国科技的进步和经济的快速发展,健康先行的理念深入人心,国民对饮食的营养搭配逐渐重视,牛乳制品凭借着食用方便、高营养易吸收等优点,逐渐成为了餐桌的必需品。奶以安为要,为确保乳品安全,对其进行严格的质量检测至关重要。综述了牛乳质量3项指标的检测方法,并分析了先进的检测技术对乳品公共卫生安全的重要意义,旨在为乳品业提供参考。

牛乳腺炎粪肠球菌cylA基因对牛外周血单核巨噬细胞完全吞噬功能的影响

探索奶牛乳腺炎粪肠球菌cylA基因对体外培养的单核巨噬细胞完全吞噬功能的影响。通过体外培养牛外周血单核巨噬细胞(BMC-7),利用牛乳腺炎粪肠球菌野生型菌株(BME1708)和cylA基因敲除突变株(BME1708ΔcylA)按照不同时间梯度侵染BMC-7,利用台酚蓝染色显微镜观察法,统计不同时间BMC-7对BME1708和BME1708ΔcylA的吞噬率和吞噬指数的差异。结果表明随着时间的延续,吞噬率和吞噬指数存在动态变化,至48 h时BMC-7对BME1708的吞噬率和吞噬指数分别为25%和2.3,而对BME1708ΔcylA的吞噬率和吞噬指数分别为50%和5.5。随着时间的进一步延续,巨噬细胞开始死亡。说明溶血素cylA基因阳性的粪肠球菌菌株对巨噬细胞的吞噬作用具有一定的负调控作用,并且在巨噬细胞内的存活率相对高,在单核巨噬细胞内存在一定的“内生”现象,这一现象可能是由该致病菌引起的牛乳腺炎常反复、难治愈的分子机制之一。

应用GPV VP3基因重组原核表达产物建立检测抗体的ELISA方法研究

利用鹅细小病毒（GPV）VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg／mL，其中间接-ELISA 100μL／孔、Dot-ELISA 5μL／点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅IgG的工作浓度是1：200，检测血清的最适稀释度是1：400，阳性判定标准为OD492≥0．20，且P／N≥2．0。用此方法检测弱毒疫苗免疫血清，其抗体滴度在1：400～1：51200。Dot-ELISA的结果与间接-ELISA的结果一致。

鹅细小病毒VP1与VP3非重叠序列的克隆与原核表达

根据鹅细小病毒 GPV H1株基因组核苷酸序列设计了一对引物 ,对其结构蛋白 VP1与 VP3非重叠核苷酸序列进行 PCR扩增 ,并克隆到表达性载体 p GEX- 6 p- 1,经酶切鉴定筛选出阳性克隆 ,并转化到大肠杆菌 BL 2 1(ED3) plys S进行原核表达 ,并用 SDS- PAGE鉴定 ,结果表明融合蛋白在表达性细菌 BL2 1中重获得了高效表达。

牛乳腺炎无乳链球菌表面蛋白pgk抗原优势区的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

为评价牛乳腺炎无乳链球菌重组表面蛋白(pgk)免疫原性,并通过建立检测抗体的间接ELISA方法对免疫抗体效价进行评价,本研究根据GenBank登录的无乳链球菌pgk基因序列,设计一对引物,以临床分离菌株基因组DNA为模板PCR扩增出pgk蛋白抗原优势区的编码基因序列。将其插入pET-30a(+)中,并在大肠杆菌中表达。Western blot鉴定表明,表达的重组蛋白与阳性血清具有良好的反应原性。采用纯化的表达产物作为包被抗原建立了检测无乳链球菌抗体的间接ELISA方法,确定抗原最佳包被浓度为3.115μg/mL,血清最佳稀释度为1∶160,酶标二抗最适稀释度为1∶4 000。初步应用于检测无乳链球菌、化脓性链球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌小鼠阳性血清的检测。结果表明牛乳腺炎无乳链球菌pgk亚单位抗原具有良好的抗原性,抗体检测灵敏度达到1∶4 000,同时表现良好的特异性。

用地高辛标记核酸探针检测鹅细小病毒的研究

从带有鹅细小病毒(GPV)NS1基因的重组质粒pMD18T NS1用限制性内切酶EcoRI和BamHI双酶切回收1880bp大小片段,并制备出地高辛标记的GPV核酸探针。其标记效率达到0 01pg/μl。特异性检测结果表明,该探针能与GPV不同毒株核酸发生特异性杂交,而与对照的DPV、GPPV等病毒的核酸杂交反应均为阴性;敏感性检测结果表明,该探针对GPV的最低检出量为0 0224pg。该探针对不同方法处理的GPV感染病料进行检测,均出现杂交阳性。表明所研制的标记探针用于GPV的检测是可行的。

牛乳中致病性金黄色葡萄球菌快速检测胶体金免疫层析方法研究

为建立快速检测牛乳中致病性金黄色葡萄球菌(S.aureus)的胶体金免疫层析方法,本研究将鼠抗S.aureus IgG进行胶体金标记,并喷涂于玻璃纤维上制备金标垫,分别以兔抗S.aureus nEBPS重组蛋白IgG和羊抗鼠IgG作为检测线和质控线,组装制备快速检测牛乳中致病性S.aureus胶体金免疫层析试纸条。结果表明:试纸条对致病性S.aureus具有高度特异性,与沙门氏菌、大肠杆菌、布氏杆菌无交叉反应;试纸条最低检出1.0×105cfu/mL的S.aureus。试纸条批内及批间检测试验均具有良好的重复性。试纸条与S.aureus分离鉴定法符合率为90.0%、与PCR试剂盒符合率为83.3%。表明本研究建立的牛乳中致病性S.aureus免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单、快捷等特点,适合于牛乳中致病性S.aureus的现场快速检测。

应用PCR技术检测鹅细小病毒

根据鹅细小病毒GPVH1株结构蛋白VP1与VP3编码基因非重叠核苷酸序列设计了一对引物GPR1 /GPR2 ,用这对引物对感染器官内的GPR和接种鹅胚增殖的GPV进行PCR扩增 ,其结果引物GRP1 /GPR2能特异性地扩增GPVVP1 VP3区段核苷酸序列 ,扩增出与设计核苷酸片段大小相符的 0 6kb的序列 ,而对照的鹅副粘病毒cDNA及鸭瘟病毒 (DPR)DNA对照组均出现阴性结果。

牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿辅助蛋白AP1、BP、AP2三基因的串联表达及其免疫原性研究

为探究无乳链球菌菌毛岛屿3个亚基AP1、AP2、BP融合蛋白的抗原性,本研究根据该3个亚基基因的主要抗原结构域序列设计并合成引物,通过重叠延伸PCR技术获得上述3个亚基的串联核苷酸片段,并插入pET-30a(+)载体,转化至BL21(DE3)感受态细胞后诱导表达,表达蛋白经亲和层析纯化后进行western blot鉴定和小鼠免疫实验。结果表明,AP1-AP2-BP融合抗原具有良好的反应原性和免疫原性。本研究为进一步研究无乳链球菌基于AP1-BP-AP2融合蛋白的致病机制、检测制剂及亚单位疫苗研制提供了实验依据。

GPV野毒株的分离及PCR检测方法的应用

在本实验中 ,用根据CPVHl标准毒核苷酸VP1_VP3和VP3两个区段基因序列设计的 2对特异性引物GRPl/GRP2和GFl/GF2 ,用该 2对引物对从鹅细小病毒野毒感染的病鹅分离的GPV野毒株进行PCR检测 ,结果 2对引物GRPl/GRP2和GFl/GR2 ,均能特异性地扩增出与预期片段大小相符的 0 .6bp和 1.6bp两个片段。回归试验的结果表明 ,该GFV野毒株的感染潜伏期为 8d ,病程为 1～ 3d ,致死率达 10 0 %。

GPV野毒株鉴定及其致病力试验

在送检的小鹅瘟病料中分离到1株病毒,经NS1基因特异性引物扩增后确定是GPV。用该对引物对从鹅细小病毒野毒感染的病鹅分离的GPV野毒株进行PCR检测,结果该对引物能特异性地扩增出与预期片段大小相符的1.9kb片段。回归试验结果表明,该GPV野毒株的感染潜伏期为8天,病程为1～3天,致死率达100%;对雏鹅半数致死量LD50为3.4。

通辽地区奶牛乳房炎无乳链球菌的分离与鉴定

为研究通辽地区奶牛乳房炎优势性病原菌，试验对30份奶牛临床型乳房炎奶样进行细菌分离，经血液琼脂平板分离培养、生化试验及药敏试验共分离到14个菌株，最终鉴定为无乳链球菌。药敏试验结果表明，分离菌株对临床上常用的链霉素及磺胺类药物均已产生不同程度的耐药性，而对卡那霉素、庆大霉素及麦迪霉素表现出较好的敏感性。

鹅细小病毒VP1-VP3非重叠序列地高辛探针的制备和应用

根据 GPV H1株核苷酸序列 ,设计了扩增 VP1- VP3基因非重叠序列的 1对引物 ,对其结构蛋白 VP1与 VP3非重叠核苷酸序列进行 PCR扩增 ,将 PCR产物纯化、回收后制备出 GPV VP1- VP3基因 DIG标记核酸探针 ,其标记效率达到0 .1pg/μl。特异性检测结果表明 ,该探针能与 GPV不同毒株核酸发生特异性杂交 ,而与对照的 DPV、GPMV等病毒的核酸杂交反应均为阴性 ;敏感性检测结果表明该探针对 GPV的最低检出量为 0 .0 32 ng。上述试验结果表明该探针可以用于

蒙药材黄柏的本草考证

经调查考证,各地传统医学所用的黄柏不尽相同,其基源植物有2科2属多个种,正品黄柏为小檗科Berberis属植物。因历代医籍的传乘有异,以及各家临床用药有别,黄柏的原植物也发生了变迁。中医所用的川黄柏为黄皮树Phellodendron chinense Schneid,关黄柏为黄柏P.amnrense Rupr.,蒙、藏医所用的正品黄柏为刺叶小檗Berberis sibirica Pali。在传承经典医籍的过程中,吸收兄弟医药学的精华,结合生长环境以及历代的用药经验,蒙、藏医沿用了Berberis属黄芦木Berberis amurensis Rupr.、匙叶小檗B.vernae Schneid.、鄂尔多斯小檗B.caroli Schnei.、细叶小檗B.poiretii Schneid.、兴安小檗B.xinganensis G.H.Liuet S.Q.Zhou.、珊瑚刺B.dasystachya Maxim、刺檗B.vulgarisL.的同时,也用市场上供应的中药黄皮树P.chinense Scbreid.和黄柏P.amurense Rupr.。

蒙药“阿那日-8”中金属元素含量测定

目的:测定蒙药"阿那日-8"中金属元素含量。方法:采用原子吸收光谱法和原子荧光光谱法分别测定蒙药"阿那日-8"中的10种重金属的含量。结果:蒙药"阿那日-8"中Ca、Mg、Mn、Zn、Cu、Fe、Pb、Cd、As、Hg的含量分别为1 284.69mg/100 g、209.67 mg/100 g、10.64 mg/100 g、3.62 mg/100 g、0.80 mg/100 g、109.03 mg/100 g、2.00 mg/kg、0.20 mg/kg、1.42 mg/kg、0.10 mg/kg。结论:方法操作简便、快速,且准确度和精确度高,适用于蒙成药中这10种重金属的含量测定。

牛乳中无乳链球菌PCR快速检测方法的建立

根据GenBank公布的的SIP基因序列,设计一对特异性引物,通过对PCR方法的优化,建立了牛无乳链球菌性乳房炎的快速PCR检测方法。用建立的PCR检测方法对患牛乳中无乳链球菌总DNA进行扩增,获得大小为945bp的DNA片段。特异性试验表明,停乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌DNA均未扩出条带;敏感性试验表明,该对引物能够检测到的最低DNA浓度为1.25ng;重复试验表明该方法具有良好的重复性和稳定性。

奶牛无乳链球菌内蒙古分离株SIP基因的克隆与序列分析

试验根据GenBank公布的牛源无乳链球菌SIP基因序列设计并合成1对引物,通过PCR扩增获得SIP基因部分扩增产物。序列分析结果表明:SIP基因扩增产物大小为945 bp,编码315个氨基酸残基。标准菌株(+株)与内蒙古分离株(M株)的基因及氨基酸同源性为100%,这2个菌株与Gen-Bank上公布的B群无乳链球菌菌株(DQ914274)SIP基因及氨基酸同源性达到98.94%及99.68%。