非洲猪瘟病毒防污染双重荧光定量PCR检测方法的建立

荧光定量聚合酶链反应(qPCR)技术在非洲猪瘟病毒(ASFV)的检测中发挥重要作用,然而该方法也存在一些局限性。一方面由于检测环境中易产生气溶胶污染,经常导致qPCR检测产生假阳性结果。另一方面,临床上已发现MGF基因缺失的变异株,现有的检测方法将无法满足野毒株与变异株鉴别检测的需求。为了解决qPCR易产生假阳性,ASFV核酸检测靶标基因过分单一的问题,建立了ASFV的防污染双重qPCR检测方法。该检测方法根据C962R基因和MGF-505-2R基因的保守序列设计引物和探针,并在反应体系中加入UNG酶达到防污染的目的,建立了ASFV的防污染双重qPCR检测方法。结果表明,利用该方法对C962R基因和MGF-505-2R的基因标准品进行检测,该检测方法具有较好的鉴别诊断效果。该检测方法的标准曲线具有良好的线性关系,相关系数为0.99;敏感性高,最低检测限为10 copies/μL的ASFV基因标准品;特异性强,与猪丹毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、副猪嗜血杆菌(Hoemophilus parasuis)、猪链球菌(Streptococcus suis)、猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)及猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)均无交叉反应;重复性较好,变异系数小于1.75%,使用该检测方法对194份临床组织样品检测,与商品化非洲猪瘟病毒抗原检测试剂盒比较,检测结果均为阴性,符合率为100%。该方法预期可用于ASFV野毒株与MGF-505-2R基因缺失株的鉴别诊断,为深入开展分子流行病学调查提供技术储备。

胸膜肺炎放线杆菌纳米PCR检测方法的建立与应用

为了建立一种高效、灵敏的胸膜肺炎放线杆菌(APP)检测方法,本研究针对APP的血清型保守基因-毒素4(APxⅣ)序列合成特异性引物,通过优化引物浓度、退火温度等建立了APP纳米PCR检测方法。敏感性试验结果显示,该纳米PCR对APP的检测下限为1×10^(2)CFU/mL,其灵敏度是普通PCR的10倍;特异性结果显示,该方法仅从APP核酸样品可检测到约417 bp的特异性目的条带,而对猪链球菌、副猪嗜血杆菌、大肠杆菌、沙门菌、金色葡萄球菌等其他病原的检测结果均为阴性;应用本研究建立的纳米PCR技术检测了41份临床疑似APP感染病料,结果显示常规PCR和纳米PCR检测APP阳性率分别为17.07%(7/41)和19.51%(8/41)。以上结果表明,本研究成功建立的APP纳米PCR检测方法敏感性高、特异性好,可用于APP感染的临床诊断及流行病学调查。

非消化寡糖对小鼠免疫调节的影响

为探讨低聚果糖、低聚木糖和低聚半乳糖3种非消化寡糖及其组合对小鼠的免疫调节作用,将140只雌性BALB/c小鼠随机分为7组(空白对照组、低聚果糖组、低聚木糖组、低聚半乳糖组、低聚木糖与低聚半乳糖复合组、低聚木糖与低聚果糖复合组、低聚半乳糖与低聚果糖复合组),各组分别以400 mg/kg的剂量进行灌胃,每天1次,连续15 d。通过测定免疫器官指数、巨噬细胞吞噬能力、血清溶血素水平、DTH迟发型变态反应程度、脾淋巴细胞增殖水平等指标,评价不同非消化寡糖及其组合对小鼠的免疫调节作用。结果显示,单一寡糖灌胃组与组合寡糖灌胃组小鼠各项免疫指标均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于对照组;组合寡糖灌胃组小鼠各项免疫指标均高于单一寡糖灌胃组,其中低聚木糖与低聚半乳糖(2 3,质量比)复合灌胃组效果最好。以上研究结果表明,非消化寡糖能够增强小鼠的免疫应答能力且对其进行组合有更好的效果。

猪链球菌纳米PCR检测方法的建立和应用

为了建立一种高效、灵敏的猪链球菌(SS)检测方法,针对SS的谷氨酸脱氢酶基因(gdh)合成特异性引物,通过优化退火温度与引物浓度,经特异性、敏感性、重复性以及临床样品检测,建立了SS的纳米PCR检测方法。特异性试验结果显示,该方法仅能从SS的基因组序列中扩增得到687 bp的特异性序列,与猪胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、猪大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌无交叉反应,且能同时识别1、2、7和9型4个目前流行的SS主要血清型,满足临床上多血清型SS感染检测的需要;敏感性试验结果显示,该方法对SS的最低检测下限为10 cfu/mL,与普通PCR方法相比,灵敏度提高了100倍;重复性试验表明,该方法检测效果稳定,重复性较好。用该方法和普通PCR对临床上收集的44份疑似SS感染样品进行检测,阳性率分别为72.7%(32/44),54.5%(24/44),表明该纳米PCR方法具有灵敏度高,特异性好等优点。综上,本研究建立的SS纳米PCR检测方法,能够准确、高效检测SS,为猪链球菌病的临床诊断和流行病学调查提供了技术支持。

非洲猪瘟病毒LNA引物PCR检测方法的建立及优化

为了建立一种便捷、快速且精准的非洲猪瘟病毒的检测方法,本研究根据GenBank中公布的ASFV p72基因序列,设计了一对特异性引物,并对引物中的适当碱基进行锁核酸修饰,通过优化退火温度、引物浓度,建立了非洲猪瘟病毒的锁核酸修饰引物PCR检测方法。结果表明,该方法具有良好的敏感性和特异性,检测灵敏度可以达到3×101copies/uL,比常规引物PCR方法的灵敏度提高了100倍,比real-time PCR方法的灵敏度提高了10倍,对猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒等病原基因组均无扩增,特异性良好。72份临床样品的检测结果与OIE推荐的qPCR方法检测结果一致,符合率为100%。本研究成功建立了非洲猪瘟病毒的LNA引物PCR检测方法,方法的特异性强、敏感性高,操作简单,为非洲猪瘟病毒的检测提供了一种新的、更加敏感的检测技术。

副猪嗜血杆菌lpxL基因介导的生物被膜形成及黏附入侵能力的分析

为了研究lpxL基因在副猪嗜血杆菌生物被膜形成及对细胞黏附入侵方面的作用,采用同源重组方法构建副猪嗜血杆菌lpxL基因缺失株H45-ΔlpxL;与野生株H45进行生物学特性比较。结果表明,lpx L基因缺失后,副猪嗜血杆菌的生长速度小于野生株;生物被膜合成量减小,对猪肾上皮细胞(PK-15)的黏附能力与入侵能力均有一定程度的减弱。结论,lpxL基因对副猪嗜血杆菌的增殖以及致病性都会产生一定作用。

高通量测序研究三种非消化性寡糖及其组合对小鼠肠道菌群的影响

目的研究低聚果糖(Fructooligofructose,FOS)、低聚木糖(xylooligosaccharide,XOS)和低聚半乳糖(galactooligosaccharide,GOS)三种非消化寡糖及其组合对小鼠肠道菌群的影响,方法将140只雌性小鼠随机分为:对照组(空白)、低聚果糖、低聚木糖、低聚半乳糖、低聚木糖与低聚半乳糖(1:1.5)复合、低聚木糖与低聚果糖(2:1)复合、低聚半乳糖与低聚果糖(2:1)复合共7组。各组每天分别以400 mg/kg剂量灌胃,连续15 d。末次灌胃24h后,收集小鼠新鲜粪便,用高通量测序技术分析其中微生物群落组成和结构的变化。结果与对照组相比,试验组小鼠肠道有益菌与致病菌比例差异显著,复合寡糖组小鼠肠道菌群物种多样性和丰富度最高,单一寡糖灌胃组次之;在属水平上,与对照组比,试验组均显著(P<0.05)提高有益菌的物种丰度,其中低聚木糖与低聚半乳糖(1:1.5)复合组、低聚木糖与低聚果糖(2:1)复合组显著(P<0.05)提高乳杆菌属、双歧杆菌属的物种丰度。结论非消化寡糖能够提高小鼠肠道微生物菌群多样性及丰富度,能在一定程度上改善肠道微环境且复合组效果优于单一组。

初中美术课堂教学策略研究

初中美术课程是义务教育阶段的一门必修课程,是实施美育、促进学生智力发展和思想道德教育的重要途径。通过艺术教学,有利于向学生传授艺术的基本知识和技能,有利于提高学生的审美能力,培养高尚情操,培养良好的道德品质和意志,有利于增强学生的爱国主义精神,有利于提高学生的观察能力、想象能力、形象思维能力和创造力。

初中美术欣赏课教学浅析

美的创造是以欣赏为最终目的的。人们对美术的欣赏是一种精神层面的高级活动。在欣赏的过程中,人们会对作品进行一定的评价,并从心理上对他人的创作进行感受和体会,形成独特的认知。欣赏与创造是分不开的,学生可以从欣赏中体会到作品独特的美感,还能使学生的视野得到拓展,扩大了他们的知识面。此外,美术作品在陶冶学生的情操方面也有其他艺术形式所无法取代的优势。它能让学生形成美的意识,并使这种意识逐渐加深。欣赏的越多学生对美的认知就会越深刻,不断地发扬美术的育人作用,促进学生认知能力的不断提高。美术欣赏课的主要目标就是要激发学生对美的追求,引导他们进行美的创造,培养学生的创造力和想象力。