56例肾淀粉样变性的病理分型及临床分析

目的分析肾淀粉样变性的组织学特点及临床表现,提高对该病的诊断水平。方法回顾性分析复旦大学基础医学院病理学系2007年1月至2016年7月肾活检病例中确诊的56例肾淀粉样变性,经免疫染色检测肾组织中免疫球蛋白轻链κ、λ及淀粉样蛋白A(amyloid A,AA)的表达,并分析病理形态学特点及临床表现。结果56例肾淀粉样变性的发病年龄为(58.6±9.3)岁,高峰年龄段为50~69岁。42例(75.0%)临床表现为肾病综合征,10例(17.9%)伴2个或以上多器官淀粉样物质沉积。刚果红染色、偏振光显微镜及电镜检查显示淀粉样物广泛沉积于肾小球、肾小管基膜、间质及血管壁,肾小球重度沉积者24 h尿蛋白定量显著高于轻度沉积者。43例(76.8%)为AL型(36例ALλ型、7例ALκ型),3例(5.4%)为AA型,其余10例(17.9%)免疫染色均为阴性。46例确定分型的病例中,免疫染色显示多种免疫球蛋白及补体轻度沉积于各型尤其ALλ型,电镜下多未发现电子致密物沉积,提示为非特异性沉积。电镜检查显著提高早期病变的检出率。结论ALλ型是本组肾淀粉样变性最常见的病理类型;电镜检查可显著提高其早期病变的确诊率;应常规应用免疫染色确定前体蛋白类型,必要时应进行质谱分析。

Notch3在非肿瘤性肾病中作用机制的研究进展

Notch受体属于表皮细胞生长因子样家族的跨膜蛋白,广泛表达于细胞表面且呈高度保守,其与相邻细胞的配体相结合后参与多种细胞生命活动及器官发育。其中,Notch3受体在多种肾小球疾病、肾小管-间质疾病以及肾小球硬化或肾纤维化过程中呈显著活化,通过经典或非经典信号通路参与疾病的发生与发展。

Rac1及Cdc42在肾上腺髓质肽(AM)缓解嘌呤霉素氨基核苷(PAN)所诱导足细胞损伤中作用机制的初步探讨

目的观察肾上腺髓质肽(adrenomedullin,AM)对嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)所诱导受损足细胞的作用以及Rac1/Cdc42表达变化,初步探讨其可能机制。方法将小鼠肾足细胞株分为对照组、PAN处理组(100μg/mL)、PAN联合AM处理组(10-7mol/L)及PAN联合AM和蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89(10-6mol/L)处理组。经一次性腹腔注射PAN(150 mg/kg)建立大鼠足细胞损伤模型,每天经尾静脉注射AM蛋白(66μg/kg)进行干预。SDS-PAGE法检测尿蛋白水平,电镜观察足细胞足突宽度变化,双重免疫荧光染色及/或Western blot观察足细胞特异性骨架蛋白(synaptopodin、nephrin)、Rac1及Cdc42的蛋白表达水平,实时定量PCR(qRT-PCR)检测synaptopodin、nephrin的mRNA表达,谷胱甘肽巯基转移酶-拉下实验(GST-pull down assay)法检测Rac1及Cdc42活性变化。结果PAN在体内、外均显著降低synaptopodin、nephrin的蛋白或/及mRNA表达水平,且显著升高desmin表达;大鼠PAN肾病模型的尿蛋白水平显著升高,足突宽度显著增加;PAN显著降低Rac1、Cdc42总蛋白及活性水平。上述由PAN所介导的效应被AM显著抑制;H89显著阻断AM的体外作用。结论AM主要通过PKA通路促进受损足细胞的修复,该保护机制与AM调控Rac1/Cdc42表达密切相关。

核糖核酸的m6A甲基化水平及主要甲基化调控酶在糖尿病肾病足细胞损伤中的表达和作用

目的明确糖尿病肾病(DN)足细胞损伤中RNA m6A甲基化修饰的改变,探索可能起主要调控作用的甲基化修饰酶。方法2型DN db/db小鼠(DN组)和非DN db/m小鼠(对照组),每组各6只饲养至32周后提取肾小球。采用比色法检测各组小鼠肾小球RNA m6A甲基化水平,RT-PCR检测小鼠肾小球中主要甲基化调控酶(METTL3、METTL14、WTAP、FTO和ALKBH5)的表达,采用免疫组织化学(简称免疫组化)法观察甲基转移酶METTL14在各组小鼠肾组织的表达。选取微小病变(MCD)和DN患者肾穿刺和肾癌患者癌旁健康肾组织标本,采用免疫组化法检测METTL14和WT1在各组组织中的表达。采用免疫印迹RT-PCR和免疫印迹检测体外梯度浓度高糖(25、35 mmol/L)或AGE(25、50、100μmol/L)刺激的人足细胞内METTL14的mRNA和蛋白质相对表达量。采用免疫荧光明确METTL14在50μmol/L的AGE处理下的人足细胞中的表达和定位。体外应用METTL14小干扰RNA处理人足细胞并予AGE刺激24 h。采用免疫印迹检测法检测各组足细胞内METTL14和凋亡蛋白表达,RT-PCR检测各组足细胞趋化因子和炎症因子的mRNA水平。结果与对照组比较,DN组小鼠肾小球中RNA的m6A甲基化水平显著增加;DN组小鼠肾小球中甲基转移酶METTL3、METTL14及去甲基化酶FTO的mRNA和蛋白质相对表达量升高,其中METTL14增高最为显著(P值均<0.05)。与健康对照者比较,DN患者肾穿刺样本中足细胞标志物WT1显著减少,METTL14的阳性数目显著增多并定位于细胞核(P值均<0.001)。体外35 mmol/L高糖和50μmol/L AGE刺激显著促进人足细胞内METTL14 mRNA和蛋白质相对表达量(P值均<0.01)。体外转染METTL14小干扰RNA显著抑制了AGE刺激后的人足细胞内METTL14蛋白表达的上调和足细胞凋亡,减轻AGE诱导的人足细胞内趋化因子MCP-1、炎症因子IL-6、TNF-αmRNA水平的增加。结论METTL14可能是介导DN肾小球中RNA的m6A甲基化修饰的关键调控酶。敲除足细胞METTL14可通过减轻足细胞的凋亡和炎症发挥对DN损伤足细胞的保护作用。

伴有法布里病样变的IgA肾病一例

肾小球足细胞胞质内大量髓样小体是法布里病(Fabry disease)的标志性病理表现。上述病变由非基因突变引发时往往被称为法布里病样变(Fabry disease-like changes)。既往有关于羟氯喹、氯喹及胺碘酮等药物引发法布里病样变的报道。本文将报告1例IgA肾病伴有法布里病样变的患者,经血管紧张素受体阻断剂(ARB)及中药汤剂治疗后,尿蛋白明显减少,肾功能稳定。