N-葡萄糖基-L-半胱氨酸对大鼠的排铅作用研究

目的 :对一种拟申报促进排铅作用的保健食品中的主要有效成分—— N-葡萄糖基 - L -半胱氨酸 (NGL C)进行大鼠排铅作用评价。方法 :采用 SD雄性大鼠 ,按体重随机分为六个组 ,即正常对照、高铅模型对照、 EDTA对照、以及NGL C5 0 mg/ kg. bw、 10 0 m g/ kg. bw和 2 0 0 m g/ kg. bw三个剂量组。除正常对照组外 ,其余各组饲料均含 10 0 ppm铅。在第二周末和第四周末分别收集模型对照组、 EDTA对照组和 NGL C高剂量大鼠的三天粪便 ,测铅含量。在四周末和第七周末每组处死部分大鼠 ,测定血液、股骨、肝脏、肾脏铅含量。结果 :NGL C能显著降低高铅摄入大鼠的血铅、股骨铅、肝铅和肾铅含量 ,且有较好的剂量反应关系 ,但对粪铅排出无明显影响。结论 :NGL

TK基因突变试验——琼脂平皿法与微孔平板法的比较

目的 TK(thymidinekinase)基因突变试验可采用琼脂平皿法或微孔平板法 ,本研究旨在比较两种方法的优劣 ,为选择一种适于在国内推广的方法提供依据。方法 同时使用琼脂平皿法和微孔平板法对四种化学物 (MMS、EMS、MMC、KCl)的致突变性进行检测与评价。结果 两种方法检出三种诱变剂的结果基本一致 ,但对KCl而言 ,琼脂平皿法检测结果为阴性 ,而微孔平板法检测结果为阳性。结论 就目前实验结果来看 ,宜推广琼脂平皿法在国内的应用。最终结论尚需增加更多受实物后才能确定。

L5178Y与TK6细胞的TK基因突变实验比较

目的 比较 L 5 178Y与 TK6细胞在 TK基因突变试验系统中的异同和优劣。方法 采用 L 5 178Y和TK6细胞做 TK基因突变试验微孔平板法 ,对四种受试物 (MMS、EMS、MMC、KCl)的致突变性进行检测与评价。结果 两种细胞对四种受试物的检测结果基本一致 ,但 TK6细胞对四种受试物的耐受性均低于 L 5 178Y细胞 ,且相对突变指数显著高于 L 5 178Y细胞。结论 两种细胞应用于本试验各有其优越性 ,但由于 TK6细胞来自于人类 ,实际应用意义大于 L 5 178Y细胞 ,建议推广 TK

社区老年人营养知识、态度、行为调查

近年来，人口老龄化已成为全球面临的重要公共卫生问题，中国是世界上老年人口最多的国家，一些大城市已进入老龄化城市的行列，且老年慢性病（如：高血压、糖尿病、高脂血症等）的发病率呈逐年上升趋势，因此老年人的健康问题越来越受到社会的普遍关注。研究表明，许多老...

柱前电化学衍生-高效液相色谱法测定水产品中孔雀石绿及隐性孔雀石绿

建立柱前电化学氧化-高效液相色谱测定水产品中孔雀石绿（MG）及隐性孔雀石绿（LMG）残留量的方法。试样经乙酸铵缓冲液/乙腈提取,酸性氧化铝吸附剂净化,乙腈和乙酸铵缓冲液（78∶22,ν∶ν）等度洗脱,柱前600 m V电压下LMG被氧化衍生成MG,618 nm波长检测,测定结果为总量;当电压为0 m V时,结果仅为样品中MG含量。并在各自相应浓度范围内线性良好,相关系数不低于0.996,三水平加标平均回收率为76.0%~95.0%,相对标准偏差（RSD）为1.7%~8.6%。方法的检出限为2.0μg/kg,定量限为5.0μg/kg。方法精密度、准确度和检出限等性能指标均达到兽残分析的要求,可用于水产品中的孔雀石绿及隐性孔雀石绿的检测。

昆明山海棠总生物碱诱导小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变的研究

目的 :研究昆明山海棠 (THH)总生物碱对小鼠淋巴瘤L5 178Y细胞tk基因的影响。方法 :用抽提的THH总生物碱对L5 178Y细胞进行浓度梯度染毒 ,不同时间点进行单细胞微孔接种 ,计数阳性集落 ,测定细胞接种效率、相对存活率、相对悬浮增长率和突变频率。结果 :随着THH总生物碱作用剂量的增加 ,L5 178Y细胞相对存活率和相对悬浮增长率均明显下降 ;在 0 .1～ 2 .0 g·L-1范围内可诱导细胞tk位点的突变 ,诱发突变频率是自发突变频率的 2～ 9倍。在tk位点诱发了两种不同表型的突变集落 ,即大集落与小集落 ,但以大集落为主 ,这一现象可能与THH的作用机制有关。结论 :THH总生物碱对L5 178Y细胞具有肯定的细胞毒性与诱导基因突变作用。

联苯胺对k-ras基因DNA损伤位点研究

目的在核酸序列水平定位检测联苯胺对k-ras基因的DNA损伤。方法联苯胺染毒TK6细胞,提取基因组DNA,制备k-ras基因外显子2的单链探针,应用依赖随机化末端连接物PCR进行Southern blot杂交,对产物进行测序分析。结果联苯胺染毒剂量100μmol/L检测到较k-ras外显子2短的一条清晰的杂交条带,测序结果表明linker与k-ras外显子2的第66位碱基T发生连接。结论首次证实联苯胺可引起k-ras外显子2发生DNA损伤,该损伤位点位于k-ras外显子2的第65位碱基G,可能是联苯胺重要的致癌作用靶点。

QuEChERS-液质联用法测定水果蔬菜中氯吡脲残留

[目的]采用快速提取-高效液相色谱-串联质谱法(Qu ECh ERS-HPLC-MS/MS)建立水果蔬菜中氯吡脲残留的检测方法。[方法]样品经含0.1%乙酸的乙腈溶液提取,经Qu ECh ERS法净化后采用HPLC-MS/MS法测定其氯吡脲残留量。[结果]该方法下氯吡脲在水果蔬菜中的检出限(LOD)为1.0μg/kg,定量限(LOQ)为5.0μg/kg。在2.0~100.0μg/L范围内线性关系良好(R^2>0.999)。在10.0~500.0μg/kg的添加水平上,方法的平均回收率介于72.0%~115.0%,方法的相对标准偏差为1.5%~9.8%。[结论]该方法适用于水果蔬菜中氯吡脲的测定。

气质联用法测定轻工产品中7种REACH高关注挥发性有机溶剂的研究

乙二醇单甲醚、乙二醇单乙醚、N,N-二甲基甲酰胺、乙二醇二乙醚、乙二醇乙醚乙酸酯、二乙二醇二甲醚和N-甲基吡咯烷酮是一类优良的有机溶剂,但由于其潜在的生殖毒性,被REACH定为高关注物质。利用气相色谱-质谱法建立检测轻工产品(纺织品、皮革、竹木制品)中这7种挥发性有机溶剂的简单方法。提取方法为30℃甲醇超声水浴提取。方法的回收率高于91.7%。这个方法被成功应用于测定轻工产品中的这7种挥发性有机溶剂。

皮革材质鉴定的研究进展

介绍了革制品中皮革鉴别的实用方法和研究热点,以及建立准确的革制品皮革鉴定方法的重要性。

细胞固定剂对GFP发光特性影响的研究

为了筛选可用于保持绿色荧光蛋白(GFP)发光特性的细胞固定剂,采用6种细胞固定剂分别在室温和4℃条件下对表达GFP的HepG2细胞进行固定,然后在荧光显微镜下观察GFP发光情况,并采用荧光酶标仪测定细胞荧光值。结果表明,无论是在室温还是在4℃条件下,95%乙醇、甲醇、5%冰醋酸、Carnoy固定液固定细胞后绿色荧光迅速消失,而丙酮和4%多聚甲醛固定细胞后仍可保持足够强的绿色荧光,但保留的荧光强度随固定剂作用时间的延长和作用温度的升高而降低。因此,对表达GFP细胞进行固定时,宜选择丙酮和4%多聚甲醇作为固定剂,并降低作用温度、缩短作用时间,有利于保持细胞的绿色荧光。

RDPCR检测DNA损伤定位于核苷酸水平的研究

目的简化RDPCR建立程序,并在核酸序列水平精确定位DNA损伤。方法培养TK6细胞,抽提基因组DNA,制备k-ras基因外显子2的单链探针。扩增k-ras基因外显子2(以下称短片段)。酶切短片段和基因组DNA构建损伤模型,前者经依赖随机化末端连接物PCR(RDPCR)扩增,每一步产物作凝胶电泳,终产物与单链探针杂交显色,并进行测序;后者以短片段建立的实验条件进行RDPCR扩增,产物与单链探针杂交显色,并进行测序。结果凝胶电泳可见酶切短片段在RDPCR中每一步骤的目的产物条带;酶切短片段和酶切基因组DNA的RDPCR产物均在相应位置出现杂交条带,测序证实损伤均位于HinfI在k-ras外显子2上的酶切位点。结论短片段建立RDPCR的实验条件简单易行;并首次利用RDPCR检测DNA损伤精确定位于核酸序列水平的碱基位置。

WTK1细胞tk基因突变的多重PCR分析

目的探讨WTK1细胞tk位点自发和诱发突变体的突变谱和突变热点。方法用甲磺酸甲酯、丝裂霉素C和叠氮钠染毒WTK1细胞后,筛选出tk基因突变集落,用多重PCR方法对WTK1细胞tk基因突变谱进行分析。结果三种受试物均能诱导WTK1细胞tk位点突变频率增高,且存在剂量-反应关系;所分析的突变体中绝大部分缺失tk基因外显子4和5-7。结论三种受试物对WTK1细胞均有致突变作用;tk位点的突变存在明显的突变热点。

长春花碱和秋水酰胺诱导TK6和TK6-E6细胞TK基因突变比较研究

目的比较TK6和TK6-E6人类淋巴母细胞TK基因突变试验对2种纺锤体毒物——长春花碱(VBL)和秋水酰胺(CCM)检出情况的差异。方法用长春花碱和秋水酰胺处理TK6和TK6-E6细胞24小时,进行常规TK基因突变试验,检测细胞毒性及tk位点突变频率。结果随着长春花碱和秋水酰胺浓度的增加,TK6和TK6-E6细胞的相对存活率(RS%)和相对悬浮生长率(RSG%)均降低。相同剂量下,TK6-E6细胞的RS%和RSG%均比TK6高。长春花碱和秋水酰胺对TK6和TK6-E6细胞均有致突变性,TK6-E6细胞的诱发和自发突变频率高于TK6,而除了突变频率(MF)中CCM5·0ng/ml组和SC%中CCM0·625ng/ml组外,其它相同剂量下,TK6-E6的MF和慢生长集落百分比(SC%)均高于TK6细胞(P<0·05)。结论两种细胞都可用于TK基因突变试验,但由于TK6-E6所用细胞量少,倍增时间较短,故建议使用TK6-E6细胞。

鸡白痢沙门氏菌直接-多重PCR检测体系的建立

通过对鸡白痢沙门氏菌毒力质粒pSPUV上入侵质粒抗原J蛋白和质粒共转移调控因子的编码基因ipaJ和traJ的序列分析,在特异区域设计PCR引物,经沙门氏菌属不同种及常见肠道致病菌的交叉验证,筛选出三对鸡白痢沙门氏菌特异检测引物ipaJ-417、traJ-387、traJ-476.并且调试出一种利用两种DNA聚合酶的直接三重PCR检测体系:invA-211/traJ-387/16S-495,可以对鸡白痢沙门氏菌进行快速准确的鉴定.

长春花碱诱导TK6细胞tk位点杂合性丢失的研究

目的建立用人类淋巴母细胞TK 6检测纺锤体毒物——长春花碱的TK基因突变试验方法,同时探讨长春花碱的遗传毒性分子机理。方法使用长春花碱0.625 ng/mL、1.250 ng/mL、2.500 ng/mL和5.000 ng/mL对TK 6细胞染毒24 h,进行TK基因突变试验。检测细胞相对存活率(RS%)、相对悬浮增长率(RTG%)、tk位点突变频率(M F)和缓慢生长集落的百分比(SC%),同时对突变集落tk位点杂合性丢失(LOH)进行分析。结果随着长春花碱浓度的增加,TK 6细胞的相对存活率和相对悬浮增长率均降低,而tk位点突变频率逐渐增加,且有剂量反应关系。tk位点杂合性分析表明长春花碱诱发的突变集落中有96.4%为LOH丢失,其中半合子LOH为39.3%,纯合子LOH为57.1%。结论长春花碱可诱导TK 6细胞tk基因突变,主要以LOH为主。

超高效液相色谱法测定皮革中多胺物质的研究

皮革中氨基酸脱羧基可产生多胺类物质,毛皮鞣剂助染性聚酰胺多胺酚醛树脂,分解也可产生多胺类物质,多胺类物质具有致癌致畸性,目前国内外没有针对皮革材料建立多胺类物质的检测方法。研究通过振荡提取,超低温离心法净化提取液,柱前多胺与丹磺酰氯衍生,产物在254 nm荧光区处有最大吸收,建立了高效液相色谱检测皮革中多胺物质的方法。在优化的色谱条件下,检测低限在0.15 mg/L^0.20 mg/L,方法的回收率高于94.6%。方法被成功应用于测定皮革中的多胺物质。

不同理化条件对GFP发光特性影响的研究

为了优化可用于保持绿色荧光蛋白(GFP)发光特性的理化条件,本文采用不同离心转速、温度、pH分别在不同作用时间下对表达GFP的HepG2细胞进行处理,然后在荧光酶标仪测定细胞荧光值。结果表明:转速从1000r/min提升到10000r/min,作用时间从5min到15min,GFP的发光度变化也停留在4个百分点之内;在-70℃～50℃这个范围内不会明显的破坏GFP的发光特性,但当温度达到90℃时GFP的发光明显减弱,且随着作用时间的延长发光越弱;当pH由2～12的变化过程中,GFP的发光度也由弱变强再变弱,时间越长对GFP的破坏越大,发光度值也就越小。

HepG2和L5178Y细胞彗星试验检测甲磺酸甲酯和环磷酰胺遗传毒性的比较研究

为了探索HepG2细胞彗星试验的应用价值,采用HepG2和L5178Y细胞彗星试验检测了直接致突变物甲磺酸甲酯(MMS)和间接致突变物环磷酰胺(CP)的遗传毒性。结果表明,HepG2细胞彗星试验不需要外源活化系统就可检测出MMS和CP的遗传毒性,而L5178Y细胞彗星试验需要外源S9活化系统才能检测到CP的遗传毒性。因此,HepG2细胞彗星试验在检测间接致突变物时不需要外源活化系统,操作简便,有广泛应用价值。