胰高血糖素对不同葡萄糖培养条件下胰岛β细胞分泌胰岛素的影响及机制

目的探讨不同浓度葡萄糖环境下胰高血糖素(Gn)对胰岛β细胞系MIN6细胞分泌胰岛素(INS)及对环磷酸腺苷(c AMP)信号通路的影响。方法培养胰岛β细胞系MIN6细胞。(1)分为正常对照1组、低糖1组、高糖1组,分别在葡萄糖终浓度为0、2.8、16.7 mmol/L培养基中培养,每组均给予0、500、1 000 ng/L的Gn干预1 h,采用ELISA法检测细胞上清液INS、c AMP含量,评价不同浓度Gn对MIN6细胞分泌INS及c AMP的影响。(2)分为正常对照2组、低糖2组、高糖2组,分别在葡萄糖终浓度为0、2.8、16.7 mmol/L培养基中培养,并均加入500μL c AMP信号通路刺激剂盐酸异丙肾上腺素(ISO)孵育10 min,然后每组均给予0、500、1 000 ng/L的Gn干预1 h,采用ELISA法检测细胞上清液INS、c AMP含量,评价加入ISO后不同浓度Gn对MIN6细胞分泌INS及c AMP的影响。结果 (1)正常对照1组、低糖1组、高糖1组中,1 000 ng/L Gn干预后INS、c AMP含量均高于500、0 ng/L时,500ng/L Gn干预后INS、c AMP含量均高于0 ng/L时(P均<0.05)。(2)正常对照2组、低糖2组、高糖2组中,1 000ng/L Gn干预后INS、c AMP含量均高于500、0 ng/L时,500 ng/L Gn干预后INS、c AMP含量均高于0 ng/L时(P均<0.05)。在未添加ISO情况下,细胞上清液c AMP与INS含量呈正相关(r=0.897 2,r2=0.804 9,P<0.05);在添加ISO后,细胞上清液c AMP与INS含量也呈正相关(r=0.894 7,r2=0.800 5,P<0.05)。结论 Gn可促进不同葡萄糖水平下胰岛β细胞INS的分泌,其浓度较高时对INS促进作用更明显;其机制可能为Gn通过c AMP信号通路促进INS分泌。

荧光共振能量转移技术检测蛋白激酶A在MIN6细胞分泌胰岛素机制中的作用

目的蛋白激酶A(PKA)参与小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞分泌胰岛素的机制尚不明确。文中旨在不同浓度的葡萄糖环境下,给予不同浓度的胰升血糖素和异丙肾上腺素(ISO)后MIN6细胞胰岛素和PKA水平变化,探讨PKA在MIN6细胞中分泌胰岛素的作用和机理。方法体外培养MIN6细胞,在葡萄糖0、2.8、16.7 mmol/L时分别给予胰升血糖素0、500、1000 ng/L干预处理,用荧光共振能量转移(FRET)的生物传感器技术测PKA水平,用ELISA测胰岛素水平,并在添加ISO前后,检测并比较PKA和胰岛素的变化水平。结果葡萄糖浓度2.8、16.7 mmol/L时,500 ng/L胰升血糖素(ISO+)、1000 ng/L胰升血糖素(ISO-)PKA的表达水平较500 ng/L胰升血糖素(ISO-)明显升高(P<0.05);1000 ng/L胰升血糖素(ISO+)PKA的表达水平较500 ng/L胰升血糖素(ISO+)、1000 ng/L(ISO-)明显升高(P<0.05)。0 mmol/L葡萄糖时,1000 ng/L胰升血糖素的胰岛素增量较0 ng/L胰升血糖素明显升高(P<0.05)。2.8、16.7 mmol/L葡萄糖时,500 ng/L、1000 ng/L胰升血糖素的胰岛素增量较0 ng/L胰升血糖素明显升高(P<0.05)。未添加ISO时,细胞上清液的胰岛素含量与PKA呈正相关(r=0.810,P<0.05);添加ISO后,细胞上清液cAMP与胰岛素含量亦呈正相关(r=0.791,P<0.05)。结论基于FRET的生物传感器技术可在活细胞上实时动态检测PKA的变化,胰升血糖素以浓度递增的形式通过增加MIN6细胞内PKA的浓度来促进胰岛素分泌,且这种作用具有一定的葡萄糖依赖性。

MAPK信号通路调控子宫内膜癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路对人子宫内膜癌细胞HEC-1-B增殖、侵袭和迁移的影响。方法:体外培养人子宫内膜癌细胞HEC-1-B,采用MTT法检测增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期,Transwell试验检测细胞侵袭能力,划痕试验检测细胞迁移能力,Western印迹法检测细胞中磷酸化的p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达水平的影响。结果:p38MAPK信号通路抑制剂SB203580对子宫内膜癌细胞HEC-1-B的增殖具有抑制作用,且随着作用浓度的升高抑制作用增强(P<0.05)。与对照组比,施加抑制剂SB203580能够导致G0/G1期HEC-1-B细胞比例增多,S期和G2/M期细胞比例减少,细胞侵袭抑制率升高,细胞划痕愈合率降低,细胞中p-p38MAPK, PCNA,MMP-2蛋白表达下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。且抑制剂SB203580组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:抑制MAPK信号通路能够抑制人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与下调细胞中PCNA,MMP-2蛋白表达有关。

胰升血糖素通过环磷鸟嘌呤核苷信号通路调节MIN6细胞胰岛素分泌的作用机制研究

目的探讨不同浓度的胰升血糖素(Glg)和葡萄糖(Glu)对胰岛β细胞株MIN6中胰岛素(Ins)分泌功能及细胞内环磷鸟嘌呤核苷(cGMP)信号通路的影响。方法用不同浓度Glu(0、2.8、16.7 mmol/L)及Glg(0、100、500、1000 ng/L)处理MIN6细胞。ELISA测定细胞内cGMP含量,同时测定细胞上清液中Ins的含量。结果单纯Glg处理组中,1000 ng/L组cGMP含量较500 ng/L组、100 ng/L组低(P<0.05)。2.8 mmol/L Glu加不同浓度Glg处理组中,1000 ng/L Glg组cGMP含量较100 ng/L Glg组及0 ng/L Glg组低;500 ng/L Glg组较0 ng/L Glg组低(P<0.05)。16.7 mmol/L Glu加不同浓度Glg处理组中,1000 ng/L Glg组cGMP含量较其他组低;500 ng/L Glg组较100 ng/L Glg组及0 ng/L Glg组低(P<0.05)。单纯Glg处理组中,随Glg浓度升高,Ins分泌量升高(P<0.05)。2.8 mmol/L Glu加不同浓度Glg处理组中,1000 ng/L Glg组Ins较100 ng/L Glg组及0 ng/L Glg组高;500 ng/L Glg组Ins较0 ng/L Glg组高(P<0.05)。16.7 mmol/L Glu加不同浓度Glg处理组中,随Glg浓度升高,Ins分泌量升高(P<0.05)。结论 Glg可能通过浓度梯度的方式下调MIN6细胞内cGMP的产生从而促进MIN6细胞Ins分泌,且这种作用有Glu依赖性。