藏药波棱瓜子总木脂素对ANIT诱导的小鼠肝损伤的保护作用及机制研究

目的 探讨波棱瓜子总木脂素(TLHPS)对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导的小鼠肝内胆汁淤积(intrahepatic cholestasis,IC)型肝损伤的保护作用及其作用机制。方法 将70只小鼠随机分为正常组、模型组、联苯双酯组、TLHPS各剂量组,各组连续给药7 d,在第5天给药2 h后,除正常组灌胃橄榄油溶液外,其余各组小鼠给予ANIT溶液造模。之后按照原剂量继续给药,造模48 h后,对各组小鼠进行摘眼球采血,并摘取肝脏。检测各组小鼠血清中肝功能指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、直接胆红素(DBIL)、总胆红素(TBIL)、总胆汁酸(TBA);炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)及肝脏抗氧化应激因子谷胱甘肽(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT);采用HE染色检测肝脏病理变化;Western Blot法检测小鼠肝组织中NLRP3、TLR-2、TLR-4、NF-κB、JNK、p38、MyD88、IL-1β蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组肝脏受损情况严重,ALT、AST、ALP酶活力明显升高(P<0.01),DBIL、TBIL、TBA、MDA、TNF-α、MCP-1含量明显升高(P<0.01),CAT、GSH-PX、SOD酶活性明显降低(P<0.01),NLRP3、TLR-2、TLR-4、NF-κB、JNK、p38、MyD88、IL-1β蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与模型组比较,联苯双酯组及TLHPS各给药组ALT、AST、ALP酶活力明显降低(P<0.01),DBIL、TBIL、TBA、MDA、TNF-α、MCP-1含量明显降低(P<0.01),CAT、GSH-PX、SOD酶活性明显升高(P<0.05,P<0.01),NLRP3、TLR-2、TLR-4、NF-κB、JNK、p38、MyD88、IL-1β蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。与联苯双酯组比较,TLHPS(0.4 g·kg^(-1))组ALT、AST、ALP、TBA、TBIL、DBIL含量明显升高(P<0.05,P<0.01),TLHPS各给药组SOD含量明显降低(P<0.01),TLHPS(0.05 g·kg^(-1))给药组JNK、p38、IL-1β蛋白表达水平明显上调(P<0.05,P<0.01),TLHPS(0.4、0.2、0.1 g·kg^(-1))给药组NF-κB蛋白表达明显上调(P<0.05,P<0.01),其余各组差异均无统计学意义。病理切片显示TLHPS能改善肝脏受损情况。结论 TLHPS对IC型肝损伤存在保护作用,其作用机制可能通过调控TLR4/MyD88/NF-κB、NLRP3及JNK/p38MAPK通路,从而抑制炎症反应及改善小鼠肝脏氧化应激损伤有关。

UPLC-MS/MS法同时测定经典方剂槐花散中7个成分含量

目的:建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法同时测定经典名方槐花散中芦丁、胡薄荷酮、川陈皮素、柚皮苷、槲皮苷、新橙皮苷、槲皮素7个有效成分的含量。方法:采用ACQUITY UPLC HSS T3C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水(A)-甲醇(B)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.4 mL·min^(-1),柱温为35℃。质谱采用电喷雾离子化(ESI)源,正负离子模式,雾化气流速为3 L·min^(-1),加热气流速为10 L·min^(-1),滞留时间为45 ms,离子源温度为300℃,加热块温度为400℃,脱溶剂管温度为250℃,干燥气流速为10 L·min^(-1);多反应监测模式(MRM)进行定量分析,其中芦丁、胡薄荷酮、川陈皮素采用正离子模式,监测离子对为m/z 611.15/303.00、153.15/81.10、403.15/373.10;柚皮苷、槲皮苷、新橙皮苷和槲皮素采用负离子模式,监测离子对为m/z 579.15/271.15、447.10/300.15、609.15/301.15、301.05/151.05。结果:槐花散中芦丁、胡薄荷酮、川陈皮素、柚皮苷、槲皮苷、新橙皮苷、槲皮素7个有效成分在各自线性范围内线性关系良好,相关系数均>0.9995;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均<5.0%;平均回收率分别为97.7%、103.3%、92.3%、100.7%、101.5%、101.0%、100.2%,RSD均<5.0%。6批槐花散中上述7个成分的含量范围分别为44.30~47.00、2.01~2.10、0.31~0.33、18.53~19.80、0.79~0.85、17.64~18.57、1.29~1.35 mg·g^(-1)。结论:该方法快速、灵敏,专属性高,可为槐花散的质量控制提供方法,并为该方的药效学及药代动力学研究提供参考。