银杏酸、阿奇霉素和大蒜素抗弓形虫增殖效果研究

目的评价银杏酸、阿奇霉素和大蒜素体外和体内抗弓形虫增殖的效果。方法体外试验,培养HFF细胞做为弓形虫宿主细胞,采用MTT法检测3种药物的安全浓度和体外抗弓形虫增殖的效果。体内试验,以腹腔注射的方式给药,观察感染弓形虫小鼠的存活时间,比较3种药物的体内抗弓形虫增殖效果。结果银杏酸和阿奇霉素可显著抑制细胞内弓形虫的增殖,两者效果相近。银杏酸和阿奇霉素均可延长小鼠存活时间。大蒜素抗弓形虫效果微弱。结论银杏酸具有抗弓形虫作用。

绦虫永久染色标本的制作技术

目的制作绦虫玻片染色标本用于教学和科研。方法用墨汁染色法制作绦虫妊娠节片玻片标本,卡红染色法制作绦虫成熟节片、头节和囊尾蚴玻片标本。结果妊娠节片、成熟节片、头节和囊尾蚴经染色制片后特征结构明显可见。如妊娠节片染色标本清晰可见染成墨汁颜色的子宫主干和分支状的子宫侧支,节片一侧边缘中部可见突出的生殖腔;成熟节片染色标本均染成红色,内有着色更深的雌雄生殖系统各一套。结论墨汁染色和卡红染色制作带绦虫染色标本效果好,可永久保存。

卡氏肺孢子虫肺炎大鼠模型的比较研究

目的 比较用SpragueDawley(SD)大鼠和Wistar大鼠建立卡氏肺孢子虫肺炎 (PCP)模型的差异。 方法 选用SD大鼠和Wistar大鼠 ,随机分为实验组和对照组 ,免疫抑制诱导建立动物模型 ;收集肺组织和支气管肺泡灌洗液 (BALF) ,分别制成肺印片和BALF涂片 ,作Giemsa染色 ,镜检卡氏肺孢子虫滋养体和包囊。结果 共收集实验组SD大鼠和Wistar大鼠的肺组织及BALF标本各 2 8份 ,经Giemsa染色后 ,在肺印片中查见Pneumocystiscarinii(Pc)虫体的阳性率分别为 89.2 9%和10 0 % ,两者之间无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;BALF阳性率分别为 6 0 .71%和 78.5 7% ,两者之间亦无显著性差异 (P >0 .0 5 )。而同种大鼠的肺印片与BALF涂片 ,其阳性率之间有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,且肺印片的检出率均显著高于BALF涂片。同种大鼠不同肺叶的肺印片 ,其阳性率之间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。

PCR检测大鼠卡氏肺孢子虫的研究

目的探讨PCR技术检测大鼠卡氏肺孢子虫的应用价值。方法SD大鼠和Wistar大鼠均随机分成实验组和对照组,实验组每周两次皮下注射醋酸可的松,诱导产生卡氏肺孢子虫;8week后,收集肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF),用PCR技术检测卡氏肺孢子虫DNA,并与Giemsa染色法比较。结果实验组两种大鼠肺组织卡氏肺孢子虫DNA阳性率分别为9643%和100%,BALF阳性率亦分别为9643%和100%,它们之间均无显著性差异(P>005);BALF的PCR阳性检出率显著高于Giemsa病原染色法,肺组织的两种方法检出率无显著性差异。结论PCR是一种检出率较高的方法,可作为早期诊断PCP的常规方法,特别适用于BALF检测卡氏肺孢子虫DNA。

日本血吸虫成虫和虫卵可溶性抗原及其组分抗原的研究

目的:探讨日本血吸虫雄虫、雌虫、虫卵的可溶性抗原雄虫(AWA-m、雌虫AWA-f、虫卵SEA)及其组分抗原的特性。方法:用DE22纤维素层析柱对日本血吸虫AWA-m,AWA-f,SEA抗原进行纯化,得到相应组分抗原。分别以SDS-PAGE和W estern b lot对组分抗原进行全面分析,并与相应未经纯化的可溶性抗原作比较。结果:经DE22纤维素层析处理的AWA-m,AWA-f,SEA,均能获得含多种蛋白的组分抗原。SDS-PAGE结果表明,AWA-m见10条主带和9条次带,其中Mr37 000,28 000,25 000为特异性条带,出现8条免疫反应阳性带;而AWA-m组分抗原为9条蛋白带和6条免疫反应阳性带。AWA-f见15条蛋白带,其中Mr26 500为特异性条带,组分抗原为8条蛋白带。AWA-f粗抗原及其组分抗原均见9条反应带。SEA见8条主带和10条次带,13条为免疫反应阳性条带;SEA组分抗原见11条带,其中9条为免疫反应阳性带。结论:AWA-m,AWA-f,SEA经DE22纤维素层析纯化获得组分抗原,方法简单、可靠。该组分抗原含有粗抗原的主要免疫反应成分,去除了多种与日本血吸虫病免疫反应无关的蛋白。

PCR-ELISA检测大鼠卡氏肺孢子虫DNA的研究

目的 建立卡氏肺孢子虫 (P .c )DNA的聚合酶链反应 酶联免疫吸附测定 (PCR ELISA)方法 ,并探讨其应用价值。 方法 实验组患卡氏肺孢子虫肺炎的SD大鼠和Wistar大鼠各 2 8只 ,采用PCR法扩增大鼠肺组织DNA和支气管肺泡灌洗液 (BALF)DNA ,用PCR ELISA检测其扩增产物。 2 8只患病大鼠分别制作肺组织印片及BALF涂片 ,姬姆萨 (Giemsa)染色镜检 10 0个视野中有无P .c包囊 (或滋养体 ) ,与PCR ELISA检测扩增产物结果比较。 结果 两种方法检测大鼠肺组织DNA阳性率及BALFDNA阳性率 ,结果相同 ,均分别为 96 4% (2 7/2 8)和10 0 % (2 8/2 8)。Giemsa染色镜检P .c包囊 (或滋养体 ) ,结果为阳性的大鼠 ,PCR ELISA检测扩增产物结果也均为阳性。阴性对照组 ,两种大鼠的肺组织和BALF各 10份标本 ,均有 1只大鼠阳性。 结论 PCR ELISA检测大鼠卡氏肺孢子虫DNA ,敏感性较高 ,特异性较好 ,操作简便 ,具有实用价值。

SPA-ELISA 一步法检测囊虫病患者血清特异性抗体的研究

用ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ一步法检测了囊虫病患者血清特异性抗体，并与快速ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ进行对比。两法同时检测了５９例囊虫病患者，３６例非囊虫病病人和３０例正常人血清。结果表明：ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ一步法和快速ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ的阳性率分别为９４．９１％和９８．３１％，几何平均滴度（ＧＭＰ）分别为１∶４２５．８９和１∶５６５．７２，均无显著性差异。对１例肝吸虫病人和１例包虫病人血清均起交叉反应。说明ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ一步法具有与快速ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ相同敏感性和特异性，并且快速、方便、花费少。

几种猪囊尾蚴抗原用于斑点-ELISA法诊断囊尾蚴病的观察

本研究以囊液10000g上清、囊液100000g上清、全囊抗原、头节抗原和头节尿素溶解性抗原等5种囊尾蚴抗原，对124份各类血清进行斑点-ELISA试验，结果除2种囊液抗原外，都有很高的假阳性反应。2种囊液抗原中以100000g离心者为优，检测70例囊虫病患者，阳性率为82．8％；30例正常人，假阳性率为6．7％；5例血吸虫、5例华支睾吸虫及5例并殖吸虫患者血清，均未出现阳性反应；但9例包虫病患者血清均出现交叉反应。

日本血吸虫多次感染宿主对治疗的反应性研究

[目的]建立等量血吸虫尾蚴单次感染和多次感染的动物模型,在感染的急性期、慢性期和晚期用吡喹酮治疗,比较这两种感染方式对治疗的反应性。[方法]测量单个虫卵肉芽肿的体积;放免法检测血清中透明质酸(HA);RT-PCR-ELISA半定量测定肝组织中的TGF-β1mRNA,比较两种感染方式治疗组和非治疗组以及治疗组间的差异。[结果]单次感染在急性期经吡喹酮治疗,肉芽肿及纤维化程度显著降低;而多次感染组经吡喹酮治疗后,肉芽肿及纤维化程度无明显改善。[结论]等量的尾蚴,单次感染的治疗效果明显优于多次感染;急性期的治疗效果显著优于慢性期和晚期。

免疫诊断技术用于姜片虫病流行病学调查的研究 Ⅲ.间接血凝试验检测姜片虫感染的初步研究

本研究以姜片虫成虫纯化抗原（ＰＡＡ）（蛋白含量为１０μｇ／ｍｌ）致敏经醛化和鞣化的人“Ｏ”型血红细胞，采用间接血凝试验（ＩＨＡ）检测了６９份姜片虫感染者血清和６０份正常人血清，若以抗体滴度≥１：１０者为阳性，则两者的阳性率分别为８１．２％和６．７％（Ｐ＜０．００５）；此外，还检测了日本血吸虫、肺吸虫、华支睾吸虫和长膜壳综虫感染者血清，其交叉反应率分别为１０．０％（４／４０）、１２．５％（１／８）、０（０／８）和０（０／４）。结果表明，该法具有较好的敏感性和特异性。

日本血吸虫6种粗抗原和组分抗原的比较

目的比较日本血吸虫6种抗原(粗抗原及其组分抗原各3种)的敏感性和特异性。方法①用阳性钉螺逸出的尾蚴感染新西兰家兔,制作日本血吸虫病动物模型。②于感染后42天分别收集雌、雄成虫和虫卵,制作粗抗原及其组分抗原。③采用ELISA法检测抗原的敏感性和特异性,并以X2检验作统计学处理和分析。结果除雌虫组分抗原的敏感性(51%)较差外,都显示出日本血吸虫成虫及其虫卵组分抗原的较好敏感性和特异性。结论日本血吸虫组分抗原用于免疫诊断,具有较好的敏感性和特异性,但抗原分离、纯化方法有待进一步探讨。

日本血吸虫不同感染方式对肝脏病理损害程度的影响

目的 :研究血吸虫单次感染和多次感染两种方式对宿主肝纤维化的影响。方法 :分别应用单次感染 (一次性感染尾蚴 30 0条 )和多次感染 (每次感染尾蚴 10 0条 ,共感染 3次 )两种方式 ,建立血吸虫病动物模型 ;分别于急性期、慢性期和晚期取部分家兔的肝脏组织作连续病理切片 ,测定单个虫卵肉芽肿的平均大小 ,同时检测相应时期血清中的透明质酸 (HA)和层粘连蛋白 (LN)的水平。结果 :在急性期 ,两种感染方式所形成的虫卵肉芽肿大选及血清中透明质酸和层粘连蛋白水平没有差异 (P >0 0 5 ) ;而在慢性期和晚期 ,单次感染和等量多次感染所形成的虫卵肉芽肿大小及血清中透明质酸水平有显著性差异 (P <0 0 1) ,层粘连蛋白的含量在感染的晚期有差异 (P <0 0 5 )。结论 :在感染尾蚴总量相同的情况下 ,多次感染对肝脏的损害明显比单次感染严重 ,而且更容易诱发肝纤维化。

镇江市新生儿弓形虫感染的初步调查

镇江市新生儿弓形虫感染的初步调查寄生虫学教研室陈盛霞，曹建平，陈家旭，傅行礼，帅连云，仇锦波镇江市第一人民医院曹巧云刚地弓形虫是一种人畜共患寄生原虫，广泛寄生于人及动物的有核细胞内，引起人畜的弓形虫病。孕妇获得急性弓形虫感染时约４５％可以传给胎儿［１...

二种快速ELISA用于检测囊虫病患者血清特异性抗体的实验观察

用快速ＩｇＧ－ＥＬＩＳＡ和快速ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ检测囊虫病人血清抗体，其阳性率分别为９０．００％和９４．２９％，两虫之间无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。两法假阴性率分别为１．４３％和２．８６％，对包虫病人血清出现较强交叉反应，对肝吸虫、肺吸虫病人血清出现一定程度的交叉反应，而对血吸虫病人、绦虫病人血清未出现交叉反应。若两种方法同时使用可提高敏感性。两种方法均较简便，在包虫病非流行区可作为较好的流行病学调查筛检方法。

血吸虫感染不同阶段吡喹酮治疗对宿主肝纤维化的影响

目的探讨日本血吸虫感染宿主不同阶段吡喹酮治疗对肝纤维化影响,为临床选择适宜的治疗时机提供依据。方法建立日本血吸虫感染家兔模型,在感染的急性期、慢性期和晚期用吡喹酮治疗,采用ELISA法检测针对可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)产生的IgG抗体;放免法检测血清中透明质酸(Hyaluronic acid,HA)含量;ELISA法检测血清TGF-β1水平;RT-PCR检测肝组织中的TGF-β1mRNA水平;制作肝组织病理切片,观察肝脏的病理改变。结果与慢性期和晚期比较,在感染急性期经吡喹酮治疗后,宿主血清抗SEA IgG、HA、TGF-β1水平以及肝组织TGF-β1mRNA表达水平显著降低,肝脏纤维化程度降低及肝组织结构明显改善。结论吡喹酮在血吸虫感染急性期的疗效优于慢性期和晚期,且有预防肝纤维化形成的作用。

日本血吸虫可溶性虫卵抗原诱导小鼠巨噬细胞增殖及TNF-α、TGF-β1的表达

目的探讨日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)对小鼠巨噬细胞株RAW264.7增殖及TNF-α、TGF-β1表达的影响。方法实验分三组:RAW264.7对照组、SEA组和细菌脂多糖(LPS)对照组。培养巨噬细胞株RAW264.7,用20μg/ml SEA分别作用巨噬细胞3、6、9、12和15 h后,荧光定量PCR检测炎症因子TNF-αmRNA和TGF-β1 mRNA的表达;倒置显微镜观察SEA作用12 h后巨噬细胞的形态;Western blot检测炎症相关蛋白TNF-α和TGF-β1的表达;MTT比色法检测SEA对细胞增殖的影响。结果 SEA作用RAW264.7细胞3 h起,TNF-αmR-NA和TGF-β1 mRNA的表达逐渐增高,在第12 h时,其相对表达倍数分别达23.07±3.172和9.83±1.45,与其他各时间点比较差异均有统计学意义(均P<0.05);SEA作用12 h巨噬细胞体积明显增大,细胞拉长且形态不规则;SEA作用巨噬细胞24、48、72 h时,A_(490)值分别与RAW264.7对照组相比,差异均有高度统计学意义(均P<0.01),而与LPS组的差异无统计学意义(P>0.05);在SEA作用RAW264.7细胞12 h时,TNF-α和TGF-β1蛋白表达均高于RAW264.7对照组(均P<0.05)。结论 SEA能促进巨噬细胞的增殖并诱导TNF-α和TGF-ββ1的表达。