不同保存时间人羊膜来源的间充质干细胞增殖能力比较

背景：以往利用羊膜提取间充质干细胞的研究多将注意力放在新鲜的羊膜标本上，由于地域和时间的限制，对羊膜进行保存是必须面对的实际问题。目的：实验拟比较从不同保存时间人羊膜标本中分离培养的羊膜间充质干细胞的增殖能力。设计、时间及地点：体外进行的细胞对照观察，于2007—01／200802在郑州大学医学院和生物工程系完成。材料：正常剖宫产的健康产妇志愿捐献的羊膜12份，孕38周，检测乙肝5项、HCV、HIV、梅毒等其他相关传染性指标均呈阴性。方法；无菌条件下将每份新鲜完整的羊膜平均分成3组，即新鲜1h组、4℃放置24～36h组、4℃放置48～60h组。将3组标本剪碎，胰蛋白酶-胶原酶联合消化，过滤后收集单细胞悬液，以2×10^8L^-1密度接种，加入含胎牛血清和碱性成纤维细胞生长因子的DMEM／F12培养基，贴壁法纯化扩增细胞。主要观察指标：倒置显微镜下观察细胞形态，绘制生长曲线。取第3代细胞进行免疫组织化学检测和流式细胞仪鉴定。结果：①3组标本消化后都含有多种单个细胞成分，呈圆形、菱形、短梭形、多角形，细胞折光性良好，此外还有多个上皮细胞聚集所成的细胞团。接种后1-3d各组细胞均为潜伏期：4～7d新鲜1h组与4℃放置24～36h组进入对数生长期，细胞增殖活跃，细胞数目呈指数级递增，4℃放置48～60h组仍处于潜伏期；7d后前两组细胞已铺满瓶底，4℃放置48～60h组刚开始指数级递增。②各组细胞神经元烯醇化酶、神经丝蛋白、巢蛋白均呈阳性表达，胶质纤维酸性蛋白呈阴性。各组细胞CD29，CD44均呈阳性表达。结论：保存时间在60h内的人羊膜都可以分离出具有增殖能力的间充质干细胞，但36h内的羊膜标本所分离的间充质干细胞具有较快的增殖能力。

参数已知下比例函数线性模型的平均估计

讨论参数已知下比例函数系数模型的平均估计,使用局部线性方法得到了初始估计,在此基础上用平均方法定义平均估计,进一步研究了平均估计的渐近正态性.

独立同分布环境中配对依人口数两性分支过程L^1收敛

考虑了随机环境中配对依人口数两性分枝过程模型,并且得到了独立同分布环境配对依人口数两性分枝过程{Zn}对应的过程{Wn}的L1收敛的充分条件.

参数已知下比例函数线性模型的积分估计

研究比例函数系数模型的积分估计,首先用局部线性方法得到了初始估计,在此基础上用积分方法定义积分估计,进一步研究了积分估计的渐近正态性.

丙戊酸钠不同给药途径预防蛛网膜下腔出血后癫临床分析

自发性蛛网膜下腔出血（SAH）主要为脑动脉瘤所致，近年来发病率有逐渐上升的趋势。SAH继发癫痫发作并不少见，部分病例以癫痫首发或是早期的主要临床表现，文献报道的SAH继发癫痫发作的发病率波动在9％～20％之间。SAH后癫痫可加重病情，对患者预后造成严重影响，导致患者病死率、致残率升高。丙戊酸钠逐渐成为目前临床应用广泛的一线广谱抗癫痫药，

参数已知下比例函数系数线性模型的局部多项式估计

比例函数系数模型在统计中有很广泛的应用,文中对该模型使用局部多项式方法进行估计,给出了函数系数的估计及其渐近正态性。

独立同分布环境中上临界配对依人口数两性分支过程

本文考虑的是独立同分布随机环境上临界配对依人口数两性分枝过程,得到了该过程的灭绝概率的渐近上、下界.

量子点标记神经生长因子纳米化颗粒修饰羊膜间充质干细胞移植治疗大鼠实验性脑损伤

目的：量子点是由Ⅱ-Ⅵ族元素或Ⅲ-V族元素组成的纳米颗粒,因三维上受到量子限制而表现出独特的光学特征,其标记的神经生长因子纳米化颗粒由于是纳米级,易通过细胞生物膜。实验观察负载此纳米颗粒的羊膜间充质干细胞移植治疗大鼠脑损伤的效果。方法：实验于2007-01/10在郑州大学完成。①材料：SPF级健康成年Wistar大鼠40只,按体质量编号分为4组：神经生长因子细胞组、常规细胞组、损伤模型组、培养基对照组,10只/组,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。羊膜间充质干细胞来自健康产妇胎盘羊膜,产妇对实验知情同意,实验经医院医学伦理委员会批准。量子点神经生长因子纳米粒由兰州大学功能有机分子化学国家重点实验室协助构建。②实验方法：向羊膜间充质干细胞中加入含10%胎牛血清、20μg/L碱性成纤维生长因子的DMEM/F12培养基,置于37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养箱中培养,待细胞达80%～90%融合时胰酶消化传代。取传至第3代细胞,分别加入终浓度为20,40,60μg/L的量子点标记神经生长因子纳米粒进行修饰处理72h,并设立空白对照和空载量子点对照。4组大鼠均采用Feeney自由落体法建立脑损伤模型,神经生长因子细胞组于大鼠损伤部位注入经40mg/L量子点标记神经生长因子纳米粒修饰的羊膜间充质干细胞悬液10μL（约4.0×10^8个细胞）,常规细胞组注入等量单纯量子点标记的羊膜间充质干细胞悬液,培养基对照组注入等量DMEM/F12细胞培养基,损伤模型组不给予移植操作。③实验评估：经量子点标记的神经生长因子纳米粒修饰后,MTT法检测细胞活性,荧光显微镜观察量子点在细胞内的分布,免疫细胞化学鉴定细胞分化。细胞移植后对各组大鼠运动及感觉功能进行评分,免疫组织化学染色及荧光显微镜观察量子点荧光化羊膜间充质干细胞在脑内存活分化和迁移情况。结果：①细胞生长率：培养72h后与空白对照和空载量子点对照细胞比较,20,40,60μg/L量子点标记的神经生长因子纳米粒组细胞生长率均呈增长趋势,40μg/L时细胞无明显生长抑制,达60μg/L时增长有所减慢。②体外量子点分布：荧光显微镜连续观察羊膜间充质干细胞,约6h后开始摄入量子点标记的神经生长因子纳米粒,随着时间延长摄入量逐渐增加,于32h荧光强度达高峰。③体外免疫细胞化学鉴定：经量子点神经生长因子纳米粒修饰的羊膜间充质干细胞表达神经元烯醇化酶和神经丝蛋白,向神经元方向分化,但不表达胶质纤维酸性蛋白。④神经行为学检测结果：细胞移植后24h,各组神经行为学各项指标评分均基本相似（P〉0.05）;移植后10,20d,损伤模型组与培养基对照组无明显变化,神经生长因子细胞组、常规细胞组运动及感觉功能各项评分均显著降低（P〈0.05）,且神经生长因子细胞组下降幅度明显强于常规细胞组（P〈0.05）。⑤免疫组织化学和荧光检测结果：经量子点神经生长因子纳米粒修饰的羊膜间充质干细胞在脑组织损伤区存活,并向周围迁移。结论：量子点是一种较好的细胞示踪剂,负载其标记的神经生长因子纳米化颗粒的羊膜间充质干细胞移植能够改善脑损伤大鼠神经功能。

不同冻存液对人羊膜间充质干细胞-80℃冻存与复苏效果的影响

目的:观察不同冻存液对人羊膜间充质干细胞冻存复苏后的存活率及再培养情况的影响,并探索简单有效的冻存与复苏方法。方法:将含有血清培养基短期体外培养的人羊膜间充质干细胞分为4组,分别加入不同冻存液(体积分数):A组10%二甲基亚砜+40%胎牛血清+50%DMEM/F12,B组10%二甲基亚砜+90%胎牛血清,C组5%二甲基亚砜+4.5%羟乙基淀粉+20%胎牛血清+70.5%DMEM/F12,D组10%胎牛血清+90%DMEM/F12。以相同方法冻存并复苏细胞,比较4组细胞回收率及再培养情况。结果:A、C2组细胞复苏后回收率高于另外2组(P均<0.05),且于复苏后再培养24h内出现较多贴壁细胞。结论:以5%二甲基亚砜+4.5%羟乙基淀粉+20%胎牛血清+70.5%DMEM/F12作冻存液冻存羊膜间充质干细胞效果好。

基于生产侧和消费侧的京津冀地区电力工业CO2排放因素分解分析

基于消费者责任原则计算京津冀地区电力工业的CO2排放量,利用对数平均迪氏指数分解法(LMDI)分析2001-2016年京津冀地区电力工业CO2排放生产侧和消费侧九个影响因素的贡献值和贡献率,认为发电量效应、碳强度效应、人均GDP效应和人口规模效应是京津冀地区电力工业CO2排放量增长的主要促进因素;电力生产结构效应、化石能源转换效率和用电效率效应是主要抑制因素;发电量效应、化石能源转换效率和人均GDP是造成三地电力工业CO2排放差异的主要因素。

京津冀地区电力部门CO2排放因素分解分析

基于LMDI(Logarithmic Mean Divisia Index Method)方法分析2001-2016年京津冀地区电力部门CO2排放的8个影响因素,考虑了京津冀地区电力部门从生产投入、转换、传输到消费的整个过程;并分析了2001-2016年影响京、津、冀各地区CO2排放的各因素贡献值。结果表明,1)2001-2016年京津冀地区电力部门CO2排放总体呈现递增趋势,2012年出现负增长;河北省电力部门对京津冀电力部门CO2排放贡献最大,2001-2016年累计CO2排放变化量为145.70 Mt,但河北省电力部门的减排潜力巨大;2)人均GDP效应和人口规模效应是促进京津冀地区电力部门CO2排放增长的主要因素,2001-2016年累计贡献值分别为261.86 Mt和36.47 Mt;3)用电效率效应和电力输入输出效应是京津冀地区电力部门CO2排放量增长的主要抑制作用,2001-2016年累计贡献值分别为-49.40 Mt和-47.93 Mt;4)造成京、津、冀电力部门CO2排放差异的主要因素是人均GDP、化石能源转换效率和用电效率。

Fe3O4纳米化颗粒标记人羊膜间充质干细胞的合适条件

目的:Fe3O4纳米化颗粒是近来发现的活体示踪剂,由于其毒性可导致标记细胞死亡,寻找合适的浓度进行细胞标记已成为活体示踪的关键。实验以人羊膜间充质干细胞作为靶点,探讨Fe3O4纳米化颗粒标记的合适条件。方法:实验于2007-08在郑州大学完成。①细胞来源及颗粒:人羊膜间充质干细胞由郑州大学第一临床医学院神经外科杨波教授自健康产妇胎盘羊膜中提取,产妇对实验知情同意,实验经医院医学伦理委员会批准。Fe3O4纳米颗粒由美国Sigma公司生产,商品名:菲立磁,批号094k0788。转染剂多聚左旋赖氨酸购自大连宝生生物公司,批号033K4351。②实验方法:向人羊膜间充质干细胞加入含10%胎牛血清、20μg/L碱性成纤维生长因子的DMEM/F12培养基,置于37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养箱中培养,待细胞达80%～90%融合时胰酶消化传代。取传至第3代的细胞,放入含DMEM/F12培养基的10mL培养瓶中,密度调整为1×109L-1。设立3组:单纯Fe3O4组分为4个亚组,即向培养基中分别加入终浓度为20,30,40,80mg/L的Fe3O4纳米颗粒;Fe3O4+多聚左旋赖氨酸组分为4个亚组,即向培养基中分别加入上述终浓度Fe3O4纳米颗粒后,再加入1.5mg/L多聚左旋赖氨酸;培养基对照组,仅加入DMEM/F12培养基。各组细胞标记12h后,均更换为DMEM/F12培养基培养3周。③实验评估:分别于标记后12h、36h、1周和3周,普鲁士蓝染色检测Fe3O4纳米颗粒进入细胞情况,锥虫蓝染色检测细胞活性。结果:①Fe3O4纳米颗粒标记人羊膜间充质干细胞的效果:终浓度为20mg/L的Fe3O4纳米颗粒细胞标记率为60%,终浓度为30,40,80mg/L的Fe3O4纳米颗粒细胞标记率均为100%。单纯Fe3O4组可见少量蓝染的Fe3O4纳米化颗粒分散于细胞浆内,Fe3O4+多聚左旋赖氨酸组蓝染颗粒明显增多,部分聚集成团。②标记后细胞活性测定:与培养基对照组比较,当Fe3O4终浓度为20,30mg/L时,单纯Fe3O4组、Fe3O4+多聚左旋赖氨酸组细胞活性均无明显变化(P>0.05);当Fe3O4终浓度升高至40,80mg/L时,上述2组细胞活性均显著降低(P<0.05)。结论:①与多聚左旋赖氨酸混合,能够使进入细胞内的Fe3O4纳米颗粒增多,从而加强细胞标记效果。②30mg/LFe3O4纳米颗粒细胞标记率可达100%,且该浓度不影响人羊膜间充质干细胞的生物活性。③30mg/LFe3O4纳米颗粒联合多聚左旋赖氨酸是标记人羊膜间充质干细胞的合适条件。

不同途径羊膜间充质干细胞移植治疗大鼠脑外伤

目的:通过不同途径移植羊膜间充质干细胞治疗脑损伤大鼠,比较脑损伤大鼠行为学的改善,为脑损伤治疗选择有效的移植途径。方法:制作80只Wistar大鼠脑损伤模型,分为对照组与治疗组。对照组为单纯脑损伤大鼠,共20只;治疗组分为尾静脉移植组(A组)、侧脑室移植组(B组)、脑损伤区移植组(C组),每组20只,均给与植入人羊膜间充质干细胞,采用NSS评分法评定治疗效果。结果:脑损伤区移植组大鼠行为学改善与其他各组相比,差异有统计学意义(P<0.05);侧脑室移植组分别与尾静脉移植组及对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);而尾静脉移植组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:脑损伤区移植羊膜间充质干细胞是治疗脑损伤大鼠的有效途径。

3D-Slicer辅助在高血压基底节区脑出血钻孔引流术中的使用价值

高血压脑出血常发生于50~70岁的男性,目前常用的清除血肿方式有开颅血肿清除术、钻孔扩大骨窗血肿清除术、钻孔微创颅内血肿清除术、脑室出血脑室引流术,其中钻孔引流术因其骨窗小、术中脑组织损伤小而成为临床医生常用手术方式之一。为探讨更精确的血肿定位,本研究分析了高血压脑出血患者术前行3D-Slicer精准定位联合钻孔引流术的治疗及效果,报道如下。

USP9X和β-catenin蛋白在高级别胶质瘤中的表达与临床病理特征分析

目的研究USP9X/β-catenin在高级别胶质瘤中的表达,分析USP9X/β-catenin的表达与患者临床病理特征和生存期之间的关系。方法连续收集病理科存档的高级别胶质瘤组织标本(WHOⅢ~Ⅳ级),随访日期截止于2015年1月。免疫组化检测高级别胶质瘤组织USP9X/β-catenin蛋白的表达,分析USP9X在不同性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤分级的患者中的表达情况。单因素和多因素生存分析影响患者预后的各种预后因子。结果 54例高级别胶质瘤患者中,USP9X阳性患者26例,阳性表达率48.1%。β-catenin阳性患者25例,阳性表达率46.3%。不同年龄(P=0.777)、性别(P=0.783)、分化程度(P=0.793)、肿瘤大小(P=0.155)的胶质瘤患者中USP9表达率差异无统计学意义。但生存期小于1年的高级别胶质瘤患者中USP9X的表达明显高于生存期大于1年的患者。Kaplan-Meier单因素生存分析提示USP9X表达状况(P=0.001)、术后放射治疗(P=0.033)、肿瘤大小(P=0.049)是影响高级别胶质瘤患者预后的因素。COX风险模型多因素分析提示USP9X表达状况是影响高级别胶质瘤患者预后的独立因子。结论去泛素化酶USP9X在高级别胶质瘤中的表达与患者年龄、性别、肿瘤分级、肿瘤大小无关,与患者生存期的长短呈负相关。USP9X表达较弱、术后接受放射治疗、肿瘤较小的高级别胶质瘤患者的生存期较长。在所有与高级别胶质瘤患者预后相关的因素中,去泛素化酶USP9X的表达状况是影响高级别胶质瘤患者预后的独立因子。

普罗布考对非对称性二甲基精氨酸诱导的人脑微血管内皮细胞凋亡的作用

目的:探讨普罗布考对非对称性二甲基精氨酸(ADMA)诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMEC)凋亡的保护作用。方法:取HBMEC分为不同的处理组。①治疗组:加入30μmol/L ADMA及普罗布考,其中普罗布考又分为10^-8、10^-7、10^-6、10^-5 mol/L 4个剂量。②ADMA组:仅加入30μmol/L ADMA。③普罗布考组:仅加入10^-5 mol/L普罗布考。④对照组:不加药物。分别采用MTT法检测细胞活性,比色法测定LDH释放量,ELISA法测定BDNF。另取HBMEC分为对照组、ADMA组、ADMA+普罗布考组、普罗布考组,ADMA剂量30μmol/L,普罗布考剂量10^-5 mol/L。分别采用比色法测定Caspase-3蛋白活性,ELISA法测定MDA,DCFH-DA法测定ROS,RT-PCR法测定bax、bcl-2、eNOS mRNA表达水平。结果:与对照组相比,ADMA组LDH释放量升高,细胞活性和BDNF降低(P<0.05);与ADMA组相比,各ADMA+普罗布考组LDH释放量降低,细胞活性和BDNF升高(P<0.05)。析因分析可知ADMA主效应使MDA、ROS释放量、bax mRNA表达、Caspase-3蛋白活性升高,bcl-2、eNOS mRNA表达降低,且ADMA与普罗布考存在交互作用(P<0.001)。结论:普罗布考能有效对抗ADMA诱导的HBMEC损伤。

神经电生理监测在三叉神经痛微血管减压术中的价值

目的评价三叉神经痛微血管减压术中应用神经电生理监测的价值。方法回顾性分析2013-09—2017-03郑州大学第二附属医院院神经外科152例行微血管减压术治疗的原发性三叉神经痛患者的临床资料,以术中使用TSEP、BAEP监测的110例患者为观察组,未使用神经电生理监测的42例患者为对照组,对比分析2组有效率(含显效、好转)以及面瘫、眩晕、面部麻木及听力下降等并发症的发生情况。结果观察组术后有效率94.5%(104例),出现眩晕3例(3%);对照组术后有效率76.2%(32例),出现眩晕10例(23.8%),听力下降2例(4.8%),面部麻木5例(11.9%),面瘫1例(2.4%)。2组术后疗效及并发症发生率差异均有统计学意义(P<0.05)。结论术中神经电生理监测可有效对术者实时预警,避免脑神经损伤,保障微血管减压术的效果,同时减少术后并发症。

肿瘤坏死因子-α表达与脑出血患者神经细胞凋亡的相关性研究

目的探讨脑出血患者炎性因子表达与细胞凋亡的关系。方法选取脑出血患者48例,登记临床资料并检测血肿周围脑组织TNF-α的不同时间段的表达。测定TNF-α表达:(1)Western Blot法;(2)免疫组化法。测定细胞凋亡:TUNEL法。结果 TNF-α的表达高峰期为0~24h、13~48h,TUNEL法测定神经细胞凋亡高峰期为13~48h,表明脑出血后神经细胞凋亡与TNF-α的表达高峰完全一致,存在时间变化规律一致性。以凋亡细胞数为纵轴,TNF-α表达阳性细胞数为横轴制作散点图。胞质TNF-α阳性细胞数与凋亡细胞数相关系数r为0.954,呈明显正相关。结论脑出血患者血肿周围脑组织TNF-α表达水平与神经细胞凋亡数一致。

椎管内脓肿的诊断与显微外科治疗

目的总结椎管内脓肿的诊断与显微外科治疗。方法回顾性分析11例椎管内脓肿的临床资料:根据病史、临床表现结合MRI明确诊断,采用手术及早切除病变部位椎板,清除脓液及坏死组织。结果本组随访11例,优8例(72.7%),良2例(18.2%),可1例(9.1%);优良率90.9%。结论对于椎管内脓肿,应结合病史及临床表现,早期诊断并及时手术。

微电极引导立体定向脑内核团毁损术治疗帕金森病临床观察

目的研究微电极引导下立体定向核团毁损术治疗帕金森病的临床效果分析。方法我院106例微创外科手术治疗帕金森病患者的临床资料,显效(含显效及特别显效)90例(84.9%),有效16例(15.1%),总有效率100%。分别获得微创治疗术前、术后不同服药状态下帕金森病联合评分量表(UPDRS)的评分,比较微创手术治疗前后UPDRS运动评分之间的差异。结果颅内核团毁损术在术后3个月、6个月及1a的随访中均能有效改善帕金森患者术后UPDRS运动评分,同时患者术后口服抗帕金森病类药物用量较术前可见不同程度的减少。结论微电极引导立体定向脑内核团毁损治疗帕金森病疗效满意,能显著改善帕金森病患者的UPDRS运动评分,精确定位是手术成功的关键,微电极记录可提高手术的准确性。