16型人乳头状瘤病毒E6、E7诱导的人永生化口腔上皮细胞系的建立

目的 建立 16型人乳头状瘤病毒 (humanpapiloavirus,HPV16 )E6、E7诱导的永生化口腔上皮细胞系。方法 正常口腔上皮细胞转染pLXSNHPV16E6、E7,G418筛选阳性细胞 ,连续培养建系 ;Westernblot检测细胞HPV16E6、E7蛋白表达 ;生物学特性检测 ;集落实验 ;成瘤实验。结果 细胞连续培养达 18个月余 ,命名为人永生化口腔上皮细胞 (humanimmortalizedoralepithelialcell,HIOEC) ,HIOEC表达HPV16E6、E7蛋白 ,角蛋白阳性 ,透射电镜观察细胞含有丰富的张力原纤维 ,细胞之间形成桥粒 ,克隆形成率 0 77% ,裸鼠未成瘤。结论 成功建立了HPV16E6、E7诱导的人永生化口腔上皮细胞系。

16型人类乳头状瘤病毒对口腔上皮细胞Rb、p16、Cyclin D1表达的影响

目的 探讨 16型人类乳头状瘤病毒 (humanpapillomaviruses ,HPV)对口腔上皮细胞Rb、p16、CyclinD1表达的影响 ,以明确HPV16在口腔上皮细胞癌变过程中的作用机制。方法 Western印迹检测人永生化口腔上皮细胞HIOEC中HPV16E6、E7、Rb、p16、CyclinD1蛋白表达 ,免疫沉淀 Western印迹偶联检测HIOEC中HPV16E7 Rb复合物形成情况。结果 HIOEC表达HPV16E6、E7蛋白 ;HIOEC出现去磷酸化Rb堆积 ,HPV16E7和去磷酸化Rb形成复合物 ;p16、CyclinD1蛋白表达无改变。结论HPV16E7在HPV16诱导的口腔上皮细胞永生化过程中起了重要作用。