大肠杆菌硫氧还蛋白thioredoxin基因的克隆及表达

以大肠杆菌XL1blue为模板 ,通过PCR技术扩增大肠杆菌硫氧还蛋白基因 ,并将目的基因分别连接到克隆载体pUC18和表达载体pTrcHisC上 ,构建重组质粒 .重组质粒pTrcHisC TRX在大肠杆菌中高效表达 ,最后利用固定化金属螯合亲和层析技术 (IMAC)获得较纯的目的蛋白 .为进一步研究硫氧还蛋白的功能及其应用提供了条件 .

中西医结合治疗子宫内膜异位症性不孕

子宫内膜异位症是一种常见的妇科疾患,在不孕症患者中,25％～40％患有子宫内膜异位症。对子宫内膜异位症性不孕的治疗,现代医学多采用假孕疗法、假绝经疗法等,但其副作用大,易出现反跳现象,受孕率也不高。笔者在临床以活血化瘀为主,结合补肾、健脾、柔肝、理气消结等法,并根据临床症状加用相应的西药,治疗子宫内膜异位症性不孕,收效甚佳,现介绍如下。 1 中药治疗 1.1 气滞血瘀型 患者情志抑郁,胸闷不舒,经前乳房胀痛,经期小腹痛剧。

MAE在线GPC-GC-MS/MS法测定板栗中20种有机磷农药残留

先以乙腈为提取溶剂,采用微波辅助萃取技术（MAE）对板栗样品中20种有机磷农药进行萃取（前处理）,然后将提取液经分散固相萃取净化,除去样品中大部分的脂肪和甾醇等干扰基质,再经在线GPC/GC—MS—MS在多反应监测模式（MRM）下进行检测和确证,建立了板栗中20种有机磷农药残留量的在线GPC—GC—MS/MS快速测定方法。测定结果表明：20种有机磷农药在0.01~0.20 mg/kg范围内的加标平均回收率为71.5%（104.0%,相对标准偏差为3.4%~9.4%。该方法准确、快速、净化效果好。

MSPD-GC-MS/MS法测定竹笋中26种有机氯农药残留量

以基质固相分散-气相色谱-串联质谱法（先将粉粹的竹笋样品经弗罗里硅土基质固相分散技术净化,然后用20 m L丙酮—正己烷溶液（1＋2,v/v）淋洗,GC—MS/MS检测,外标法定量）检测竹笋中26种有机氯农药残留量。结果表明：26种有机氯农药在5~200μg/m L范围内线性良好,相关系数均大于0.99。在0.01~0.1 mg/kg浓度范围内,26种目标物的平均加标回收率为81.1%~108.9%,相对标准偏差在3.3%~9.5%。该方法具有较好的准确度和精密度,各项技术指标均能满足竹笋中26种有机氯农药的检测需要。

原核生物核糖核酸酶HII基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

核糖核酸酶HII (RNaseHII)能有效降解RNA和DNA杂交链中的RNA链。为进一步研究其功能 ,利用大肠杆菌XL1blue为模板 ,相应的寡聚脱氧核苷酸为引物 ,PCR扩增大肠杆菌RNaseHII(rnh 2 )基因 ,并将目的基因连接到克隆载体 pUC18上 ,经测序确认无误 ,分别亚克隆到能够进行IPTG诱导的表达载体pTrcHisC和进行温度诱导的表达载体pBV2 2 0上。重组质粒转化到大肠杆菌DH5α细胞中获得高效表达。在载体pTrcHisC和 pBV2 2 0中目的蛋白RNaseHII的表达量均超过菌体总蛋白的 2 0 % ,且表达产物以稳定的包涵体形式存在。此项工作为以后目的蛋白的纯化提供了有利条件 ,并为研究其结构和功能奠定了基础。

多壁碳纳米管固相萃取/超高效液相色谱-串联质谱测定茶油中12种氨基甲酸酯类农药

建立了多壁碳纳米管(MWCNTs)为吸附剂的固相萃取净化/超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测茶油中12种氨基甲酸酯类农药残留的快速分析方法。样品经乙腈超声提取,MWCNTs固相萃取小柱净化,以乙腈进行洗脱,旋蒸浓缩后以0.1%乙酸-乙腈(5∶5,体积比)定容,采用UPLC-MS/MS多反应监测模式(MRM)测定,外标法定量。考察了提取方式、吸附材料类型、洗脱溶剂用量等因素对目标物萃取效率的影响。在优化实验条件下,MWCNTs固相萃取小柱对茶油样品的净化效果理想。12种氨基甲酸酯类农药在0.005～0.1μg/mL范围内线性关系良好,相关系数(r)均不小于0.998 88;在0.01、0.025、0.05 mg/kg加标水平下,12种目标物的平均回收率为78.3%～116%,相对标准偏差为2.6%～12%,方法的定量下限为0.2～3.0μg/kg。

纳米材料在食品有害污染物检测中的应用进展

随着人们对食品中重金属、农药残留、兽药残留以及包装材料中迁移物等有害污染物的关注,开发对这些有害污染物的快速、灵敏、经济的检测方法得到重视。纳米材料凭借其独特的物理、化学性质在科学领域得到越来越泛的应用,将纳米材料引入食品检测领域成为分析化学的一个研究热点。该文介绍了纳米材料的基本特性,分析了食品中有害污染物的种类、来源及其危害性,并对纳米材料在食品中有害污染物检测中的应用进行了介绍和论述。

突变型大肠杆菌二氢叶酸还原酶基因的合成

利用PCR定点突变技术 ,以野生型大肠杆菌二氢叶酸还原酶基因为模板 ,获取 3种突变型 (Cys85Ser,Cys15 1Ser,Cys85 15 1Ser)二氢叶酸还原酶 (DHFR)基因 .用限制性内切酶BamHⅠ与PstⅠ将 3种突变基因片段插入到克隆载体pUC18上 ,进行蓝白筛选 ,将筛选的克隆进行DNA序列测定 .

大肠杆菌NADP特异性谷氨酸脱氢酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达与纯化

谷氨酸脱氢酶是生物体内最主要的氧化脱氨基酶类 ,为了进一步研究其功能 ,我们以大肠杆菌DH5α菌株基因组DNA为模板和相应的寡聚脱氧核苷酸为引物 ,进行PCR扩增大肠杆菌NADP特异性谷氨酸脱氢酶基因 (NADP specificglutamatedehydrogenase ,gdhAgene) ,将所得DNA片断连接到质粒pUC18上 ,转化大肠杆菌DH5α ,进行蓝白筛选和酶切鉴定 ,经测序证明序列正确无误后将gdhA基因连接到表达载体pTrcHisC上 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达 ,经SDS PAGE和双波长扫描分析 ,确定大肠杆菌谷氨酸脱氢酶在大肠杆菌中表达时以包涵体的形式存在 ,未能检测到可溶性蛋白的表达 ,表达量可达菌体总蛋白的 15 %以上 .

蛋白质交联的研究进展

蛋白质共价交联不但存在于一些生理过程 ,还与一些神经性疾病的发病机理相关。本文综述国内外 3种观点 ,阐述蛋白质由功能体 /单体转变成交联的二聚体

从奈达翻译理论谈中医典籍名称的翻译

中医典籍是中华民族的文化瑰宝,随着中国软实力的进一步增强和全球化的要求,中医学越来越频繁地受到世界范围内的广泛关注,其典籍名称的翻译在中医文化外宣中的重要性更是不言而喻。对中医典籍的名称从内容含义和所含特殊标志两方面进行分类,基于奈达的翻译理论对典籍名称进行研究,希望从功能对等理论和读者反应理论等视角对中医典籍翻译的方法策略进行探索,以期为翻译中医典籍名称提供一些浅薄的思考。

人肽基脯氨酰顺反异构酶基因的克隆、表达、纯化及热变性交联

蛋白质分子间交联是普遍存在的现象 .然而 ,蛋白质交联的分子机理还不太清楚 .为了进一步探测蛋白质交联的分子机理 ,以及交联能否在异源肽链间发生 ,本实验室克隆了人肽基脯氨酰顺反异构酶 (humanPeptidylproly cis trans isomerase ,hPPI)cyclophilincDNA基因 ,并纯化出了PPI蛋白 .最后 ,将PPI和lysozyme蛋白进行热变性交联实验 ,结果显示在同源和异源肽链间都有二聚体和多聚体形成 .并证实蛋白质交联可经三步完成 :1 )蛋白质构象包括二级结构改变 ;2 )形成分子间二硫键 ;3)

流动而绵长的叙述——论音乐对余华创作的影响

余华是中国当代先锋文学代表作家之一,其创作风格在20世纪90年代发生了很大变化,音乐是其风格转变的重要契机。可以说,音乐扩展了他的视野,引发他对苦难主题的思考;音乐提升了他的创作技巧,为叙述找到了新的途径;音乐沉淀了他的情感,深化了表达的力量。

基于“一带一路”战略背景下高职食品类专业国际化人才培养模式研究

目前,在我国经济产业中,食品产业占有非常重要的地位,高职院校食品类专业也应顺应“一带一路”的发展要求,改善教学形式,加强综合能力。本文对“一带一路”对于高职院校的深远影响进行了全面分析,并结合高职食品类专业课程,构建国际化教学体系,同时对教学评价体系进行完善,以培养出优秀的国际化人才。

“一带一路”倡议背景下高职院校食品专业教师队伍发展机制研究

目前,高职院校食品专业教师的教育背景单一,缺乏实践经验,教学不能满足"一带一路"倡议对食品人才的需求,因此,要重视高职院校食品专业教师的专业化发展,提高食品专业教师的专业教学能力和素养。为了使高职教师的队伍建设更适合"一带一路"倡议的实施,教师应增强职业发展意识,各系发挥教学团队的优势,学校制定相关鼓励政策,全面促进高职院校食品专业教师的专业发展,为国家食品专业提供更多的复合型应用人才。

基于二自由度的直驱永磁同步风电机组机侧PWM控制

本文针对直驱永磁同步风力发电机(D-PMSG)机侧控制系统对性能指标跟踪性和抗扰性都有较高要求的特点,在介绍直驱永磁发电机d,q轴数学模型和矢量控制基础上,提出采用目标值滤波器型二自由度PID控制器来实现跟踪性能和抗扰性能的双优控制,仿真实验证明了这种方法的可行性。

教材策划编辑应具备的能力与自我提升

高校教材策划编辑针对自己特定的客户群体和当下新媒体的出现应该与时俱进,除了日常教材出版和教材营销的工作以外,更要在"互联网+"的大背景下重新定位自己,既要通过不断学习提高专业能力、调研能力和沟通能力,又要结合交叉领域和跨界思维完成策划编辑的自我提升。

大肠杆菌酒石酸脱氢酶β亚基的克隆、表达、纯化及包涵体的复性

利用PCR技术从大肠杆菌BL21中获取酒石酸脱氢酶β亚基基因(TtdB),并将之克隆到质粒pUC18上,转化大肠杆菌DH5α细胞.经测序证明序列无误后,将之与表达载体pTrcHisC连接,在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和双波长扫描分析,确定酒石酸脱氢酶β亚基在大肠杆菌中表达时以包涵体形式存在.目的蛋白用TALON金属亲和树脂纯化,通过分步透析逐步去除变性剂的方法复性.复性产率可达90%.

大肠杆菌二氢叶酸还原酶基因folA的克隆、表达纯化及分子间交联

利用PCR技术从大肠杆菌DH5α中获取二氢叶酸还原酶(DHFR)基因folA。用限制性内切酶BamHI与PstI将该片段插入到克隆载体pUC18上,DNA测序鉴定目的基因。而后再将该基因亚克隆到表达载体pTrcHisC上,IPTG诱导表达重组蛋白。在非变性条件下,用TALON金属亲和层析树脂纯化含组氨酸标记的重组DHFR。纯化产物在热诱导条件下行SDS-PAGE分析,除23000大小的单体外,还出现了交联的二聚体和多聚体;而当反应体系中含有还原剂β-巯基乙醇时,二聚体和多聚体都被减弱。推断蛋白质在热诱导条件下二级结构发生改变而产生交联,并且有二硫键的参与。

鸡溶菌酶和重组大肠杆菌融合蛋白(NADP-GDH)体外分子交联的初步研究

用PCR方法克隆的大肠杆菌NADP特异性谷氨酸脱氢酶 (NADP specificglutamatedehydrogenase ,NADP GDH)基因和其突变基因 ,插入表达载体pTrcHisC构建重组蛋白质表达体系 .经过IPTG诱导表达 ,用Talon固定化金属亲和层析树脂纯化出重组的天然和突变NADP GDH ,将它们和溶菌酶 (Lysozyme)通过热诱导去折叠方法进行体外蛋白质分子交联实验 ,在去折叠反应液中加入还原剂二硫苏糖醇 (DTT)后 ,不但没有分子间二硫键交联形成 ,同时也没有其他分子间共价键 (异肽键 )交联的形成 .另外 ,半胱氨酸残基定点突变后的NADP GDH重组蛋白质 ,无法参与形成分子间二硫键 ,实验证实经过热诱导去折叠后也没有分子间共价键 (异肽键 )交联 .这些结果进一步证明蛋白质分子间二硫键的形成能够促进蛋白质其他分子间共价键 (异肽键 )的形成 .