新医科视角下重塑药理学与思政融合的探讨

新医科背景下,为适应高层次医学创新人才的培养,教师需要重塑药理学,加强基础与临床、医学与人文的结合。文章以β2受体激动剂为例,介绍知识重构、整合与思政元素融合,及其在“一轴两线三维”多元立体化混合式教学中的实践,为基础医学教学提供新思路。

靛玉红衍生物PHⅡ-7对人乳腺癌细胞株MCF-7的杀伤效应及其机制

目的观察靛玉红衍生物PHⅡ-7对人乳腺癌癌细胞株MCF-7的杀伤作用并探讨其初步机制。方法四唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖活性;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;PI染色结合流式细胞术检测细胞周期分布;DCFH-DA染色检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成变化;RT-PCR法、Western blot法检测原癌基因c-fos基因及蛋白表达水平。结果不同浓度的PHⅡ-7对MCF-7细胞的增殖抑制率为43.13%～90.90%,抑制效应随着浓度增加而增强(P<0.05);各实验浓度的PHⅡ-7均能诱导细胞凋亡,1.25、2.5、5.0μmol/L PHⅡ-7作用24h后,MCF-7细胞的早期凋亡率分别为(1.43±0.02)%,(9.14±0.36)%,(45.79±8.46)%,具有浓度依赖性;PHⅡ-7处理MCF-7后致其G0/G1期和S期细胞比例下降,G2/M期细胞比例明显上升;PHⅡ-7作用于MCF-7细胞2h后,细胞内ROS水平显著增高;PHⅡ-7处理MCF-7后,原癌基因c-fos mRNA和蛋白表达呈浓度依赖性下调。结论 PHⅡ-7对MCF-7具有明显的体外杀伤作用,其作用机制可能与细胞周期阻滞、改变细胞氧化还原平衡状态及下调原癌基因表达有关。

靶向CK18的shRNA表达载体的构建及其对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

目的:构建靶向人角蛋白18(cytokeratin 18,CK18)基因的shRNA真核表达载体,稳定转染人乳腺癌MCF-7细胞株,观察其对MCF-7细胞增殖的影响。方法:设计两条靶向CK18基因的RNA干扰序列,命名为CK18-shRNA1、CK18-shRNA2,同时设计阴性对照,将合成的寡核苷酸链与Psilencer3.1-H1/Hygro质粒连接形成重组质粒,并经脂质体介导稳定转染MCF-7细胞,G418筛选后扩增获得稳定转染细胞株,分别采用RT-PCR和Western blotting法检测细胞株中CK18mRNA和蛋白的表达,并进一步通过MTT法检测重组表达载体稳定转染对细胞增殖的影响。结果:重组表达载体(Psilenc-er3.1-CK18-shRNA1、Psilencer3.1-CK18-shRNA2和Psilencer3.1-NC-shRNA)经PCR及DNA测序分析证明序列插入正确,经500μg/ml G418筛选出稳定转染Psilencer3.1-CK18-shRNA的MCF-7细胞,Psilencer3.1-CK18-shRNA2转染可有效抑制MCF-7细胞中CK18 mRNA和蛋白的表达,而Psilencer3.1-CK18-shRNA1转染不影响MCF-7细胞中CK18 mRNA和蛋白的表达水平。与阴性对照Psilencer3.1-NC-shRNA组相比,Psilencer3.1-CK18-shRNA2转染可有效抑制MCF-7细胞的增殖[(0.40±0.01)vs(0.55±0.06),P<0.05]。结论:靶向CK18的shRNA表达载体稳定转染细胞后可抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖。

PHⅡ-7对人乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR体外杀伤活性和逆转耐药作用

背景与目的:多药耐药(multidrug resistance,MDR)是恶性乳腺癌化疗失败的主要原因,而ABC转运蛋白家族的P-glycoprotein(P-gp)高表达是MDR的主要机制之一。因此研制能抑制P-gp表达及其功能的新型抗癌药是目前研究的热点。本研究旨在研究PHⅡ-7对人乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR体外抗瘤活性及逆转耐药的作用。方法:采用MTT法检测PHⅡ-7、多柔比星(adriamycin,ADR)及二者联合应用对人乳腺癌细胞MCF-7和耐药细胞株MCF-7/ADR的IC50值;采用流式细胞仪测定PHⅡ-7对MCF-7及MCF-7/ADR细胞凋亡的诱导作用;采用逆转录PCR和实时荧光定量PCR方法检测PHⅡ-7对多药耐药基因1(multidrug resistance gene1,mdr1)表达水平的影响;通过流式细胞仪观察PHⅡ-7处理前后,MCF-7/ADR细胞内Rhodamine123浓度的改变,分析PHⅡ-7对P-gp外排功能的影响。结果:PHⅡ-7对MCF-7和MCF-7/ADR细胞均有生长抑制作用,IC50值分别为(6.07±0.85)和(5.51±1.22)μmol/L;低浓度PHⅡ-7与ADR联合应用能增强其细胞毒作用,二者具有协同作用。PHⅡ-7可诱导MCF-7和MCF-7/ADR细胞凋亡;在诱导凋亡过程中,PHⅡ-7可降低MCF-7/ADR细胞内mdr1基因的表达,抑制P-gp外排功能。结论:PHⅡ-7可诱导MCF-7/ADR凋亡,并具有对MCF-7相同的体外杀伤活性。PHⅡ-7可通过抑制P-gp的表达和功能逆转MCF-7/ADR耐药性。

DMA对正常大鼠离体心脏和乳头肌的正性变力作用及其机制

目的研究二甲基氨氯吡咪（dimethylamiloride,DMA）对正常大鼠离体心脏和乳头肌的正性变力作用,并探讨其机制。方法采用Langendorff心脏灌流和离体乳头肌灌流方法观察DMA的变力性作用,并应用L-型钙通道阻滞药和Na^＋/Ca^2＋交换体（sodium calcium exchanger,NCX）抑制剂探讨其作用机制。结果①1-20μmol·L^-1DMA对正常大鼠离体心脏产生正性变力作用,即增强左室主动收缩压（LVSP-LVDP）、左室压最大上升速率（＋dp/dtmax）、左室压最大下降速率（-dp/dtmax）;增强乳头肌收缩功能,即升高发展张力（TC）,缩短收缩至最大速率的时间（T-dp/dtmax）。与用药前相比,差异有显著性（P〈0.05或P〈0.01）。②DMA的正性变力作用不能被L-型钙通道阻滞药尼卡地平（nicardipine）阻断。③NCX抑制剂氯化镍（NiCl2）可阻断DMA的正性变力作用。结论①（1-20）μmol·L^-1 DMA对正常大鼠离体心脏和乳头肌产生正性变力作用。②DMA正性变力作用与L-型钙通道无关。③DMA通过激动NCX产生正性变力作用。

原癌基因c-fos在人乳腺癌耐药株MCF-7/ADR中的表达及意义

目的探讨原癌基因c-fos在人乳腺癌细胞MCF-7/ADR多药耐药形成中的作用。方法采用MTT法测定化疗药物阿霉素(adriamycin,ADR)、紫杉醇、依托泊甙对人乳腺癌敏感株MCF-7和耐药株MCF-7/ADR的IC_(50);用real time PCR法检测MCF-7/ADR和MCF-7的c-fos mRNA表达差异;用逆转录PCR(RT-PCR)和Western blot法检测ADR对MCF-7中c-fos mRNA和蛋白表达的诱导作用。结果相对于MCF,MCF-7/ADR对ADR、紫杉醇、依托泊甙的耐药倍数分别为39.94,102.34和12.16;MCF-7/ADR中c-fos mRNA表达明显高于MCF-7;ADR可诱导MCF-7中c-fos mRNA和蛋白呈时间依赖性表达。结论 c-fos在MCF-7/ADR多药耐药中起重要作用,有可能成为耐药肿瘤诊断和治疗的新分子靶点。

二甲基氨氯吡咪及氨氯吡咪对心肌肥厚大鼠离体乳头肌力学特性的影响

目的观察并比较二甲基氨氯吡咪（DMA）和氨氯吡咪（AM）对心肌肥厚大鼠离体乳头肌的变力性作用,并探讨其机制。方法采用离体乳头肌灌流方法观察DMA和AM对心肌肥厚大鼠离体乳头肌的变力性作用,并利用L-型钙通道阻滞药和Na^＋-Ca^2＋交换体（NCX）阻断剂探讨其可能机制。结果（1~20）μmol/LDMA对心肌肥厚大鼠离体乳头肌产生剂量依赖性的正性变力作用,升高发展张力（TC）,缩短收缩至最大速率的时间（T-dp/dtmax）和75%舒张时间（T75%）,与用药前相比,差异有统计学（P〈0.05或P〈0.01）。（0.05~1.00）mmol/LAM对心肌肥厚大鼠离体乳头肌产生剂量依赖性的负性变力作用,降低TC,延长T-dp/dtmax和T75%。与用药前相比,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。DMA对心肌肥厚大鼠离体乳头肌的正性变力作用不能被L-型钙通道阻滞药尼卡地平阻断。DMA对心肌肥厚大鼠离体乳头肌的正性变力作用能被Na^＋-Ca^2＋交换体（NCX）阻断剂氯化镍（NiCl2）阻断。结论DMA（1~20）μmol/L对正常大鼠离体心脏产生剂量依赖性的正性变力作用。（0.05~1.00）mmol/LAM对心肌肥厚大鼠离体乳头肌产生剂量依赖性的负性变力作用。与AM抑制NCX不同,DMA通过激动NCX对心肌肥厚大鼠离体乳头肌产生正性变力作用。

离体乳头肌灌流方法对药物影响心脏收缩功能的评价

目的 研究离体乳头肌灌流方法评价药物影响心脏收缩功能的可靠性和准确性。方法 利用离体乳头肌灌流和Lan gendorff灌流法检测异丙肾上腺素 (isoprenaline,Iso)对心脏收缩功能的影响 ,并评价两种实验方法对药物反应的相关性。 结果与结论 乳头肌收缩功能与心脏收缩功能具有明显的相关关系 ,乳头肌灌流实验方法能够反映药物对心脏收缩功能的影响。

二甲基氨氯吡咪对正常大鼠离体心功能的影响

目的研究二甲基氨氯吡咪（dimethylamiloride，DMA）对正常大鼠离体心功能的影响及特点。方法采用Langendorff心脏灌流方法观察DMA对正常大鼠离体心脏功能的影响。结果①在Langendorff灌流的大鼠心脏，DMA（2．5～20μmol／L）能增强正常大鼠离体心脏功能。2．5μmol／L DMA对心功能各项指标左室收缩压（LVSP）-左室舒张压（LVDP）、左室压最大上升速率（＋dp／dtmax）、左室压最大下降速度（-dp／dtmax）的增强幅度分别为8．17％、5．22％、10．15％；5μmol／L DMA的增强幅度分别为7．59％、8．84％、10．93％；10μmol／L DMA的增强幅度分别为9．27％、10．53％、11．48％；20μmol／L DMA的增强幅度分别为8．37％、11．19％、13．31％。②在离体心脏。DMA在用药2min后明显起效，6min时作用达高峰，之后作用逐渐减弱，10min作用消失。结论DMA（2．5～20／mad／L）能增强正常大鼠离体心功能，产生正性肌力作用。

药理学课程思政特色教学设计与实践

基于药理学以人为本、精准施药、传承发展的课程特色思政理念,教学团队进行系统课程思政教学设计,以思政为载体,拓展教学内容,建设药理学课程思政视频案例库;进一步通过课前多资源高效化导学,课中多角度动态化教学,课后多模块立体化研学,全过程多途径温度化教学,思政育人助力教学全过程,为基础医学课程思政提供新思路。

乳腺癌耐药细胞中c-fos抗凋亡作用的研究

背景与目的:乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,且患者死亡率居高不下,其中乳腺癌耐药是导致临床化疗失败的主要原因。该课题组采用已建立的乳腺癌耐药细胞模型MCF-7/ADR及其敏感株MCF-7,旨在探讨c-fos在乳腺癌耐药细胞中的详细作用机制。方法:MTT检测上述细胞对多柔比星的敏感性,并通过实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)检测上述细胞中mdr-1及c-fos的mRNA表达情况;3μmol多柔比星分别处理MCF-7细胞12、24、36 h后采用RT-PCR检测细胞中c-fos mRNA的表达,以监测化疗药物处理过程中乳腺癌细胞c-fos的表达变化过程;构建相应载体得到了c-fos稳定干扰细胞株及其对照细胞株:MCF-7/ADR/si-fos-8B、MCF-7/ADR/si-fos-3D和MCF-7/ADR/siNC,采用MTT检测干扰c-fos后对5-FU及顺铂的敏感性变化;流式细胞术检测上述药物及γ射线照射处理后细胞凋亡的情况;罗丹明123检测乳腺癌耐药细胞的外排能力;RT-PCR及蛋白质印迹法(Western blot)分别检测c-fos干扰后,凋亡相关基因bax、bcl-2、puma、p53及mdr-1等的表达。结果:与敏感细胞MCF-7相比,MCF-7/ADR细胞中c-fos及mdr-1的表达显著升高,且对多柔比星的耐药倍数为敏感株的近40倍;在3μmol多柔比星处理MCF-7之后c-fos的表达逐渐升高,结果显示,c-fos在乳腺癌的耐药表型形成早期即开始发挥作用;干扰c-fos后,细胞对药物(5-FU、顺铂)的敏感性增高,且经药物处理及γ射线照射后稳定干扰细胞株的凋亡率显著升高,说明干扰c-fos后乳腺癌耐药细胞在受到外界刺激后,更易于发生凋亡;RT-PCR及Western blot检测结果显示,干扰c-fos后,bax、puma、p53的表达明显升高,而bcl-2及mdr-1的表达显著降低。结论:在乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR中发现,c-fos呈异常高表达,其可能通过调节乳腺癌细胞凋亡信号通路蛋白的变化抑制乳腺癌细胞的凋亡,促进了乳腺癌耐药表型的形成。由此,c-fos可作为克服乳腺癌耐药治疗的一个潜在靶点用于今后的药物开发。

抗CD3/抗CD19微型双功能抗体的构建、表达及活性测定

背景与目的:微型双功能抗体是基因工程抗体的一种形式,它具有两个抗原结合位点,可选择性募集效应细胞到靶细胞周围,介导特异性杀伤作用。本实验构建抗CD3/抗CD19微型双功能抗体(diabody)载体,表达纯化后测定其生物学活性。方法:用重叠PCR(overlap PCR)和PCR方法,构建抗CD3/抗CD19 diabody载体,转化感受态大肠埃希菌进行原核表达。表达产物经抗His-tag亲和层析柱分离纯化,12% SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定。应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术(FACS)检测生物学活性。结果:基因重组质粒经测序证实序列正确。抗CD3/抗CD19 diabody能够在原核表达系统中进行可溶性表达。12% SDS-PAGE显示28×103和26×103各有一条带,Western blot在28×103显示有条带,与预期相符。表达产物经纯化定量可达5mg/L。FACS检测抗CD3/抗CD19 diabody可与CD19+ Raji细胞和CD3+ Jurkat细胞特异结合,并能竞争性抑制HIT3a和HIT19a与上述细胞的结合活性。结论:本实验成功构建了抗CD3/抗CD19 diabody,并且能够进行可溶性表达,可与CD19+ Raji细胞和CD3+ Jurkat细胞特异结合,为以后的抗体功能实验奠定了基础。

过表达的细胞膜表面角蛋白8——乳腺癌多药耐药的一种新靶点

目的研究细胞膜角蛋白8(CK8)过表达与乳腺癌多药耐药的相关性及其作为逆转乳腺癌耐药靶点的可行性。方法转染特异的CK8-siRNAs至人乳腺癌耐药细胞MCF-7/MX,用Western blot方法检测siRNAs对CK8蛋白表达的抑制,荧光染色用激光共聚焦显微镜观察细胞膜表面CK8表达量的改变,并用Sulforhodamine B的方法检测转染前后细胞对多种化疗药敏感性的变化。结果MCF-7/MX细胞导入CK8-siRNAs后,细胞膜CK8的表达水平明显抑制,同时对米托蒽醌等化疗药的敏感性明显提高,耐药表型明显逆转。结论CK8细胞内定位及表达水平的改变,在乳腺癌多药耐药表型的形成中起重要作用。作为一种新的耐药相关膜表面标志,细胞膜CK8有望成为逆转乳腺癌多药耐药诊断和治疗的新靶点。

阿尔茨海默病相关的神经丝蛋白的早期诊断价值

目的探讨一种简便、可靠、无损伤、特异性较强的早期诊断阿尔茨海默病(alzheimer disease,AD)的方法。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定尿液中神经丝蛋白(alzheimer associated neuronal thread protein,AD7c-NTP)的含量,并比较38例AD患者与35例年龄相匹配的健康对照组尿中的AD7c-NTP的含量;同时分析尿中AD7c-NTP含量与智能精神状态检查量表(MMSE)、临床痴呆评定量表(CDR)和日常生活能力量表(ADL)评分的相关性。结果 AD组与对照组尿液中AD7c-NTP含量分别为(90.78±16.54)ng/ml(、70.63±12.56)ng/ml,AD组明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);AD组尿液AD7c-NTP含量与MMSE、CDR、ADL分数变化有一定相关性,相关系数分别为0.756、-0.658、-0.760。结论测定尿液中AD7c-NTP含量在AD早期诊断和病情评估中有重要的临床参考价值。

高果糖诱导大鼠胰岛素敏感性及血压改变

目的评估高果糖饲料对机体胰岛素敏感性及血压的影响。方法雄性SD大鼠24只,随机分为对照组和高果糖组升高。对照组大鼠普通饲料喂养;模型组大鼠以高果糖饲料喂养4周。测定对照组和高果糖组大鼠空腹血糖(FBG)、空腹血胰岛素(FSI)计算胰岛素敏感性指数,尾套法测定收缩期血压(SBP),生化酶法测定甘油三酯(TG)。结果高果糖组大鼠2周后血压升高,4周后,除血压升高外血胰岛素、甘油三酯较对照组明显升高,胰岛素敏感指数降低,而体重、每天平均饲料摄入量两组间无显著差异。结论高果糖饲料喂养的SD大鼠,具有典型的胰岛素抵抗伴高血压的特点,是研究胰岛素抵抗和高血压理想的动物模型。

橙皮素对异丙基肾上腺素诱导大鼠心衰的保护作用

目的观察橙皮素对大剂量异丙基肾上腺素(ISO)诱导大鼠心衰的保护作用,并探讨其机制。方法将SD大鼠随机分为正常(C)组、橙皮素对照(H)组、异丙基肾上腺素(I)组和橙皮素治疗+I(T)组,I组和T组接受皮下注射大剂量ISO(150 mg/kg),2周后行超声心动图检测。确定造模成功后,H组及T组给予橙皮素(100mg/kg)灌胃,I组给予等量的溶剂乙醇,连续给药10d后测定各组大鼠心脏功能包括左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室射血分数(EF)、左室缩短分数(FS)变化及血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(TAOC)的变化,观察各组大鼠心肌的病理变化。结果与C组比较,I组LVEDD变化不大,LVESD值增大、EF、FS降低,氧化应激指标中MDA值升高,SOD、TAOC降低,各指标差异有统计学意义(P<0.05);与I组比较,T组大鼠LVEDD无明显变化,LVESD降低,EF、FS升高,血清MDA值降低,SOD、TAOC升高,各指标差异有统计学意义(P<0.05)。H组各指标较C组无明显变化。结论橙皮素可能通过减轻氧化应激,降低MDA,升高SOD、TAOC,从而改善心衰大鼠的心脏功能。

钙调素拮抗剂O-(4-乙氧基)-丁基-小檗胺增强阿霉素杀伤MCF-7/ADR细胞的机制研究

目的研究钙调素拮抗剂0-4-乙氧基-丁基-小檗胺(EBB)增强阿霉素诱导乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/ADR细胞的杀伤作用及其相关机制。方法用MTT法测定阿霉素、EBB单独及联合用药对阿霉素杀伤乳腺癌多药耐药细胞系(MCF-7/ADR)及其亲代细胞系(MCF-7)的作用的IC50值,用不同浓度EBB处理MCF-7/ADR细胞后用FACS法分析EBB对阿霉素诱导细胞凋亡及对mdr1mRNA和P-gp蛋白水平表达的影响,通过激光共聚焦显微镜观察EBB处理前后及用EBB预处理24和48h后MCF-7/ADR和MCF-7细胞内阿霉素浓度的改变。结果MTT结果显示EBB对MCF-7和MCF-7/ADR都具有抗肿瘤活性;EBB还能协同提高阿霉素的细胞毒作用,MCF-7组两药相互作用指数(CDI)值为0.73,MCF-7/ADR组CDI值为0.49,其对耐药细胞的协同作用更为明显。随EBB剂量增加,低剂量阿霉素诱导MCF-7/ADR细胞凋亡增加而且P-gp蛋白表达水平逐渐下降,细胞内阿霉素浓度逐渐提高,而且用EBB预处理MCF-7/ADR细胞24和48h后细胞内阿霉素和罗丹明浓度也逐渐提高。结论EBB是有效的肿瘤细胞化疗药物,它不但能直接抑制P-gp功能还具有下调P-gp蛋白表达的作用,从而有效逆转MCF-7/ADR细胞的耐药现象,协同增强化疗药物对耐药细胞的杀伤作用。

缺氧肺动脉平滑肌细胞中PKCα/c-fos、Bax/Bcl-2表达变化及其对增殖和凋亡的影响

目的:研究缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)PKCα/c-fos、Bax/Bcl-2表达的变化及对其增殖和凋亡的影响。方法:将原代培养的大鼠PASMCs分为常氧组(5%CO_2、21%O_2、74%N_2)和低氧组(5%CO_2,2%O_2,93%N2)24 h,48 h。通过氮蓝四唑盐(MTT)比色法测定PASMCs的增殖水平,以流式细胞仪Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡率,并通过用RT-PCR和Western blot法检测PKCα/c-fos、Bax/Bcl-2基因和蛋白表达的变化。实验至少重复3次,每组设置至少3个复孔。结果:低氧24 h和48 h组PASMCs增殖明显,与常氧组相比差异具有统计学意义(P<0.01),而细胞凋亡率无显著变化。相对于常氧组,低氧24 h和48 h组PASMCs PKCα、c-fos表达增强,Bax表达变化不明显,而Bcl-2表达增加。结论:低氧培养的PASMCs增殖明显,凋亡无明显变化。同时PKCα、cfos表达增强,而抗凋亡基因Bcl-2表达增加。

提问式教学法在药理学教学中的实践

药理学是基础医学和临床医学间的纽带。但大部分学生认为药理学知识点太多,内容抽象,缺乏趣味性。山西医科大学在药理学本科教学中采用提问式教学法,只要授课教师备课时设计好问题就可以在授课中应用,对活跃课堂气氛、提高授课效率立竿见影。

基于混合式教(导)+学模式重构心血管系统整合课程

以岗位胜任力为出发点,以学生为中心,基于混合式教(导)+学模式,运用多种教学法,重构心血管系统整合课程。文章主要从团队组建、课程整合思路、整合流程、实施计划、课程评价等几个方面介绍教学改革设计,以提高教学效果。