孕酮对子宫蓄脓犬子宫内膜基质细胞增殖的影响

旨在研究子宫蓄脓对犬子宫内膜基质细胞(endometrial stromal cells,ESCs)增殖的影响及孕酮(progesterone,P_(4))的干预作用。收集健康犬和经腹部B超确诊患子宫蓄脓犬的子宫,采用胶原酶消化法分离ESCs,并通过细胞免疫荧光检测进行鉴定;采用CCK-8法检测培养不同时间后两种ESCs的细胞活力及孕酮作用的影响。结果显示,胶原酶消化法可分离获得高纯度的犬ESCs;将分离的ESCs培养24 h和48 h时,子宫蓄脓犬ESCs的细胞活力显著高于健康犬(P<0.01)。用0、5、15、30 ng/mL等不同浓度P_(4)处理两种ESCs,当作用24 h时,两种细胞的活力与相应的对照比均无显著变化(P>0.05);作用48 h时,30 ng/mL的P_(4)可显著促进健康犬ESCs的增殖(P<0.01),而对子宫蓄脓犬ESCs的增殖具有显著的抑制作用(P<0.05);作用72 h时,3种浓度P_(4)均显著促进健康犬ESCs的增殖(P<0.01),但对子宫蓄脓犬ESCs的增殖均无显著影响(P>0.05)。以上结果表明,子宫蓄脓犬ESCs的快速增殖可能与子宫内膜的囊性增生密切相关,P_(4)可促进健康犬ESCs的增殖,但在一定程度上抑制子宫蓄脓犬ESCs的增殖。

加减当归芍药汤对小鼠最大耐受量及组织病理学观察

为验证新型中药组方加减当归芍药汤的安全性及为新药临床应用提供合理依据,以小鼠为研究对象,进行最大耐受量试验。在预试验中将40只小鼠分为中药高(2.0g·mL^(-1))、中(1.0g·mL^(-1))、低(0.5g·mL^(-1))浓度及对照组4组,各剂量组小鼠每日灌服相同剂量中药,连续7d,测定LD50值。最大耐受量试验时将20只小鼠随机分为2组,试验组小鼠每日灌服高浓度药液3次,对照组灌服相同剂量蒸馏水,灌胃持续7d,观察小鼠行为及脏器病理学变化。结果表明:2组小鼠各脏器无眼观病变,脏器指数无显著差异。病理切片显示,2组小鼠心脏、脾脏及肾脏结构正常,无明显病变;试验组小鼠可见肝静脉周围肝细胞部分变性;部分肺泡充血。小鼠对该组方的最大耐受量为120g·kg^(-1)。这一研究提示,该中药组方日常用量内安全无毒,但在临床上以高浓度服用时应注意其肺毒性及肝毒性。

黄曲霉毒素B1研究进展

AFB1饲料污染以及动物AFB1中毒方面的研究已经成为国内外关注的科学问题,通过查阅文献就AFB1研究进展并且重点针对AFB1的危害和防控的基础性研究进行概述,并对今后益生菌在黄曲霉素中的研究方向进行探讨,以期望为目前霉菌由于缺乏特异性的临床防治的方法从而造成畜牧业重大经济损失的瓶颈性问题提供理论参考资料。

正交设计法优化黄芩苷微波提取工艺

为优化黄芩中黄芩苷的最佳微波提取工艺,试验采用正交设计法,以黄芩苷得率作为评价指标,研究了微波功率、料液比、微波时间3种因素对黄芩苷微波提取工艺的影响。结果表明,各因素对黄芩苷得率的影响从大到小依次为:料液比、微波功率、微波时间;黄芩苷微波提取工艺最佳条件为:微波功率为650 W、料液比为1∶10、微波时间为6 min,此条件下黄芩苷的得率为9.30%,含量为96.69%。优化的黄芩苷微波提取工艺稳定可行。

黄芩苷提取工艺的筛选

本研究比较了不同提取方法对黄芩中黄芩苷的提取效果,采用煎煮法、超声法与微波法提取了黄芩中的黄芩苷,通过分光光度计法测定了黄芩苷的含量,比较了3种提取方法的提取效果。结果表明,超声法、煎煮法与微波法提取的黄芩苷含量分别为95.24%、90.15%和86.95%;超声法、煎煮法与微波法提取的黄芩苷得率分别为10.55%、5.46%和4.89%。超声法提取的黄芩苷得率高于煎煮法与微波法,含量接近于黄芩苷标准品含量。

钙离子在内质网应激中的作用

内质网应激(ERS)是一种重要的细胞自我防御机制,内质网应激时,首先启动生存途径,但长时间的内质网应激将使细胞凋亡。钙离子(Ca^(2+))作为细胞内重要的第二信使,在细胞的各种生理及病理活动中发挥着重要作用,Ca^(2+)的稳态是细胞维持正常结构和功能的前提与基础。内质网是细胞中重要的钙库,当细胞受到外源性化合物作用时,内质网内Ca^(2+)代谢失衡,功能紊乱,导致内质网应激的发生。当细胞中Ca^(2+)耗竭,使得膜上Ca^(2+)通道打开,胞内钙池引发Ca^(2+)内流,使钙池再次充满。论文主要就内质网应激、内质网中钙离子的作用及钙池引发钙离子的内流进行概述,并展望了未来的研究方向,以期望为相关的研究提供参考。

正交试验优化黄芩中黄芩苷水提酸沉工艺

为了探索黄芩中黄芩苷水提酸沉的最佳工艺,采用正交试验,以黄芩苷得率作为考察指标,考察提取时间、混悬液醇浓度、酸沉pH值3种因素对黄芩苷水提酸沉工艺的影响。结果表明,黄芩苷水提酸沉工艺最佳条件为提取时间3 h、混悬液醇浓度30%、酸沉pH值2.0,此条件下黄芩苷提取物的得率可达9.758 8%。优化的黄芩苷最佳水提酸沉工艺操作简单、方法可行,为黄芩苷的工业化生产提供了理论参考。

四种中草药对奶牛酮病的影响

为了研究中草药对奶牛酮病治疗效果以及对奶牛泌乳性能的影响,本实验室选用甘草、陈皮、藿香、半枝莲为组方,于每天投料前对试验奶牛灌服中草药500 mL,并监测奶牛生产性能及血浆中酮体及葡萄糖含量。结果表明:与对照组相比较,灌服中草药的奶牛泌乳量显著升高,β-羟丁酸含量降低,繁殖性能差异不显著(P>0.05),中剂量组、高剂量试验组降低酮体效果最好(P<0.05)。表明这四味中草药对提高围产期奶牛的产奶量,对降低奶牛血酮有良好效果。

基于HPLC-MS/MS技术的酮病奶牛血清脂质代谢物分析

对25头荷斯坦奶牛进行初次筛选,包含13头疑似酮病和12头疑似健康奶牛。依据临床症状和血液酮体浓度将其分为临床型酮病组(血液中BHBA≥3.0mmol/L,NEFA>0.5mmol/L,且表现消瘦、食欲减退)及健康组(血液中BHBA<1.2mmol/L,NEFA<0.4mmol/L,临床检查无异常表现)。选取胎次相近、产奶量和体况相似的临床型酮病奶牛、健康奶牛各5头。采集奶牛全血到促凝管中,使用高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)检测酮病奶牛血清中的异常脂质分子。选取P<0.05,VIP>1的脂质分子。结果显示:共筛选出18个与酮病相关的差异代谢物,与健康组相比,酮病组其中有5种磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)、4种胆固醇酯(cholesterol esters,CE)、2种鞘磷脂(sphingomyelin,SM)、2种溶血磷脂酰胆碱(lyso-phosphatidyl choline,LPC)、2种甘油三酯(triglyceride,TAG)降低;有3种游离脂肪酸(free fat acid,FFA)升高。结果表明,这些异常的脂质可能是酮病奶牛的新型标志物。

β-羟基丁酸通过激活TLR4/NF-κB通路诱导奶牛乳腺上皮细胞炎性反应

旨在探究Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核转录因子kappaB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)通路在β-羟基丁酸(β-hydroxybutyrate,BHBA)诱导奶牛乳腺上皮细胞炎性反应的分子作用机制。通过添加不同浓度的BHBA诱导奶牛乳腺上皮细胞MAC-T以模拟奶牛高酮血症中乳腺上皮细胞的炎性反应,并利用RNAi技术将TLR4-siRNA转染细胞42 h后加入3.6 mmol/L BHBA再处理24 h;通过RT-qPCR检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1beta,IL-1β)和IL-6等炎性因子的表达变化,并采用Western blot法测定TLR4/NF-κB通路关键蛋白的相对表达水平。结果表明,与对照组相比,不同浓度BHBA处理后,乳腺上皮细胞中TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA水平升高,当BHBA浓度为1.2 mmol/L或以上时,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值和TRAF6蛋白水平显著升高,浓度为2.4 mmol/L或以上时,TLR4和MyD88蛋白表达量显著升高。此外,与Control siRNA+BHBA组相比,TLR4 siRNA+BHBA组的MAC-T细胞中的TLR4、MyD88和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平显著降低,TNF-α、IL-1β和IL-6的基因表达水平显著降低。以上结果表明,BHBA可通过激活TLR4/NF-κB信号通路促进炎症因子的转录,诱导乳腺上皮细胞的炎性反应,下调TLR4可减轻BHBA诱导的乳腺上皮细胞炎性损伤。

成纤维细胞生长因子21(FGF21)对非酒精性脂肪肝小鼠血液TNF-α及IL-1β的影响

为了观察成纤维细胞生长因子21（FGF21）对高脂肪饲料诱导的非酒精性脂肪肝小鼠肝脏肿瘤坏死因子（TNF-α）及白细胞介素1β（IL-1β）的影响。本试验采用高脂肪饲料喂养昆明小鼠30d,建立非酒精性脂肪肝模型。将小鼠分为4组,A：模型＋FGF21组;B：模型组;C：正常＋FGF21组;D：正常组。A和C组分别连续给药6d,B和D两组注射等量的生理盐水,给药后眼球采血,采集血液样品,断颈处死小鼠,分离肝脏和脾脏组织,通过组织切片染色、血清生化及ELISA检测,观察FGF21对肝脏组织病理学、血清中TNF-α及IL-1β的影响。结果显示非酒精性脂肪肝小鼠经过FGF21治疗后,血清中TG、TC、NEFA、LDL-c含量显著降低,ELISA结果显示血清中TNF-α、IL-1β的表达与模型组比较都显著降低（P〈0.05）。结果表明FGF21明显改善高脂肪饲料诱导的非酒精性脂肪肝的病理变化。同时,降低脂肪肝组织脂肪变形引起的血液中TNF-α、IL-1β的表达,表明FGF21对非酒精性脂肪肝小鼠有潜在的治疗作用。

加减补中益气汤对小鼠半数致死量及其最大耐受量下的毒理学观察

为了进一步验证新型中药组方加减补中益气汤的安全性,进行小鼠半数致死量(LD(50))和最大耐受量试验。在测定LD_(50)试验中将40只小鼠分为中药高、中、低剂量组及对照组4组,中药组每日灌服等量的对应浓度的中药,对照组灌服相同剂量纯化水,连续7d,测定LD(50)。在最大耐受量试验中将20只小鼠随机分为两组,试验组每日3次灌服高浓度药液,对照组灌服相同剂量纯化水,连续7d。记录小鼠行为变化,计算心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏的脏器指数,并观察小鼠脏器病理学改变。结果表明:在LD_(50)试验中,灌服各浓度中药均未导致小鼠死亡。在最大耐受量试验中,灌胃后两组小鼠行为、精神状态、采食量等无明显差异;解剖未见各脏器病变,小鼠心脏指数、肺脏指数及肾脏指数两组间差异不显著(P>0.05),肝脏指数差异极显著(P<0.01),脾脏指数差异显著(P<0.05);病理切片显示两组小鼠各脏器结构均正常,无明显病变;小鼠对加减补中益气汤耐受量为2.4g,为成人日常用量的240倍。说明该组方在日常服用剂量内对小鼠安全无毒,但在临床中若以极高剂量使用时应注意对肝脏、脾脏的影响。

正交试验优化黄芩中黄芩苷超声提取工艺

为了优化黄芩苷最佳超声提取工艺,试验采用正交试验设计,以黄芩苷得率作为考察指标,研究了料液比、超声功率、乙醇浓度、p H值4种因素对黄芩苷超声提取工艺的影响。结果表明:各因素对黄芩苷得率的影响从大到小依次为乙醇浓度、料液比、p H值、超声功率;黄芩苷超声提取工艺最佳条件为,乙醇浓度为55%,料液比为1∶18,p H值为4.0,超声功率为59 k Hz,在此条件下黄芩苷提取物的得率可达16.52%。说明优化出的黄芩苷超声工艺稳定、可行,具有良好的提取效果。

黄曲霉毒素B1干预对小鼠生长状况及肝脏变化的影响

为了研究黄曲霉毒素B1（AFB1）对小鼠生长状况及肝脏变化的影响,试验将30只健康雄性昆明小鼠随机分为3组,每组10只。毒素组小鼠经口灌服AFB1溶液（按体重300μg/kg）,空白对照组和溶剂对照组小鼠分别经口灌服相同体积的生理盐水和DMSO溶液（按体重300μL/kg）,试验期为8周,观察小鼠AFB1中毒时的临床症状及剖检后的肝脏变化,同时记录小鼠体重并计算肝脏指数。结果表明：给小鼠灌服AFB1,小鼠体重下降,除3周龄外,其余周龄与空白对照组相比均显著下降（P〈0. 05）。肝脏肿大,肝脏指数升高,但与空白对照组和溶剂对照组相比差异不显著（P〉0. 05）。说明AFB1影响小鼠生长发育,可引起肝脏损伤。

NFκB-Orai1参与NEFA诱导的内质网应激

为探究NFκB-Orai1是否参与游离脂肪酸(NEFA)诱导的内质网应激,首先通过体外添加一定浓度的非酯化脂肪酸(nonestesterifiedfatty acid,NEFAs)(1.2 mmol/L)处理大鼠肝细胞不同时间,运用Western blot和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法,测定NEFAs对内质网应激(ER stress)标志分子GRP78表达量以及钙通道相关蛋白Orai1表达水平的影响。结果显示NEFAs处理12 h时GRP78、Orai1表达量极显著高于对照组(P<0.01),证明12 h NEFAs刺激诱导产生内质网应激效果最佳。而后又通过分别添加NFκB抑制剂wogonin与Orai1抑制剂2APB,结果显示抑制NFκB和Orai1后NEFAs刺激可明显降低GRP78、NFκB p65、Orai1的表达水平。结果表明NFκB-Orai1参与NEFA诱导的内质网应激。

广藿香水提液对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化和改善胰岛素抵抗的作用

本研究旨在探讨藿香(Pogostemon cablin,PC)水提取物在促进脂肪细胞分化和改善脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)中的作用。于诱导分化第1天,在3T3-L1前脂肪细胞培养板中加入不同质量浓度PC水提液(0.5,1.0,2.5,5.0 g/L),第8天,采用油红O染色和染色比色法对3T3-L1脂肪细胞的脂质沉积进行观察和分析,通过ELISA检测细胞内甘油三酯(triglyceride,TG)水平,Western blot测定过氧化物酶体增殖物激活的受体γ-2(peroxisome proliferator-activated receptor-γ2,PPARγ2)蛋白表达情况,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法分析PC对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法检测分化成熟的脂肪细胞的葡萄糖消耗情况。结果表明,PC水提液能抑制3T3-L1脂肪细胞的增殖(P<0.01),并促进细胞向成熟脂肪细胞分化(P<0.05)。随着PC质量浓度的增加,3T3-L1前脂肪细胞内脂质沉积逐渐增加,TG水平逐渐上升(P<0.05)。与诱导分化组比较,PC水提液组(1.0,2.5 g/L)PPARγ2蛋白表达显著上升(P<0.05)。与成熟3T3-L1脂肪细胞IR组对比发现,PC能极显著促进成熟脂肪细胞的葡萄糖消耗(P<0.01),改善IR。结果表明,PC可抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖并促进其分化,促进细胞内脂滴的积累并调节糖脂代谢,从而改善IR。