皮肤微生物菌群与特应性皮炎相关性研究进展

特应性皮炎(AD)是最常见的慢性炎症性皮肤病之一,与遗传、皮肤屏障缺陷、宿主免疫反应、变应原敏感性、环境影响和感染等多种因素有关。AD的特点是表皮屏障功能紊乱和过度活跃的免疫反应。目前认为,皮肤微生物组紊乱与AD病程之间存在联系。通常,细菌和病毒感染存在于AD患者的湿疹样病变中,并明显加重症状。皮肤微生物菌群和细菌生物膜会对皮肤屏障功能产生负面影响,导致AD的发作和恶化。以皮肤屏障为目标的局部治疗有助于更深入地开发新微生物组。

胀果甘草多糖对RAW264.7巨噬细胞免疫功能的影响

目的：研究胀果甘草多糖GiP-B1对RAW 264.7巨噬细胞免疫功能的影响。方法：用浓度为25-400μg·mkg^-1的GiP-B1与RAW 264.7巨噬细胞共同培养,MTT法检测其细胞增殖率,中性红试验检测其吞噬功能,ELISA法检测其分泌TNF-α、IL-1β的功能,Griess法检测其释放NO和iNOS的能力,RT-q PCR法检测其iNOS、TNF-α、IL-1β的mRNA表达。结果：给药24 h后,与空白对照组相比,200-400μg·mkg^-1组的GiPB1可促进RAW264.7巨噬细胞的增殖,差异极显著（P〈0.01）;50-100μg·mkg^-1组的GiP-B1可显著促进RAW 264.7巨噬细胞的吞噬作用（P〈0.05）。作用RAW 264.7巨噬细胞48 h后,100μg·mkg^-1和400μg·mkg^-1组的GiP-B1可显著提高巨噬细胞的IL-1β分泌量（P〈0.05）,100-200μg·mkg^-1组的GiP-B1则可显著提高巨噬细胞分泌TNF-α的能力（P〈0.05）;不同浓度的GiP-B1干预RAW 264.7巨噬细胞后培养48 h,GiP-B1浓度增至100-400μg·mkg^-1时,NO生成量显著高于阴性对照组（P〈0.05）,且与GiP-B1浓度存在剂量效应关系;NOS生成量也高于阴性对照组,但仅200μg·mkg^-1组有显著性差异（P〈0.05）。给药24 h后,100μg·mkg^-1和400μg·mkg^-1组的GiP-B1可显著增加iNOS、TNF-α、IL-1β的mRNA表达量（P〈0.05）。结论：一定质量浓度的GiP-B1能增强RAW264.7巨噬细胞增殖率和吞噬能力,促TNF-α、IL-1β、NO及NOS释放,上调iNOS、TNF-α、IL-1β的mRNA水平,从而增强RAW264.7巨噬细胞的免疫功能。

响应面法优化阿魏菇多糖的超声辅助提取工艺及抗氧化活性研究

为研究阿魏菇多糖(Pleurotus ferulae polysaccharides,PfP)的超声提取工艺及体外抗氧化活性,在单因素试验的基础上,采用中心组合设计(box-behnken design,BBD)和响应面方法(response surface methodology,RSM),研究超声时间、超声温度、液料比及提取次数对PfP提取率的影响,优化PfP的超声辅助提取工艺;通过测定对Fe3+还原能力和对DPPH自由基、羟基自由基(·OH)的清除能力,对PfP的体外抗氧化活性进行研究。结果显示,超声温度、超声时间以及液料比均对PfP的提取率有显著影响,其中料液比影响最大,超声时间影响最小;最佳工艺条件为:超声温度66℃、超声时间27min、液料比29∶1(mL/g)、提取2次,在此条件下PfP提取率达到14.69%。体外抗氧化试验结果表明,PfP使Fe^3+还原产生的最大吸光值为0.54,对DPPH和·OH的最大清除率分别为85.61%和56.1%,其抗氧化活性均在一定浓度范围呈剂量正相关效应。

阿里红多糖通过激活Nrf2/ARE通路改善阿尔茨海默病大鼠海马及脑皮层的氧化应激损伤

探讨阿里红多糖(Fomes officinalis Ames polysaccharides,FOPS)抗氧化应激的作用,并从Nrf2/ARE信号通路研究其作用机制。72只健康雄性SD大鼠称体质量并按随机原则分为空白组、模型组、盐酸多奈哌齐组(0.5 mg/kg)、阿里红多糖高、中、低剂量组(100、50、25 mg/kg),每组12只。采用大鼠双侧海马CA1区注射(5μL/侧)Aβ1-42建立AD大鼠模型,给药30天,Morris水迷宫检测行为学变化,荧光定量RT-qPCR和蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测各组大鼠脑皮层和海马组织中结构蛋白Keap1、Nrf2及下游抗氧化蛋白HO-1、NQO1 mRNA及蛋白含量。结果发现,干预30天后,与空白组比较,AD模型组大鼠学习记忆能力显著下降(P<0.01),大鼠海马区及脑皮层Nrf2、NQO1、HO-1的mRNA含量及蛋白表达量显著下降(P<0.01),而Keap1 mRNA含量及蛋白表达量显著升高(P<0.01);与模型组比较,盐酸多奈哌齐和阿里红多糖高、中剂量组大鼠的学习记忆能力显著升高(P<0.01),大鼠海马区及脑皮层Nrf2、NQO1、HO-1 mRNA含量及蛋白表达量显著升高(P<0.05,P<0.01),Keap1 mRNA含量及蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01)。研究表明阿里红多糖通过调节Keap1的表达,促进Nrf2激活,诱导NQO1、HO-1的表达,发挥提高机体抗氧化损伤作用,从而改善AD大鼠学习记忆能力。

阿里红多糖对S_(180)荷瘤小鼠肿瘤生长的影响

目的:研究阿里红多糖对S_(180)荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用及对TLR4/MyD88/TRAF-6信号通路的调控。方法:采用右下肢腋部皮下接种S_(180)腹水瘤细胞建立荷瘤小鼠模型,随机分为模型组、环磷酰胺组(50 mg/kg)及阿里红多糖(50、100、200 mg/kg)组,每组10只,另取10只正常小鼠作为正常对照组,连续给药15 d,1次/d。测量小鼠体质量、瘤质量,流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群并计算CD4^(+)/CD8^(+),检测外周血血常规,HE染色法观察脾脏组织病理变化,qRT-PCR法和Western blot法检测荷瘤小鼠肿瘤组织中TLR4、MyD88、TRAF-6 mRNA及蛋白表达。结果:与模型组比较,阿里红多糖组小鼠脾脏指数、胸腺指数、CD4^(+)T细胞、CD4^(+)/CD8^(+)比值、淋巴细胞水平及肿瘤组织TLR4、MyD88、TRAF-6 mRNA和蛋白表达显著升高,瘤质量、CD8^(+)T细胞水平、中性粒细胞、单核细胞显著降低(P<0.05)。结论:阿里红多糖通过调控TLR4/MyD88/TRAF-6信号通路抑制S_(180)荷瘤小鼠肿瘤生长,同时调节荷瘤小鼠免疫功能。

基于Nrf2通路探讨阿里红三萜酸减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的作用

目的:探讨阿里红总三萜酸(Fomes officinalis Ames triterpenic acid,FOTa)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的预防作用及核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)通路的影响。方法:将60只昆明小鼠随机分为6组:对照组、模型组、地塞米松(dexamethasone,Dex)组及FOTa(70 mg/kg、140 mg/kg和280 mg/kg)组。FOTa组小鼠连续灌胃给药4周。末次灌胃生理盐水后,地塞米松组小鼠腹腔注射1 mg/kg地塞米松,30 min后除对照组外,其余各组大鼠均给予5 mg/kg LPS腹腔注射诱导小鼠ALI模型。LPS注射10 h后取小鼠肺组织,检测小鼠动脉血氧分压(PaO2)、动脉血二氧化碳分压(PaCO2)及氧合指数(PaO2/FiO2);计算肺组织湿/干重比值(wet/dry weight ratio,W/D);ELISA法测定血清中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSHPx)的水平;HE染色观察小鼠肺组织病理学变化;采用RT-qPCR及Western blot检测小鼠肺组织中Nrf2、Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Kelch-like epichlorohydrin-associated protein 1,Keap1)及血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)的mRNA及蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组小鼠PaO2与PaO2/FiO2降低(P<0.05),PaCO2与W/D升高(P<0.05);血清中MDA水平均升高(P<0.05),SOD与GSH-Px水平降低(P<0.05);肺泡壁增厚,大量红细胞渗出,可见片状血灶;Keap1 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05)、Nrf2与HO-1 mRNA与蛋白表达水平降低(P<0.05)。与模型组相比:Dex组及FOTa-280 mg/kg组PaO2与PaO2/FiO2升高(P<0.05),PaCO2与W/D降低(P<0.05);血清中MDA水平降低(P<0.05),SOD与GSH-Px水平升高(P<0.05);肺组织中肺泡间质水肿及出血减轻,红细胞渗出减少;Keap1 mRNA与蛋白表达水平降低(P<0.05),Nrf2与HO-1 mRNA与蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:FOTa可以通过抑制Keap1、促进Nrf2与HO-1 mRNA及蛋白表达水平,进而减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤。

阿里红多糖组分对APP/PS1双转基因模型小鼠海马区AKT/GSK3β/Tau/P-tau蛋白表达的影响

探究阿里红多糖组分(FOPS-a和FOPS-b)对阿尔茨海默症模型小鼠海马区AKT/GSK3β/Tau/P-tau蛋白表达的影响。实验选用64只3月龄雄性APP/PS1双转基因AD模型小鼠,随机分为模型组、多奈哌齐组(0.65 mg/kg)、阿里红多糖a组分(FOPS-a)与阿里红多糖b组分(FOPS-b)高、中、低(60、30、15 mg/kg),同月龄野生型C57BL/6J小鼠为正常组,每组8只,各组分别给与药物和生理盐水灌胃给药90天。6月龄时通过跳台、旷场实验检测小鼠行为学的变化,采用尼氏染色观察各组小鼠海马区神经元形态变化,应用RT-PCR法检测小鼠海马区AKT、GSK3β、Tau mRNA转录水平,Western-blot法检测AKT、GSK3β、Tau、P-tau蛋白的表达。结果发现阿里红多糖组分(FOPS-a和FOPS-b)均能明显改善小鼠学习与记忆功能并保护海马区神经元的损伤,上调AKT mRNA转录水平和蛋白表达,下调GSK3β、Tau mRNA转录水平和GSK3β、Tau、P-tau蛋白表达。研究表明阿里红多糖组分(FOPS-a和FOPS-b)通过减少海马区神经元纤维缠结从而保护神经元的损伤,发挥拮抗AD的作用。

阿里红多糖体内抗肿瘤作用及其机制研究

目的研究阿里红多糖(Fomes Officinals polysaccharide,FOPS)抗肿瘤作用及其抑瘤机制。方法通过腋部皮下接种S180小鼠腹水制备荷瘤小鼠模型。造模后随机分为空白组、模型组、阳性对照组、FOPS低中高剂量组,每组10只。空白组与模型组灌胃生理盐水,阳性对照组腹腔注射50 mg/kg环磷酰胺,低、中、高剂量小鼠分别灌胃不同浓度(50、100、200 mg/kg)FOPS混悬液。给药15 d后,检测各组小鼠抑瘤率及脏器指数;检测外周血白细胞、淋巴细胞数目;ELISA法检测荷瘤小鼠血清TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-1β、IL-6等细胞因子含量;qRT-PCR法检测肿瘤组织p38MAPK、p-c-junmRNA表达;Western Blot法检测p38MAPK、p-c-jun、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达量。结果(1)阳性对照组及FOPS低、中、高剂量组小鼠平均瘤重均显著低于模型组(P<0.05),四组小鼠抑瘤率分别为84.87%、54.29%、40.57%、30.84%。(2)与模型组比较,FOPS低剂量组小鼠脾指数、胸腺指数显著提高,白细胞数目、淋巴细胞数目显著升高(P<0.05)。(3)与模型组比较,FOPS低剂量组小鼠血清TNF-α、IFN-γ、IL-2含量显著升高(P<0.05),FOPS低、中、高剂量组小鼠血清IL-1β、IL-6含量显著降低(P<0.01)。(4)FOPS低剂量组p38MAPK、p-c-junmRNA表达水平高于模型组(P<0.05),p38MAPK、p-c-jun和p-NF-κB蛋白表达水平高于模型组(P<0.05)。结论FOPS具有显著抗肿瘤活性,其机制与上调MAPK/NF-κB信号通路中p38MAPK、p-c-jun和p-NF-κB等相关基因及蛋白的表达有关。

阿里红多糖对Aβ1-42诱导的AD大鼠模型海马区及脑皮层ROS/8-OHdG/3-NT/4-HNE含量的影响

目的研究阿里红多糖(Fomes officinalis polysaccharides,FOPS)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型大鼠海马区神经元的形态改变及脑皮层和海马区氧化应激水平的影响。方法72只健康雄性SD大鼠称重并随机分为对照组、模型组、盐酸多奈哌齐组(0.5mg/kg)、阿里红多糖高、中、低剂量组(100、50、25 mg/kg),每组12只。采用大鼠双侧海马CA1区注射(5μL/侧)Aβ1-42建立AD大鼠模型,给药30 d后,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察海马神经元的形态改变,DCFH-DA荧光探针分析处理对各组大鼠海马区和脑皮质层中活性氧簇(reactiveoxygenspecies,ROS)的影响,酶联免疫吸附(enzymelinked immunosorbentassay,ELISA)法检测8羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2’-deoxyguanosine,8-OHdG)、3-硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine,3-NT)、4羟基壬烯醛(4-hydroxy-2-nonenal,4-HNE)的含量。结果实验30 d后,与模型组比较,盐酸多奈哌齐及阿里红多糖组大鼠锥体细胞数目明显增多、形态较完整、海马神经元大多数较正常、排列较规整紧密、着色均匀、核仁清晰,大鼠海马区及脑皮层ROS含量明显降低(P<0.01),8-OHdG、3-NT、4-HNE含量明显降低(P<0.01)。结论阿里红多糖通过影响Aβ1-42诱导的AD大鼠脑内ROS、8-OHdG、3-NT、4-HNE含量,改善脑内氧化应激状态,起到改善认知障碍和保护神经的作用。

阿里红多糖减弱β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)致BV-2细胞的神经炎症反应

目的探讨阿里红多糖(Fomes officinals Ames polysaccharide,FOPS)及多糖纯化组分(FOP-a)对小胶质细胞(BV-2)炎症反应的抑制作用。方法采用声淀粉样蛋内毒性片段(amyloid-β25-35,Aβ25-35)(40μg/mL)诱导小胶质细胞BV-2活化,建立炎症反应模型,利用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞存活率,并用酶联免疫法考察FOPS及FOP-a对Aβ25-35诱导的BV-2细胞产生的IL-1及TNF-α炎症因子的影响;LDH试剂盒检测BV-2细胞中乳酸脱氢酶活性表达变化;采用QPCR方法检测FOPS及FOP-a对BV-2细胞中EL-6、TNF-a、MCP-1、iNOS、COX-2及NF-κB等基因mRNA表达的影响;采用蛋白印迹方法检测FOPS及FOP-a对BV-2细胞中iNOS及COX-2蛋甶表达的影响。结果 FOPS及FOP-a可抑制Aβ25-35诱导的BV-2细胞IL-1及TNF-α炎症因子的释放和LDH活性表达(P<0.05)。FOPS及FOP-a显著抑制EL-6、TNF-a、MCP-1、iNOS、COX-2及NF-κB等基因mRNA表达(P<0.05)。FOPS及FOP-a抑制促炎因子iNOS、COX-2的蛋白表达(P<0.05)。结论阿里红多糖及纯化组分可明显减轻Aβ25-35诱导下产生的小胶质细胞BV-2的神经炎症反应。

阿里红调控MAPK/NF-κB信号通路对过敏性哮喘小鼠的影响及作用机制

目的:探讨阿里红多糖(FOPS)和阿里红醇提物(FOEE)对卵清白蛋白(OVA)诱导的过敏性哮喘小鼠模型的干预作用及潜在机制。方法:将72只雌性BALB/c小鼠随机分成9组,每组8只,分为正常组(Control),OVA诱导的过敏性哮喘模型组(OVA),阳性对照组(桂龙咳喘宁,Guilong),FOPS低、中、高剂量组(50,100,200 mg·kg^(-1)),FOEE低、中、高剂量组(50,100,200 mg·kg^(-1))。观察并比较小鼠体质量变化、肺组织病理学变化;测定各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞数量、IL-4、IL-5及TNF-α的含量;测定各组小鼠肺组织中磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达。结果:模型组小鼠BALF中炎症总细胞数量、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞的数量,BALF中IL-4、IL-5和TNF-α的含量,肺组织p-p38 MAPK、Caspase-1、p-IκBα和p-NF-κB p65蛋白表达均明显高于正常组(P<0.01),FOPS组,FOEE组和Guilong组上述指标则明显低于模型组(P<0.05或P<0.01)。结论:FOPS与FOEE均对小鼠过敏性哮喘具有改善作用,且FOPS的作用强于FOEE,其作用机制可能为通过干预MAPK/NF-κB信号通路从而改善OVA诱导的哮喘小鼠气道炎症。

胀果甘草多糖GiP-3的结构分析及免疫活性测定

目的：分离纯化胀果甘草多糖,并研究其结构及免疫活性。方法：采用水提醇沉法提取胀果甘草粗多糖,经离子交换柱色谱和凝胶柱色谱分离纯化,高效凝胶渗透色谱（HPGPC）法、红外光谱（IR）法、气相-质谱（GC-MS）法和核磁共振氢谱（-1H-NMR）法分析其结构,噻唑蓝（MTT）法测定其对小鼠淋巴细胞和巨噬细胞增殖的影响。结果：胀果甘草根及根茎经水提醇沉,离子交换柱色谱和凝胶柱色谱分离纯化,得到平均相对分子质量为2.1×10^4Da的均一多糖组分GiP-3。对该多糖的结构和免疫活性的研究结果表明,GiP-3是由阿拉伯糖（Ara）,鼠李糖（Rha）,半乳糖（Gal）以1∶0.12∶18组成的中性阿拉伯半乳聚糖,其结构的主链由→3）α-Galp（1→残基组成,→5）α-Araf（1→支链和少量→2,4）α-Rhap（1→支链位于α-Galp残基的O-6位上。GiP-3在体外对未经诱导和经刀豆蛋白（ConA）或脂多糖（LPS）诱导的小鼠脾细胞增殖均有促进作用,对RAW 264.7巨噬细胞的增殖也有一定的促进作用,与空白对照组均有显著性差异（P〈0.05）。结论：GiP-3为均一多糖,具有免疫增强活性。

维药阿里红多糖的提取及免疫活性研究

目的对新疆维药阿里红中的多糖进行提取,并研究阿里红粗多糖体外免疫活性。方法建立热水提取、乙醇沉淀、Sevag法除蛋白的方法提取阿里红多糖(FoP),红外及紫外吸收光谱检测其性质,采用苯酚-硫酸法测定多糖含量;采用MTT法检测不同浓度FoP在体外对小鼠脾细胞及腹腔巨嗜细胞增殖率的影响。结果 FoP产率为0.85%,多糖含量为68.81%;IR谱中,3423,2929,1651,1456,1130,1091,617cm-1处表现为典型的多糖吸收峰;UV谱中,260,280nm处均无吸收峰;体外活性试验中,FoP对小鼠脾细胞、腹腔巨嗜细胞的生长具有明显的促进作用。结论 FoP具有一定的免疫调节活性。

新疆维吾尔族和汉族KCNE1、KCNE4基因多态性与房颤的相关性研究

目的探讨新疆维吾尔族和汉族KCNE1基因rs1805127、KCNE4基因rs12621643位点多态性与房颤的相关性。方法采用病例一对照研究，纳入房颤患者852例（其中维吾尔族409例，汉族443例）。按照与病例组民族和性别相同、年龄相同或相近的原则，以1：1比例选出对照。提取外周血DNA，应用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性方法鉴定基因型。结果维吾尔族人群KCNEl（rs1805127）多态是患房颤的独立风险因素之一。汉族人群KCNE1（rs1805127）与房颤的患病无关。维吾尔族和汉族人群KCNE4（rs12621643）多态是房颤的独立风险因素。维吾尔族房颤阻塞性睡眠呼吸暂停综合征病史、肥胖、高血压、胆固醇、血同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）、超敏C反应蛋白（hypersensitive C-reactiveprotein，hs-CRP）、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、KCNE1（rs1805127）和KCNE4（rs12621643）的调整人群归因风险度（populationattributableriskpercentage，PARc）分别是9．68％、12．06％、15．76％、6．91％、11．37％、17．78％、9．31％、11．27％和6．46％。汉族房颤饮酒、高血压、胆固醇、Hcy、hs—CRP、IL-6和KCNE4（rs12621643）的PARc分别是12．94％、14．48％、7．24％、8．49％、17．29％、9．49％和7．41％。结论新疆维吾尔族、汉族KCNE1（rs1805127）与房颤的关系存在差异，维吾尔族人群KCNE1（rs1805127）与房颤相关。KCNE4（rsl2621643）与房颤的关系无民族差异。维吾尔族和汉族人群KCNE4（rs12621643）均是房颤患病的独立风险因素。在不同民族的人群中，根据“风险基因”选择重点人群进行可控风险因素的控制，对防治房颤具有一定作用。

阿里红多糖及其组分对RAW264.7巨噬细胞中MAPK信号途径的影响

目的研究阿里红粗多糖(FOPS)及其纯化组分(FOPS-a)对RAW264.7巨噬细胞MAPK(mitogen-activated protein kinases)信号途径的影响。方法不同浓度(50、100、200μg/ml)的FOPS及FOPS-a干预RAW264.7巨噬细胞24 h,采用RT-qPCR法和Western blot法检测MAPK信号通路中p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinases,p38 MAPK)、胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun NH2-terminal kinase,JNK)的mRNA表达和相应磷酸化蛋白质含量;加入MAPK特异性抑制剂(PD98059、SP600125、SB203580)后,Western blot法检测上述蛋白质的磷酸化水平,ELISA法检测巨噬细胞的TNF-α分泌量。结果与空白对照组相比,不同浓度的FOPS及FOPS-a可以显著提高p38、ERK mRNA表达量及其磷酸化蛋白质的含量(P<0.05);3种抑制剂均能显著降低FOPS及FOPS-a诱导的ERK1/2、p38蛋白磷酸化以及TNF-α分泌量的增加(P<0.05)。结论FOPS及FOPS-a可以活化ERK1/2、p38 MAPK信号转导通路而参与RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用。

阿里红多糖对刚地弓形虫RH株速殖子体外感染小鼠腹腔巨噬细胞的影响

目的探索药用植物阿里红多糖(fomes officinalis polysaccharides,FOPS)粗提物对刚地弓形虫(toxoplasma gondii,Tg)RH株速殖子体外感染小鼠腹腔巨噬细胞及虫体增殖和凋亡的影响。方法CCK-8法计算FOPS粗提物对小鼠腹腔巨噬细胞的IC50并筛选安全药物剂量;建立刚地弓形虫RH株速殖子与小鼠腹腔巨噬细胞接种比例为1∶5的体外感染模型,分设空白对照组、强感染对照组和高(400μg/ml)、中(200μg/ml)、低(100μg/ml)剂量组。Hochest 33258荧光染色观察虫体感染小鼠腹腔巨噬细胞6 h、12 h、24 h、36 h、48 h形态及感染率变化;相对定量PCR法检测各实验组弓形虫529基因表达水平并计算虫体相对增殖抑制率;Annexin V-FITC结合流式细胞术检测感染10 h时高剂量(400μg/ml)FOPS对培养上清中游离弓形虫凋亡的影响。结果FOPS粗提物对小鼠腹腔巨噬细胞的IC50为1038μg/ml,安全药物剂量为519μg/ml以下。Hochest 33258荧光染色发现高剂量组感染6 h时细胞爬片中TgRH株速殖子无法侵入巨噬细胞且出现核固缩强亮荧光凋亡现象,12 h内感染率仅(5.38±3.08)%,显著低于感染对照组。各药物组巨噬细胞感染率在各时间均低于感染对照组。48 h时中、高剂量组巨噬细胞感染率分别为(85.31±2.33)%和(67.58±3.47)%,低于感染对照组的(92.51±2.88)%,差异有统计学意义(F=150.4,P<0.05);低剂量组巨噬细胞感染率为(91.96±2.31)%,与感染对照组相比差异无统计学意义(F=0.46,P>0.05)。弓形虫529基因表达水平显示感染48 h时高、中、低剂量FOPS的相对增殖抑制率分别为(75.70±0.03)%、(45.65±0.08)%和(38.98±0.06)%。流式细胞术检测高剂量H-FOP药物组感染10 h时细胞上清中TgRH株速殖子细胞周期发现G1期前典型亚二倍凋亡峰,占弓形虫总数的20.44%。结论FOPS可抑制刚地弓形虫TgRH株速殖子体外对小鼠腹腔巨噬细胞的感染和细胞内增殖,并在感染初期有抑制虫体入侵巨噬细胞、诱导虫体凋亡的作用。

阿里红多糖对小鼠腹腔巨噬细胞体外抗弓形虫感染细胞因子分泌的影响

目的探索新疆植物药阿里红粗多糖(fomes officinalis polysaccharides,FOPS)提取物对小鼠腹腔巨噬细胞体外抗弓形虫TgRH株速殖子感染细胞因子分泌的影响。方法建立刚地弓形虫RH速殖子与小鼠腹腔巨噬细胞接种比例为1∶5的体外感染模型,实验设空白对照组、感染对照组和高(400μg/ml)、中(200μg/ml)、低(100μg/ml)3个药物剂量的药物对照组及感染模型治疗组。以流式微球捕获芯片技术(cytometric bead array,CBA)检测各组细胞感染虫体和药物作用6、12、24、36、48 h培养上清中IL-6、IL-10、TNF、INF、IL-12p70及MCP-1细胞因子水平。结果各实验组培养上清中IL-10和INF在实验过程均无表达。空白对照组感染48 h时TNF-α、IL-12p70及MCP-1略升高。感染组IL-6随感染时间延长水平显著升高,至感染48 h达(881.05±6.99)pg/ml,与空白对照组比较差异有统计学意义(F=235.3,P<0.05);TNF-α至感染48h时达(292.30±2.63)pg/ml,高于空白对照组(F=52.45,P<0.05);MCP-1和IL-12p70至感染48 h时与空白对照组差异无统计学意义(F值分别为2.624和3.518,P均>0.05)。各剂量FOPS作用于空白小鼠腹腔巨噬细胞,培养上清中MCP-1和TNF-α随作用时间延长而显著升高,至24 h时达到高峰,之后下降。各剂量药物组与空白对照组在药物作用24 h时组间MCP-1和TNF-α水平差异有统计学意义(F分别为41.95和231.4,P均<0.05);TNF-α表达水平与药物浓度升高成正比,MCP-1在培养上清中表达水平为M-FOP>L-FOP>H-FOP>空白对照组。高剂量H-FOP作用于感染巨噬细胞36 h内IL-6表达均较低,48 h略有升高,M-FOP组和L-FOP组IL-6表达趋势与感染对照组相似,但各感染时间IL-6表达水平均低于感染对照组(F=461.9,P<0.05)。各药物组TNF-α表达水平于药物作用24 h时升高,36 h时显著降低,48 h又迅速升高,各药物组与感染对照组比较差异有统计学意义(F=163600,P<0.05)。高剂量H-FOP组作用24 h细胞培养上清中TNF-α为(1624.426±6.54)pg/ml,较感染对照组水平升高100倍以上,略高于M-FOP组和L-FOP组,而M-FOP组与L-FOP组差异无统计学意义(F=1.396,P>0.05)。各药物组MCP-1变化趋势同TNF-α,MPC-1表达水平随药物剂量升高而降低。各药物组对感染细胞MPC-1表达水平的影响显著强于对正常小鼠腹腔巨噬细胞的影响,其中L-FOP组药物作用24 h时感染细胞培养上清中MCP-1水平为(119.11±0.91)pg/ml,约为L-FOP药物对照组的2倍。结论阿里红多糖粗提物主要影响小鼠腹腔巨噬细胞TNF和MCP-1的表达,其中使TNF表达上调,时间持续至给药后24 h。而MCP-1的上调可能与阿里红多糖粗提物中的其他成分有关。

基于网络药理学和实验验证探讨阿里红治疗阿尔茨海默病的作用机制

目的:利用网络药理学结合实验验证探讨阿里红治疗阿尔茨海默病(AD)可能的作用机制。方法:借助中药分子机制的生物信息学分析工具(BATMAN-TCM)平台及公开报道的文献数据获得阿里红化学成分;利用PharmMapper药效团匹配平台和TargetNet数据库综合筛选出成分预测靶点;通过基因表达综合数据库(GEO)、DrugBank数据库等获取AD疾病靶点,取交集得出阿里红可能的作用靶点,并对其使用STRING数据库和Cytoscape 3.7.1网络可视化软件分别构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络和成分-靶点网络,且对网络进行拓扑分析;进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析筛选出阿里红主要作用通路及相关靶点蛋白,并用分子对接和体外细胞实验验证其结果。结果:共收集到阿里红24个候选成分和242个预测靶点,并得到与AD共同靶点96个,包括阿里红氨酸、3-酮基-去氢硫色多孔菌酸、齿孔酸等关键化合物和白蛋白(ALB)、乙酰胆碱酯酶(AChE)、雌激素受体α基因(ESR1)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)等潜在的作用靶点;GO富集分析获得392个条目,主要跟β-淀粉样蛋白代谢途径和胆碱酯酶活性有关,KEGG富集分析获得77个条目,主要涉及雌激素信号通路、胆碱能突触、AD等生物学过程及通路;分子对接结果显示,阿里红7个关键成分与淀粉样前体蛋白(APP),BACE1,AChE,Caspase-3之间表现出良好的自发结合能力。体外细胞验证实验显示,与模型组比较,不同剂量阿里红组细胞存活率均显著上升(P<0.01)且具有浓度依赖性,同时可下调APP、BACE1、AChE、Caspase-3mRNA和蛋白表达量(P<0.05)。结论:该研究结果首次揭示了阿里红对AD治疗具有多成分、多靶点、多途径相互作用的特点,为后续阿里红防治AD作用机制研究提供了参考依据。

阿里红多糖对阿尔茨海默症小鼠认知功能的作用机制研究

目的考察阿里红多糖(FOPS)改善淀粉样前体/早老素(APP/PS1)阿尔茨海默症小鼠的认知功能及潜在机制。方法C57BL/6J雄性小鼠作正常组;根据体重将APP/PS1双转基因雄性小鼠随机分为4组:模型组、对照组、FOPS-a实验组和FOPS-b实验组,每组8只。模型组正常饲养,对照组给予0.65 mg·kg^(-1)盐酸多哌奈齐,FOPS-a实验组给予60 mg·kg^(-1) FOPS-a,FOPS-b实验组给予60 mg·kg^(-1) FOPS-b,灌胃给药;qd,连续给药3个月。用Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,实时荧光定量-聚合酶链反应法测定海马区糖原合成酶激酶-3(GSK3α)、淀粉样前体蛋白(APP)、β淀粉样蛋白(Aβ)基因转录情况,蛋白质印迹法检测GSK3Α、APP、Aβ_(1-42)、早老素(PS-1)蛋白的表达。结果模型组、正常组、对照组、FOPS-a组、FOPS-b剂量组第4天逃避潜伏期分别为(48.29±10.49),(27.36±17.25)(28.91±20.31),(23.21±17.60)和(24.25±16.40)s;这5组的GSK3αmRNA转录水平分别为7.17±0.46,1.03±0.27,3.11±0.45,4.15±0.67和4.41±0.43;这5组APP mRNA转录水平分别为1.12±0.04,0.36±0.02,0.40±0.04,0.45±0.07和0.50±0.08;AβmRNA转录水平分别为1.12±0.04,0.24±0.10,0.44±0.06,0.45±0.07和0.50±0.08;蛋白结果的趋势与基因一致。上述指标,模型组与正常组比较、实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论阿里红多糖组分能够改善APP/PS-1转基因小鼠学习记忆障碍,其机制可能与抑制GSK3α,APP,Aβ_(1-42),PS-1蛋白表达和降低海马区Aβ_(1-42)沉积有关。

阿里红多糖对APP/PS1双转基因小鼠神经损伤的保护作用

目的:探讨阿里红多糖对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠的神经保护作用。方法:将SPF级40只3月龄APP/PS1双转基因雄性小鼠随机分成5组,分别为模型组、盐酸多奈哌齐0.65 mg/kg组,阿里红多糖50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg组;8只C57小鼠作为正常对照组。连续灌胃给药90 d。采用Morris水迷宫法测定小鼠空间学习记忆能力,通过比色法测定小鼠脑组织中SOD、GSH-Px、AchE活性和MDA含量的变化;采用HE染色观察小鼠脑神经元形态和脑组织病理学变化;刚果红染色法和免疫印迹法检测各组小鼠脑组织中与神经元损伤相关的APP、Aβ1-40,以及TrkA的含量变化。结果:在水迷宫实验中,相比正常组小鼠,模型组小鼠的学习记忆能力均有所下降,海马组织内SOD、GSH-Px、AchE酶活性明显下降,MDA含量明显升高;与模型组相比,阿里红多糖各组小鼠活动量均增加,学习记忆能力得到不同程度的恢复,SOD、GSH-Px、AchE活性升高, MDA含量降低。在免疫组化染色和免疫印迹实验中,相比正常对照组小鼠,模型组小鼠(0.5%CMC)的脑组织中明显可见坏死的神经元,APP、Aβ1-40蛋白沉积数量增多,TrkA含量下降;而阿里红多糖给药各组神经元数量不同程度增多,体积变大,坏死情况得以不同程度改善,APP、Aβ1-40含量降低,TrkA含量升高。结论:天然药物阿里红多糖能明显改善阿尔茨海默病AD小鼠的学习记忆能力,促进神经元生长,对AD小鼠具有神经保护作用。