人端粒保护蛋白在胃癌中的异常表达及其临床意义

目的探讨人端粒保护蛋白(humanprotectionoftelomeres,hPOT1)在胃癌中的异常表达及其临床意义。方法用SP免疫组化方法检测hPOT1在57例胃癌标本中的表达,同时以10例正常胃黏膜标本做对照。结果57例胃癌标本的表达全阳性,阳性率100%,显著高于正常胃黏膜hPOTl的表达(40%)。浸润至或超过浆膜层的胃癌hPOT1表达强度显著高于未达浆膜层者,Ⅲ/Ⅳ期胃癌明显高于Ⅰ/Ⅱ期胃癌,低分化胃癌高于高分化胃癌(P<0.05)。结论hPOT1在胃癌组织中表达异常增高,提示hPOT1与胃癌的发生、发展有密切的关系,检测hPOT1的表达可能会有助于胃癌的早期诊断和预后。

临床实习医生的常见问题及其解决方法

目的总结临床实习医生在工作中存在的常见问题,并探讨解决这些问题的有效方法。方法分析临床实习医生在工作学习中存在的问题,剖析导致这些问题的原因,结合自己的带教经验,提出相应的解决办法。结果通过解决临床实习医生存在的常见问题,调动了实习医生学习的主动性和积极性,提高了临床实习效果。结论及时解决临床实习医生思想和认识上的偏差,能明显提高实习的效果。

载体介导的siRNA对SGC-7901胃癌细胞中hPOT1表达的抑制作用

目的构建人端粒保护蛋白(hPOT1)基因的短链干扰核糖核酸(siRNA)表达载体,观察其在胃癌细胞中抑制hPOT1基因表达的作用,为进一步研究hPOT1在胃癌细胞生长增殖中的作用打下基础。方法设计并化学合成64nt编码hPOT1siRNA基因片段的寡核苷酸,退火成双链后将其连接到pSUPER质粒的H1RNA启动子下游,构建psiRNAhPOT1重组质粒。经酶切、测序鉴定后,用脂质体介导的基因转染方法,转入SGC7901胃癌细胞,用半定量RTPCR检测hPOT1表达水平的变化。结果测序结果表明重组质粒psiRNAhPOT164个碱基成功插入到预定位置,并且序列完全一致。hPOT1siRNA表达载体psiRNAhPOT1转入胃癌细胞后,可明显抑制SGC7901细胞hPOT1的表达。结论构建的hPOT1基因的siRNA表达载体psiRNAhPOT1重组质粒能显著抑制hPOT1基因在SGC7901胃癌细胞中的表达。

hPOT1基因正反义真核表达载体的构建及鉴定

目的构建人端粒保护蛋白(humanprotectionoftelomeres,hPOT1)基因的正、反义真核表达载体,以进一步研究hPOT1蛋白的功能及作用机制。方法用限制性内切酶将hPOT1cDNA从pLPCNMycPOT1质粒上切下来,经适当改造后以正、反方向插入到质粒pcDNA3.1(-)中,构建hPOT1基因的正、反义真核表达载体;用PCR、酶切及DNA测序的方法鉴定hPOT1基因正、反义表达载体序列和方向的正确性。结果PCR、酶谱分析及DNA测序结果表明hPOT1正、反义真核表达载体序列和方向正确。结论成功地构建了hPOT1正、反义真核表达载体,为进一步研究hPOT1在端粒保护、细胞衰老和凋亡中的作用奠定了基础。

经颈内静脉肝内门体分流术联合封堵器封堵治疗肝硬化门脉高压伴自发性脾、胃-肾分流

目的探讨经颈静脉肝内门体分流术(TIPS)联合封堵器封堵术治疗肝硬化合并自发性脾、胃-肾静脉分流的安全性及可行性。方法 2011年3月至2012年6月经影像学及实验室检查确诊肝硬化失代偿期伴上消化道出血或顽固性腹水合并脾、胃-肾分流患者28例,将其中分流道直径>1.2 cm的9例患者纳入研究,行间接、经肾静脉逆行或经皮穿刺门静脉直接门静脉造影了解门静脉、曲张静脉及脾、胃-肾分流道情况。穿刺右侧颈内静脉后送入RUPS100穿刺系统至肝静脉,穿刺门静脉,建立门体分流通道。另引入1支导丝探查脾、胃-肾分流道,沿留置至脾、胃-肾分流的导丝送入封堵器输送器,确定封堵器位置后,准确释放。球囊扩张肝实质及穿刺道,引入支架,定位并释放覆膜支架,送入造影导管至脾静脉,造影观察支架位置、血流、曲张静脉、脾、胃-肾分流道情况,必要时弹簧钢圈栓塞曲张静脉,计算压力梯度。结果 9例患者成功进行TIPS联合封堵器封堵治疗,无术中并发症。4例为TIPS术中直接联合封堵术治疗,术后无支架功能障碍及肝性脑病发生。5例为先行TIPS,术后4例发生严重肝性脑病(Ⅲ级),3例发生支架功能失常,1例并发上消化道出血。TIPS球囊扩张治疗后行封堵器封堵,5例患者未再发生支架功能障碍,仅1例发生Ⅰ级肝性脑病。结论 TIPS联合封堵器封堵术是一种安全、可行的治疗肝硬化合并自发性脾、胃-肾静脉分流的方法,可预防肝硬化门静脉高压伴自发性脾、胃-肾静脉分流引起的肝性脑病或上消化道出血。

hTERT干扰真核表达载体的构建及鉴定

目的构建和鉴定人端粒酶逆转录酶(hTERT)干扰真核表达载体。方法人工合成hTERT干扰序列并定向克隆到siRNA(small interfereace RNA)真核表达载体pSilencer3.1_H1neo;采用PCR、酶切和测序鉴定。结果成功构建了hTERT干扰真核表达载体。结论hTERT干扰真核表达载体的构建为进一步研究端粒、端粒酶在肿瘤细胞中的生物学作用奠定了基础。

端粒植入对胃癌SGC7901细胞生物学行为的影响

目的研究外源端粒片段植入对胃癌细胞生物学行为的影响,初步探讨端粒影响细胞生物学活性的作用机制。方法大规模制备含有端粒片段的质粒pSXneo1.6T2AG3,采用LipofectAMINTM2000介导的转染方式,将质粒转染胃癌细胞SGC7901,检测细胞周期、细胞形态、细胞生长曲线和细胞周期相关基因表达的改变。结果端粒片段能够成功导入SGC7901细胞,获得稳定的细胞株。端粒片段植入后细胞生长变慢,异型性减少,S期细胞减少,G0/G1和G2M期细胞比例增加,增殖指数减小,P21mRNA表达明显高于SGC7901细胞(P<0.05),caspase3mRNA在各组细胞的表达无显著差异(P>0.05)。结论携带了1600bp端粒TTAGGG重复序列的真核表达载体pSXneo1.6T2AG3能够稳定转染至人胃癌SGC7901细胞中,使细胞增殖减慢,P21mRNA表达上调,但对caspase3mRNA表达无明显影响。

hPOT1 RNA干扰对人胃癌BGC823细胞突变型p53表达的影响

目的通过RNA干扰技术抑制人胃癌细胞BGC823中人端粒保护蛋白(human protection of telomeres 1,hPOT1)的表达,观察hPOT1 RNA干扰对胃癌BGC823细胞突变型p53基因转录水平的影响。方法从hPOT1编码区外显子8的区域选取一段19个碱基的序列gtactagaagcctatctca为RNA干扰靶向序列,构建hPOT1的RNA干扰真核表达载体,转入体外培养的低分化人胃癌细胞BGC823,提取细胞总RNA,半定量RT-PCR检测hPOT1和突变型p53基因mRNA表达水平的改变,验证hPOT1 RNA干扰载体的基因沉默效率,了解抑制hPOT1表达后突变型p53基因mRNA水平的改变。结果经DNA测序鉴定,hPOT1 RNA干扰载体包含干扰序列的插入片段,插入位置正确。经半定量RT-PCR鉴定,RNA干扰组细胞的hPOT1 mRNA表达水平明显下调,基因沉默效率在70%左右;突变型p53表达下调。结论通过RNA干扰技术抑制人胃癌细胞BGC823中hPOT1表达后,突变型p53表达下调,提示hPOT1与突变型p53之间有一定的相关性。

经颈静脉肝内门体静脉分流术治疗门静脉高压专家共识

经颈静脉肝内门体静脉分流术(TIPS)广泛应用于门静脉高压及其并发症的治疗。近年来,TIPS的适应证、手术方式、术后管理等相关研究都有了新的进展。中华医学会消化病学分会消化微创介入协作组邀请TIPS领域(包括消化科、肝病科、介入放射科、肝胆外科)的相关专家,以循证医学为依据,更新TIPS治疗门静脉高压共识意见,旨在规范和推进TIPS技术在门静脉高压治疗中的临床应用和术后管理。

miR-585-5p在胃癌细胞中的表达和对迁移与增殖的影响

目的:探讨miR-585-5p在胃癌细胞中的表达及其对胃癌AGS细胞迁移和增殖的作用。方法:Real-time qRT-PCR(quantitative reverse transcription PCR)方法检测miR-585-5p在胃癌BGC-823、AGS、SGC-7901细胞系和人胃永生化细胞系GES中的表达。化学合成的miR-585-5p-mimics过表达试剂及其NC(negative control),瞬时转染AGS细胞。运用Transwell转移实验和划痕实验检测AGS细胞过表达miR-585-5p对细胞迁移能力的影响。MTT实验检测AGS细胞过表达miR-585-5p对细胞增殖的影响。结果:miR-585-5p在3种胃癌细胞系中均呈低表达,体外上调miR-585-5p表达能降低细胞的迁移能力,但对增殖无影响。结论:miR-585-5p具有抑制细胞迁移的作用且与增殖无关,miR-585-5p低表达可能参与了胃癌的发生发展。

经皮肝静脉穿刺治疗房间隔缺损合并下腔静脉异位连接封堵1例

1临床资料患者女性,21岁,主因“入职体检发现房间隔缺损10 d”于2021年8月22入院。入院查体:T:36.2℃,P:84次/min,R:20次/min,BP:90/60mmHg(1mmHg=0.133k Pa),右心扩大,第二心音固定分裂,胸骨左缘(2~3)肋间可闻及2/6级收缩期杂音。查心脏超声提示房间隔缺损(大血管短轴切面11 mm)(图1A),下腔静脉异位连接(肝后段缺如,经半奇静脉向上走行,汇入部分显示不清)(图1B).

MiR-218通过调控Robo1抑制胃癌细胞的侵袭和转移

本研究首先用反复的Transwell迁移和侵袭实验分别筛选、获得了高转移潜能（MKN28-M，SGC7901-M）和低转移潜能（MKN28-NM，SGC7901-NM）的胃癌细胞亚系，并对其生物学特性进行了鉴定。

限流支架治疗经颈静脉肝内门体分流术后复发性或持续性显性肝性脑病的效果和安全性

目的 分析限流支架治疗经颈静脉肝内门体分流术(TIPS)后复发性或持续性肝性脑病的效果和安全性。方法 选取空军军医大学第一附属医院2013年1月-2018年8月TIPS术后明确诊断为持续性或复发性显性肝性脑病的患者11例。限流支架置入前后选用客观量表对肝性脑病患者进行准确评估。限流支架应尽量选择同类型和合适长度的金属覆膜支架,术中术后常规门静脉造影并测门静脉压力梯度。主要观察终点为肝性脑病的变化情况。采用配对 t 检验分析手术前后各项检测指标的变化。结果11例患者均成功置入限流支架,限流支架置入后1周内8例患者肝性脑病消失,2例患者降为1级,其中1例患者因肝硬化严重并发肝衰竭,肝性脑病改善不明显。直径4 mm限流支架2例,5 mm 8例,6 mm 1例,限流术后门静脉压力梯度升高[(6.09±0.70) mm Hg vs (15.36±2.94) mm Hg, t=2.53,P =0.003 8]。限流术后数字编码测试所需的时间较术前有显著下降[(269±80) s vs (464±90) s, t=2.94, P =0.001]。术后1个月患者Alb改善显著( t=1.75,P =0.013)。 4 mm限流支架的2例患者分别在术后6个月和12个月因消化道出血死亡;5 mm限流支架的8例患者有2例在术后3个月再出血,另1例术后15个月发生大量腹水,1例限流术后生存2年后因黄疸、顽固性腹水并发肝衰竭死亡;6 mm限流支架的1例患者术后25 d并发慢加急性肝衰竭死亡。结论 限流支架能够有效改善TIPS术后药物治疗无效的持续性或复发性显性肝性脑病且安全可行,但限流支架直径过小可能会引起支架再狭窄继发门静脉压力升高。

经肝动脉化疗栓塞术联合抗血管生成药基础上使用程序性死亡受体1抑制剂治疗中晚期肝细胞癌的有效性和安全性分析

目的探讨经肝动脉化疗栓塞术(TACE)联合抗血管生成药(TKI)的基础上后续使用程序性死亡受体1(PD-1)抑制剂与TACE+TKI两种方式治疗中晚期肝细胞癌(HCC)的有效性、安全性和预后影响因素。方法选取2018年6月—2021年7月在空军军医大学第一附属医院所有接受TACE+TKI+PD-1抑制剂和部分接受TACE+TKI治疗的患者。收集患者的临床资料,采用倾向性评分匹配法平衡组间基线特征。计数资料2组间比较采用χ^(2)检验,TACE次数2组间比较采用Wilcoxon秩和检验,Kaplan-Meier法分析患者的总生存期,单因素和多因素Cox回归模型分析相关预后影响因素。结果共筛选到181例中晚期HCC患者,其中TACE+TKI+PD-1抑制剂治疗的患者为50例,倾向性评分匹配后,纳入40例TACE+TKI+PD-1抑制剂治疗患者(观察组)和40例TACE+TKI治疗患者(对照组)。至随访截止时间,中位随访时间为28.6个月(95%CI:22.1~35.1),观察组的中位生存期为15.9个月(95%CI:7.5~24.2),对照组中位生存期为11.2个月(95%CI:5.0~17.5)。Cox回归分析提示PD-1抑制剂的应用(HR=0.42,95%CI:0.23~0.80,P=0.008)、TACE次数(HR=0.67,95%CI:0.46~0.99,P=0.043)、Child-Pugh分级(HR=2.40,95%CI:1.15~5.00,P=0.019)和血管侵犯(HR=3.42,95%CI:1.11~9.42,P=0.031)是患者预后的独立影响因素。观察组与对照组的2级以上不良反应发生率均为40%,未见显著性差异(P=0.818)。结论TACE+TKI+PD-1抑制剂较TACE+TKI治疗中晚期HCC患者可以明显延长患者生存期,且不良反应相对可控。

肝癌合并门静脉高压的局部消融治疗

随着多种治疗方法的综合应用,原发性肝癌患者生存期不断延长。对于合并门静脉高压的早期肝癌患者,局部消融治疗可达到长期生存,并在稳定门静脉压力,保存肝脏功能,减少并发症等方面具有积极的作用。此外,局部消融可以和经肝动脉化疗栓塞术、经颈内静脉肝内门体分流术、脾切除、贲门周围血管离断术等方法相结合,进一步提高疗效。围手术期客观评价门静脉压力,预防食管胃底静脉曲张破裂出血,纠正脾功能亢进和防止术后肝衰竭,做好多学科团队协作管理,有助于提升消融后患者的管理效率。

TACE联合抗血管生成药及PD-1抑制剂治疗中晚期肝癌的有效性和安全性

目的探讨经动脉化疗栓塞术(TACE)联合抗血管生成药的基础上加用程序性死亡受体-1(PD-1)抑制剂治疗中晚期肝细胞癌(HCC)的有效性和安全性。方法收集分析2018年6月至2020年10月在西京医院接受TACE+抗血管生成药+PD-1抑制剂治疗的中晚期HCC患者。收集患者的临床资料,分析客观缓解率(ORR)、疾病控制率(DCR)、无进展生存期(PFS)、总生存期(OS)及相关不良反应(AE),探讨联合治疗的有效性和安全性。结果共纳入35例HCC患者,至随访截止时间,死亡患者17例(48.6%),存活患者18例(51.4%)。患者的中位PFS为8.9月(95%CI:6.3~11.6),中位OS为16.1月(95%CI:11.4~20.9)。总体ORR为60%,疾病控制率(DCR)为85.7%。在接受治疗的35例患者中,9例(25.7%)患者发生2级以上不良反应,经过减少药量和给与对症处理后均好转。结论联合治疗对中晚期HCC患者有一定的治疗效果,且不良反应相对可控。

原发性骨髓纤维化合并肝血管性疾病和/或门静脉高压症的临床特征和预后

目的探讨原发性骨髓纤维化(PMF)相关肝血管疾病和门静脉高压症的临床特征、肝组织病理学特点和预后。方法选取2010年7月—2020年12月在解放军第九六〇医院和空军军医大学西京消化病医院确诊的68例PMF患者,其中22例以肝血管疾病/门静脉高压症为主要表现,回顾性分析了这些患者的临床和病理特征。根据患者有无血栓形成分为两组,总结其治疗和预后情况。通过Kaplan-Meier绘制生存曲线,通过log-rank检验比较两组间长期生存率。结果68例PMF患者中,22例出现肝血管疾病和/或门静脉高压症,患病率约为32.35%。其中,13例(59.1%)表现为门静脉血栓形成,1例(4.5%)表现为Budd-Chiari综合征,8例(36.4%)表现为门静脉高压症。7例患者接受肝活检,病理均显示肝脏髓外造血,小叶和汇管区淋巴细胞、浆细胞和嗜酸性粒细胞不同程度浸润,但肝小叶结构正常。随访期间7例死亡患者,其中5例死于血栓形成或门静脉高压相关并发症。患者总体中位生存时间为57.99个月,其中血栓形成组中位生存时间为45.33个月,无血栓组中位生存时间为64.00个月,尽管没有显著统计学差异(χ2=3.035,P=0.081),但是可以看到非血栓组较血栓组表现出更好的生存趋势。结论肝血管疾病和门静脉高压症患者应考虑原发病为PMF的可能性,而PMF患者也应进行肝血管疾病筛查,并早期干预。无血栓形成的患者可能比血栓形成的患者有更好的生存趋势。

无创诊断指标联合抗gp210对原发性胆汁性胆管炎肝纤维化的预测价值

目的验证无创诊断指标天冬氨酸氨基转移酶与丙氨酸氨基转移酶比值(AAR)、天冬氨酸转氨酶与血小板计数比值(APRI)和基于4因子的纤维化指数(FIB-4),对初治原发性胆汁性胆管炎(PBC)进展期肝纤维化的诊断价值,特别是无创指标联合抗gp210的诊断价值。方法收集2005年12月至2020年12月在西京消化病医院和解放军第九六〇医院消化内科两个中心接受肝活检的208名初治PBC患者的完整临床资料,对包括AAR、APRI和FIB-4的临床数据与肝脏病理分期进行回顾性分析,通过受试者工作特征曲线下面积(AUC)分析无创诊断指标联合或不联合抗gp210预测PBC肝纤维化的敏感性和特异性。结果进展期肝纤维化PBC患者AAR、APRI和FIB-4明显升高,但AUC均<70%。抗gp210与PBC肝纤维化程度独立相关。当与抗gp210联合诊断时,APRI和FIB-4预测进展期肝纤维化的AUC优于单独使用这些指标。在抗gp210阳性患者中,APRI和FIB-4预测进展期肝纤维化的AUC分别为0.812和0.874。使用APRI和FIB-4最佳双截断值,可分别使34.3%和51.3%的PBC患者避免肝穿刺活检。结论FIB-4是一种简单可靠的无创诊断指标,可用于预测抗gp210阳性初治PBC患者肝纤维化程度。

加强医学研究生临床科研能力培养的策略

研究生教育是我国培养高等医学人才的主要途径，但在医学研究的理解、科研基金的政策、学术水平的评价、研究生课程设置等方面的不足，使得研究生临床科研能力培养方面相对薄弱。本研究从不同层面分析了影响研究生临床科研能力培养的因素，并提出提高临床科研认识、加强临床科研支持、改善学术水平评价体系、完善临床科研培训等对策，为提高研究生培养质量提供借鉴。