茶树α-tubulin基因实时荧光定量RT-PCR方法的建立

目的：建立茶树仅-tubulin基因实时荧光定量RT-PCR方法。方法：根据GenBank中茶树d-tubulin基因保守区域设计-对特异性引物，将PCR扩增得到的a-tubulin基因克隆到pTGl9-T载体上，构建的重组质粒标准品经1／10梯度稀释后，用SYBRGreenI染料法绘制标准曲线，并进行融解曲线分析。结果：标准曲线Ct值检测范围为14．56-27．09，相关系数为0．991，溶解曲线分析显示产物为特异的单峰，其Tm值为81±0．3C。结论：建立了茶树d-tu．bulin基因实时荧光定量RT-PCR法，为以oL-tubulin作为茶树内参基因进行功能基因表达差异研究奠定了基础。

桑氧化固醇结合相关蛋白的基因克隆及序列与表达分析

氧化固醇结合蛋白家族是一类存在于真核生物中的能结合氧化固醇的保守蛋白,主要作用是参与细胞中的脂类代谢、囊泡运输及信号转导等方面。试验利用RT-PCR和RACE技术从桑树(Morus L.)鲁桑系品种育71-1(M.multicaulis Perr.cv.Yu 71-1)中克隆出一个氧化固醇结合蛋白相关蛋白基因,该c DNA全长1 974 bp,含有一个完整的全长1 371 bp的读码框(ORF),内有220 bp的5’非翻译区(5’UTR)和383 bp的3’非翻译区(3’UTR),3’端以Poly(A)15结束。其开放读码框共编码456个氨基酸,分子量为51.97 k D,等电点为5.143。利用Pfam和PROSITE在线分别进行了蛋白质的结构及功能位点和motif预测,结果显示,该蛋白为氧化固醇结合蛋白相关蛋白家族的成员,具有氧化固醇结合蛋白相关结构域,且含有该家族蛋白特有的极其保守的指纹基序"EQVSHHPP"。多重序列比对结果表明,该蛋白高度保守,在系统进化树中桑树与野草莓(Fragaria vesca subsp.vesca L.)、碧桃(Prunus persica Batsch.var.duplex Rehd.)等的亲缘关系较近。Real-time PCR分析表明,该基因在花、幼果、成熟果的表达量比根、茎和芽中的表达量要高。在高盐胁迫下,桑树Ma-acyin-ORP基因的表达量先升高、后下降,初步推断该基因可能参与某种压力胁迫的生理反应。

春伐对鄂桑1号光合生理参数的影响

在自然条件下,测定了鄂桑1号(Morus alba L.cv.E-sang No.1)和湖桑32号[M.alba L.var.multicaulis(Perrott.)Loud.cv.Husang No.32]桑树品种春伐后,植株叶片的各项光合生理参数及变化规律,并对其进行了比较分析。结果表明,2个桑树品种的叶片净光合速率(Pn)日变化曲线均呈双峰型,有明显的"光合午休"现象,其气孔限制为光合能力下降的主要原因;表观光能利用效率(LUE)为鄂桑1号<湖桑32号,瞬时水分利用效率(WUEi)为鄂桑1号>湖桑32号,潜在水分利用效率(WUEp)为湖桑32号>鄂桑1号;光饱和点(LSP)为湖桑32号[1 412.46μmol/(m2·s)]>鄂桑1号[1 201.63μmol/(m2·s)],光补偿点(LCP)为湖桑32号[26.99μmol/(m2·s)]<鄂桑1号[31.02μmol/(m2·s)],表观量子效率(AQY)、羧化效率(CE)、光合能力(Pm)、1,5-二磷酸核酮糖(Ru BP)最大再生速率(Ru BPmax)均为湖桑32号>鄂桑1号,且Pm、Ru BPmax的差异达显著性水平(P<0.05);桑树叶片Pn季节变化在5月11日和5月16日,湖桑32号的Pn值显著大于鄂桑1号(P<0.05),而7月30日和8月30日,鄂桑1号的Pn值显著大于湖桑32号(P<0.05)。光合有效辐射(PAR)是影响桑树Pn最重要的生态因子,而空气相对湿度(RH)对气孔导度(Gs)和蒸腾速率(Tr)有较明显的影响。