上皮钙黏蛋白表达与喉癌淋巴结转移和预后的关系

目的检测上皮钙黏蛋白(E-cadherin)在喉癌组织中的表达及其与喉癌临床病理特征、预后的关系,探讨其在喉癌发生、发展中的作用及临床应用价值。方法采用免疫组化方法检测64例喉癌组织和30例癌旁非肿瘤组织中E-cadherin蛋白表达水平,分析E-cadherin表达与喉癌临床病理特征之间的关系,结合临床随访资料,用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,Log-rank法比较E-cadherin高表达组和E-cadherin低表达组5年生存率,Cox多因素回归法分析喉癌预后的独立预测因素。结果喉癌组织中E-cadherin平均染色分数明显低于癌旁非肿瘤组织(F=10.587,P<0.001);喉癌组织中E-cadherin表达水平与淋巴结转移(χ2=2.469,P<0.001)有明显相关性,而与患者年龄、肿瘤临床分型、T分级和病理分级无关;E-cadherin高表达组5年生存率为74.1%,E-cadherin低表达组5年生存率为42.9%,二者差异有统计学意义;多变量Cox风险比例模型分析表明,仅淋巴结转移是喉癌预后的独立预测因子,E-cadherin表达水平不能单独预测疾病的预后。结论E-cadherin在喉癌组织中表达减低,其表达水平可能作为预测喉癌颈淋巴结隐匿性转移的潜在肿瘤标志物。

miR-18a过表达及抑制表达人鼻咽癌细胞株的构建

【目的】建立稳定miR-18a过表达及表达的人鼻咽癌细胞系,为研究miR-18a在鼻咽癌发生发展中的功能奠定基础。【方法】将miR-18a前体的编码基因片段及miR-18a反义寡核苷酸克隆到慢病毒载体中,DNA测序鉴定;将构建好的载体转染293T细胞,获得重组miR-18a过表达及抑制表达的慢病毒载体,感染人鼻咽癌细胞CNE1和CNE2,嘌呤霉素筛选获得稳定干扰miR-18a表达及过表达miR-18a的细胞系,PCR及western blot鉴定。【结果】成功构建真核表达的慢病毒miR-18a干扰载体及过表达载体,滴度均为3×10~8TU/mL;转染miR-18a抑制表达的慢病毒载体的CNE1和CNE2中ATM表达增高;与对照病毒转染相比,转染miR-18a过表达慢病毒载体的CNE1(20.3倍,P<0.01)和CNE2(122.5倍,P<0.01)中miR-18a表达显著增高,靶蛋白ATM表达下调。【结论】成功构建人miR-18a慢病毒抑制表达和过表达载体,并获得相应的慢病毒稳转人鼻咽癌细胞株。

汉防己甲素对人鼻咽癌CNE1和CNE2细胞株的放疗增敏作用

目的:探讨最大非毒性剂量汉防己甲素(tetrandrine,Tet)对人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2的放疗增敏机制。方法:分别采用最大非毒性剂量Tet(对CNE1细胞为1.5μmol/L;对CNE2细胞为1.8μmol/L)、4 Gy放疗和最大非毒性剂量Tet联合放疗处理CNE1和CNE2细胞;流式细胞术检测各组细胞周期分布,Western blot检测各组细胞γ-H2AX、cleaved caspase-3、p-CDC25C、CDK1、p-CDK1、cyclin B1、ERK和p-ERK的蛋白水平。结果:最大非毒性剂量Tet联合放疗后可上调CNE1和CNE2细胞中γ-H2AX的表达。放疗组CNE1和CNE2细胞G_2/M期的比例分别为(18.09±0.42)%和(18.48±1.32)%,联合处理组CNE1和CNE2细胞G_2/M期的比例降为(15.88±1.04)%和(13.80±0.82)%,与放疗组比较差异有统计学意义(P<0.05)。联合处理可增加放疗所致的cleaved caspase-3的蛋白水平(P<0.05)。不同浓度Tet处理CNE1和CNE2细胞后,p-CDC25C和p-CDK1的蛋白水平随Tet浓度增加而升高(P<0.05),CDK1的表达无明显改变;最大非毒性剂量Tet不影响p-CDC25C、p-CDK1和CDK1的蛋白水平。在CNE1和CNE2细胞中,联合处理可明显降低放疗引起的p-CDC25C和p-CDK1的蛋白水平(P<0.05),上调放疗后cyclin B1的表达,而对总CDK1的表达无明显调节作用;联合处理可显著抑制放疗所致的pERK蛋白水平(P<0.05)。结论:最大非毒性剂量Tet可以增加放疗引起的CNE1和CNE2细胞的DNA断裂及细胞凋亡,其放疗增敏的机制可能与Tet调控ERK/CDC25C/CDK1/cyclin B1通路、去除放疗导致的G2/M期阻滞有关。

IL-19及其受体与慢性鼻-鼻窦炎组织重塑的相关性研究

目的:探讨白细胞介素19(interleukin-19,IL-19)及其受体(IL-20R1/IL-20R2)在不同类型慢性鼻-鼻窦炎[慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSw NP)和慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis without nasal polyps,CRSs NP)]患者中表达的差异,并分析其与慢性鼻-鼻窦炎组织重塑的相关性。方法:研究共分3组:CRSw NP组(30例)、CRSs NP组(15例)和对照组(鼻中隔偏曲患者15例)。实时荧光定量PCR检测IL-19及其受体(IL-20R1/IL-20R2)和组织重塑因子基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)-1的mRNA相对表达量;免疫组化检测IL-19及其受体的蛋白表达量;ELISA检测MMP-9、TIMP-1的蛋白表达量。结果:CRSw NP组IL-19、IL-20R1、IL-20R2和MMP-9的mRNA和蛋白表达量高于CRSs NP组和对照组(P<0.05),CRSs NP组TIMP-1的mRNA和蛋白的表达量均高于CRSw NP组和对照组(P<0.05);MMP-2的mRNA和蛋白的表达量在各组无显著差异。CRSw NP组IL-19、IL-20R1和IL-20R2均与MMP-9的mRNA相对表达量呈正相关(P<0.05);IL-19及其受体与TIMP-1的mRNA相对表达量无明显相关。结论:IL-19及其受体的mRNA在CRSw NP中高表达,且与MMP-9 mRNA表达呈正相关,提示二者可能存在交互作用,可能参与慢性鼻-鼻窦炎的组织重塑。

颈深部筋膜间隙感染诊治体会

目的探讨颈深部筋膜间隙感染的临床表现和诊断治疗方法。方法回顾性分析2012年1月~2014年8月我院耳鼻咽喉头颈外科收治的105例颈深部间隙感染患者的临床资料,总结其发病特征和诊治策略。结果 105例颈深部间隙感染患者中,70例行脓肿切开引流,4例行脓肿穿刺抽液,31例行静脉抗生素消炎治疗,仅2例颈深部多筋膜间隙感染患者分别并发呼吸困难、纵隔感染,所有患者均治愈出院。结论颈深部筋膜间隙感染一经确诊脓肿形成,应及时切开引流,根据药敏试验结果选用合适抗生素,控制基础疾病及严重并发症。

变应性鼻炎免疫治疗前后外周血不同T细胞亚群基因表达的研究

目的探讨变应性鼻炎（AR）屋尘螨特异性免疫治疗前后外周血调节性T细胞（T regulatory cells,Treg）Foxp3基因和γδT细胞抗原识别受体（T cell receptor,TCR）Vγ亚家族基因表达的变化情况。方法选择22例屋尘螨皮下注射免疫治疗1年有效的AR患者,采用RT-PCR检测治疗前后外周血Foxp3与TCR VγⅠ～Ⅲ基因表达水平。10例健康志愿者为对照。结果 22例AR患者免疫治疗前Foxp3、TCR VγⅠ～Ⅲ水平明显低于对照组（Z=-2.155,Z=-2.114,t=4.101、t=3.108,P均〈0.05）,治疗后Foxp3、VγⅢ明显升高（t=-4.577,Z=-3.416,P均〈0.05）;治疗前Foxp3与VγⅠ、Ⅱ、Ⅲ呈正相关,治疗后Foxp3与VγⅢ呈正相关。结论免疫治疗1年有效的AR患者中,治疗前后外周血Treg细胞和γδT细胞亚群之间存在动态平衡关系,患者免疫治疗早期症状的改善可能与T细胞的免疫重塑相关。

人EGFL7基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其在人喉癌细胞中的表达

目的:构建人表皮生长因子样结构域7(epidermal growth factor-like domain 7,EGFL7)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,并建立稳定干扰EGFL7基因表达的喉癌细胞亚系,为研究EGFL7蛋白在喉癌发生发展中的功能奠定基础。方法:针对人EGFL7基因序列,设计特异性RNAi靶序列,与pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR线性载体定向连接,得到的阳性重组子再与pLenti6.3-MCS/V5-DEST慢病毒载体进行重组,获得真核表达慢病毒干扰载体。在POLOdelivererTM3000介导下将慢病毒包装质粒和EGFL7基因重组慢病毒载体导入293T细胞包装病毒,测定病毒滴度,感染人喉癌细胞HEp-2,杀稻瘟菌素筛选获得稳定干扰EGFL7基因的细胞亚系。结果:成功构建EGFL7 pLenti6.3-EGFL7-miR真核表达慢病毒干扰载体并获得相应慢病毒,经测定病毒滴度为5×1011TU/L,实时荧光定量PCR证实pLenti6.3-EGFL7-miR慢病毒载体对喉癌细胞HEp-2 EGFL7基因的沉默效率为97%。结论:成功构建人EGFL7基因特异性的慢病毒干扰载体,并获得EGFL7基因稳定干扰的喉癌细胞亚系。

糖皮质激素受体mRNA在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者外周血单个核细胞中的表达

目的探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)mRNA的表达及其意义。方法采用实时荧光定量PCR检测30例中重度男性OSAHS患者和27例正常男性PBMC中GRαmRNA和GRβmRNA的表达,探讨其与呼吸暂停低通气指数、体质量指数、颈围、腰围、最低动脉血氧饱和度、平均动脉血氧饱和度、Epworth嗜睡量表评分、空腹血糖、心率及血压之间的关系。结果 OSAHS组的GRαmRNA表达水i砰较对照组低(t=2.25,P<0.05);GRβmRNA的表达水平在两组间无显著差异(t=1.43,P>0.05)。在OSAHS组中并未发现GRαmRNA的表达与各参数之间存在显著相关性。结论中重度男性OSAHS患者PBMC中GRαmRNA的表达水平较对照组下降,这种改变的机制目前尚不清楚。

腐植酸在西瓜种子发芽过程中的影响研究

研究了不同浓度黄腐酸、腐植酸和原料风化煤对西瓜种子生长发育的影响。研究结果表明,腐植酸类物质对西瓜种子生长有明显的促进作用,表现在选用合适浓度的溶液处理后,种子萌发率提高,萌发整齐,幼苗粗壮,种子的活力指数提高。浓度对其促进作用有较大的影响,浓度过大时反而对种子的萌发有抑制作用。

构建高效小学数学课堂的有效途径

在构建高效小学数学课堂教学中,高效课堂教学是教师的梦想,是家庭、学校、社会的希望,是培养学生自学能力,使其从＂学会＂到＂会学＂的一项有效教育方法。它给小学数学教学带来了教学方式与学习方式的可喜变化,给课堂教学注入了新的生机与活力。

铝碳酸镁用于胃溃疡伴胆汁反流的临床效果观察

目的：探讨胃溃疡伴胆汁反流采用铝碳酸镁和奥美拉唑联合治疗的疗效。方法：选取2013年1月~2015年6月我院收治的110例胃溃疡伴胆汁反流患者,随机分为联合组和常规组,每组55例,常规组单纯采用奥美拉唑进行治疗,联合组采用铝碳酸镁和奥美拉唑进行联合治疗。结果：经过治疗,联合组治疗总有效率（96.36%）显著高于常规组（83.64%）,组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）;同时联合组临床症状评分及胆汁反流评分降低程度也显著优于常规组,组间比较差异具有统计学意义（均P〈0.01）。结论：较单纯奥美拉唑治疗,采用铝碳酸镁联合奥美拉唑治疗胃溃疡伴胆汁反流的疗效更为显著,改善了患者的临床症状及胆汁反流症状,提高了临床疗效,有助于提高患者的生活质量,值得临床推广。

基于AD7679的液位表系统的设计

本文介绍基于模数转换器AD7679的液位表系统的设计,给出了硬件结构图和数据流程图。该液位表具有RS485接口,可以外接多种温度、压力传感器,具有10路温度、10路液位测量和显示,并可以进行LED液位报警指示和继电器报警输出。本系统的设计,实现了高精度数据采集的功能。

缬沙坦联合硝苯地平治疗老年高血压的效果观察

目的探讨硝苯地平联合缬沙坦治疗老年高血压患者的临床疗效及安全性分析。方法选取我院收治的140例老年高血压患者,根据入院前后顺序,随机分为对照组和治疗组,每组各70例,前者单纯采用硝苯地平控释片进行治疗,后者给予硝苯地平和缬沙坦进行联合治疗。结果经过治疗后,实验组患者的治疗总有效率(95.71%)显著高于单用组(84.29%),组间比较差异有统计学意义(P<0.01);实验组患者舒张压和收缩压改善程度明显高于对照组,组间比较差异均存在统计学意义(均P<0.01)。结论硝苯地平联合缬沙坦治疗老年高血压患者的疗效确切,显著改善了患者的血压,不良反应低,有助于提高患者的生活质量,值得临床推广。

试论新课标下小学数学课堂培养学生兴趣的方法

《数学课程标准》明确指出：教师的任务就是创设教学情境，激发学生的学习兴趣，诱导学生投入到丰富多彩、充满活力的数学学习活动中去，让学生亲身经历数学知识的形成过程，也就是经历一个丰富、生动的思维活动过程，经历一个实践和创新的过程，从中体验探索数学知识的乐趣，使学生获得数学学习的乐趣和信心，认识到数学的意义和价值，使学生不仅“喜欢数学”，而且“会做数学”、“会用数学”，真正使学生在情感、能力、知识等方面获得全面发展。

如何培养低年级学生课外阅读能力

语文新课程标准中对每个年段的阅读目标进行了明确的规定，而随着新课程的实施，大量的课外阅读已作为了一种课堂的延伸和拓展，低年级是学生学习阅读的起步阶段，“新课标”对低年级阅读教学提出了如此要求：“1．喜欢阅读，感受阅读的乐趣。初步养成爱护图书的习惯。

触网,而不要落网

青少年沉迷于网络游戏一直是社会关注的热点话题，而成人沉迷于“偷菜”。则是一段时间以来的另一大热点话题。看来，网络游戏引发的问题并不仅仅发生在青少年身上，像教师、公务员、公司白领这样的成年人群，也并不具有免疫功能。

门面·脸面·情面·储蓄

门面、脸面、情面,字眼上本不相干,但何以又在储蓄工作中凑在一起呢?门面:环境优雅,装演秀丽,能给储户以安全感;脸面:对储容,来有笑脸,问有答声,走有送声,能激起顾客感情上的共鸣;情面:即是放下架子,以情交人,耐心解答顾客所提的问题,提供金融咨询.但是,我们有一些同志,喜欢好的门面,却丢掉了脸面与情面.

IL-17A激活NLRP3炎性小体在CRSwNP中的作用及临床意义

目的探讨慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)中白细胞介素(IL)-17A激活NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3)的作用及临床意义。方法收集自2020年1月至2021年12月期间在中山大学附属第三医院接受鼻内镜手术治疗的患者标本,其中CRSwNP患者28例(男性19例,女性9例,年龄19~67岁),慢性鼻窦炎不伴鼻息肉(CRSsNP)患者22例(男性14例,女性8例,年龄26~66岁),对照组患者22例(男性13例,女性9例,年龄20~57岁)。实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测IL-17A、NLRP3、IL-1β及IL-18在3组中的表达,分析其相关性;组织免疫荧光三染定位分析IL-17A、NLRP3、IL-18在鼻黏膜组织中的位置;蛋白免疫印迹法及酶联免疫吸附试验检测IL-17A刺激原代鼻黏膜上皮细胞及使用IL-17A受体抑制剂后NLRP3、IL-1β及IL-18在细胞中的表达;细胞免疫荧光观察IL-17A刺激原代鼻黏膜上皮细胞后,NLRP3、IL-1β、IL-18蛋白的表达,以及使用IL-17A受体抑制剂和NLRP3抑制剂(MCC950)后,IL-17A刺激原代鼻黏膜上皮细胞NLRP3、IL-1β、IL-18蛋白的表达。分析NLRP3、IL-1β及IL-18与CRSwNP患者CT评分、鼻内镜评分、视觉模拟量表(VAS)评分和鼻腔鼻窦结局测试(SNOT)22评分之间的相关性。采用SPSS 20.0软件对数据进行统计。结果CRSwNP组IL-17A、NLRP3、IL-1β及IL-18 mRNA表达明显高于CRSsNP组(P=0.018,P<0.001,P=0.005,P<0.016)及对照组(P值均<0.001),且IL-17A与NLRP3、IL-1β、IL-18的表达存在正相关(r值分别为0.643、0.650、0.629,P值均<0.05)。息肉组织中,IL-17A与NLRP3、IL-18共同定位于上皮层。IL-17A刺激原代鼻黏膜上皮细胞后,NLRP3、IL-1β、IL-18表达增高;使用IL-17A受体抑制剂后,可明显下调NLRP3、IL-1β、IL-18的表达;使用NLRP3抑制剂MCC950后则明显下调IL-17A促进NLRP3、IL-1β及IL-18表达的作用。NLRP3、IL-1β、IL-18的表达与CRSwNP患者CT、鼻内镜、VAS和SNOT22评分存在正相关。结论CRSwNP中,IL-17A可通过激活NLRP3炎性小体,促进IL-1β及IL-18的释放,加重疾病的严重程度。

miR-18a促进自噬增强人鼻咽癌细胞株放疗敏感性的研究

目的:探索miR-18a过表达和抑制表达对人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2放疗敏感性的影响及可能的机制。方法:采用miR-18a过表达质粒miR-18a模拟物和抑制表达质粒miR-18a遏制物及空白对照质粒转染人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2细胞,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(WB)检测其对毛细血管扩张性共济失调症突变(ataxia telangiectasia mutated,ATM)基因和蛋白表达的影响。构建miR-18a过表达和抑制表达的人鼻咽癌细胞CNE1和CNE2细胞株。四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测miR-18a过表达和抑制表达联合放疗处理前后对人鼻咽癌细胞株生长的影响,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,克隆形成实验检测细胞放疗敏感性,吖啶橙染色结合WB检测细胞自噬水平及自噬相关蛋白表达。采用SPSS 16.0软件进行统计学分析,2组间均数比较采用独立样本t检验。结果:100、200 nmol/L miR-18a模拟物转染CNE1和CNE2细胞48 h后,与对照组相比,ATM mRNA表达受到显著抑制(CNE1相对表达量为0.174±0.139和0.003±0.001,t值为9.939和19470.783;CNE2:相对表达量为0.024±0.008和0.019±0.012,t值为270.230和137.746,P值均<0.001),72 h后,ATM蛋白水平显著下降;100、200 nmol/L miR-18a遏制物转染48 h后,CNE1细胞中ATM转录显著增加(CNE1相对表达量为9.419±2.495和2.500±1.063,t值为-4.427和-41.241,P值均<0.05);CNE2细胞中ATM转录亦显著增加(相对表达量为7.210±0.171和115.875±15.805,t值为-62.789和-12.589,P值均<0.05),72 h后,ATM蛋白水平增高。miR-18a过表达的CNE1和CNE2细胞放疗后与CNE1和CNE2细胞单纯放疗相比,细胞增殖受到明显抑制(P值均<0.05);稳定抑制miR-18a表达与单纯放疗相比,细胞增殖能力增加(P值均<0.01)。100 nmol/L miR-18a模拟物转染联合放疗组与单纯放疗组相比,CNE1细胞凋亡率增加[(22.9±2.1)%比(16.3±1.0)%,t=-4.870,P<0.01]。稳定过表达miR-18a联合放疗与单纯放疗相比,G1期和G2/M期的细胞比例显著减少[(20.2±3.0)%比(29.8±4.4)%,t=3.119;(21.5±0.9)%比(33.4±3.1)%,t=6.410,P值均<0.05],S期的细胞比例显著增加[(56.7±4.9)%比(36.8±6.4)%,t=-4.246,P<0.05]。稳定过表达miR-18a的CNE1细胞与对照细胞相比,放疗后克隆形成能力下降、自噬溶酶体数量增加、自噬相关LC3表达增加(P值均<0.05),p62没有明显变化。结论:miR-18a过表达可以增强人鼻咽癌细胞放疗敏感性,其机制与其抑制ATM表达,去除G1/S,G2/M期阻滞,诱导细胞自噬和凋亡有关。