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5种常见犬腹泻病毒基因芯片检测方法的建立
被引量:
3
1
作者
苏霞
周宏专
+5 位作者
常彦嫣
齐颀
林路路
张进
徐福洲
杨兵
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2019年第8期2211-2219,共9页
为建立一种简便、快速、高效的可同时区分犬腺病毒1型(canine adenovirus type 1,CAV-1)、犬腺病毒2型(canine adenovirus type 2,CAV-2)、犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)、犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)、犬细小病毒(ca...
为建立一种简便、快速、高效的可同时区分犬腺病毒1型(canine adenovirus type 1,CAV-1)、犬腺病毒2型(canine adenovirus type 2,CAV-2)、犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)、犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)、犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)5种常见犬腹泻病毒的基因芯片诊断方法,本研究以CAV-1、CAV-2、CCV、CDV、CPV 5种犬腹泻病毒为靶病毒,根据NCBI上收录的病毒基因序列在其保守区域内设计引物,在此基础上根据变异区域设计针对每种病毒的探针2~3条,优化检测体系的各反应条件,确定该检测方法的特异性与敏感性,建立可同时区分5种病毒的基因芯片检测方法。结果显示,建立的基因芯片检测方法可同时检测以上述5种犬腹泻病毒,其中PCR的退火温度为55℃、延伸时间为1 min 15 s;探针与PCR产物的杂交温度40℃、杂交时间2.5 h时,该方法对CAV-1、CAV-2、CCV、CDV和CPV 5种病毒标准品的检测限分别为0.2 fg/μL、2 fg/μL、2 fg/μL、20 pg/μL和0.02 fg/μL,具有较高的灵敏性;同时对犬副流感病毒进行特异性试验,发现无阳性信号出现,具有较强的特异性;对14份临床腹泻样品检测结果显示,基因芯片方法对CAV-1、CAV-2、CCV、CDV和CPV 5种病毒的阳性检出率分别为28.57%、50.00%、64.28%、14.28%和85.71%,并且基因芯片检测方法的敏感性较PCR要高10~100倍。以上结果表明,本研究建立的基因芯片检测方法具有特异、敏感等特点,对临床中犬类混合感染病毒检测具有一定的诊断意义。
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关键词
犬腹泻病毒
基因芯片
诊断
下载PDF
职称材料
犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬冠状病毒三重PCR检测方法的建立
被引量:
8
2
作者
苏霞
周宏专
+1 位作者
常彦嫣
杨兵
《畜牧与兽医》
北大核心
2018年第7期103-107,共5页
参考Gen Bank上登录的犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)和犬冠状病毒(CCV)的基因序列保守片段分别设计特异性引物,建立了可以同时检测CDV(684 bp)、CPV(213 bp)和CCV(417 bp)的三重PCR方法。特异性结果表明,所建立的体系...
参考Gen Bank上登录的犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)和犬冠状病毒(CCV)的基因序列保守片段分别设计特异性引物,建立了可以同时检测CDV(684 bp)、CPV(213 bp)和CCV(417 bp)的三重PCR方法。特异性结果表明,所建立的体系只能扩增CDV、CPV、CCV,而不能扩增犬腺病毒Ⅱ型(CAV-Ⅱ)和犬副流感病毒(CPIV);敏感性试验表明,该方法对CDV、CPV和CCV的最低核酸检测量分别为1.39×10^- 2、6.0×10^-2和6.7×10^-2 copies/L,其敏感性比普通PCR高100倍。采用建立的三重PCR方法对北京、山东地区收集的临床粪便样品进行检测结果表明,使用三重PCR体系的扩增结果与单项PCR扩增结果一致,符合率为100%。以上结果表明该方法快速、敏感、特异性强,对上述3种病毒能够进行快速鉴定诊断,为临床诊断提供了快速简便的方法。
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关键词
犬瘟热病毒
犬细小病毒
犬冠状病毒
三重PCR
原文传递
副猪嗜血杆菌、PCV2及PRRSV多联RT-PCR检测方法的建立及其应用
被引量:
1
3
作者
罗尚星
范京惠
+5 位作者
刘宝京
邸晶美
代飞
常彦嫣
孔园园
左玉柱
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第8期1513-1518,共6页
副猪嗜血杆菌(H.parasuis)、猪圆环病毒2型(PCV2)及猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(PRRSV)是引起猪呼吸系统疫病的3种重要病原,根据GenBank中这3种病原的基因组序列,选择基因序列的高保守区,分别设计合成了3对特异性引物进行3种...
副猪嗜血杆菌(H.parasuis)、猪圆环病毒2型(PCV2)及猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(PRRSV)是引起猪呼吸系统疫病的3种重要病原,根据GenBank中这3种病原的基因组序列,选择基因序列的高保守区,分别设计合成了3对特异性引物进行3种病原的多重PCR,并对反应条件进行优化。利用建立的多重PCR方法,对河北省2012-2013年发生呼吸系统疾病的412份猪病料进行检测,并随机选择其中的57份,同时进行单一PCR检测,以确定2种方法检测结果的符合程度。结果表明,3对引物能特异扩增出大小分别为469,829,219bp的目的条带。灵敏度检测试验表明,H.parasuis,PCV2和PRRSV的最低检测量分别为52.7,335.0,137.0Pg。412份临床样品检测结果显示,H.parasuis在2012年的阳性率为44.2%,2013年为45.1%,提示这2年引起猪呼吸道疫病的主要病原是H.parasuis。
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关键词
副猪嗜血杆菌
猪圆环病毒2型
猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒
多重RT-PCR
原文传递
题名
5种常见犬腹泻病毒基因芯片检测方法的建立
被引量:
3
1
作者
苏霞
周宏专
常彦嫣
齐颀
林路路
张进
徐福洲
杨兵
机构
北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2019年第8期2211-2219,共9页
基金
中华人民共和国科学技术部-国家重点研发计划项目子课题(2016YFD0501001-12)
北京市农林科学院畜牧兽医研究所项目(XMS201907、XMS201910)
北京市农林科学院青年科研基金(QNJJ201731)
文摘
为建立一种简便、快速、高效的可同时区分犬腺病毒1型(canine adenovirus type 1,CAV-1)、犬腺病毒2型(canine adenovirus type 2,CAV-2)、犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)、犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)、犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)5种常见犬腹泻病毒的基因芯片诊断方法,本研究以CAV-1、CAV-2、CCV、CDV、CPV 5种犬腹泻病毒为靶病毒,根据NCBI上收录的病毒基因序列在其保守区域内设计引物,在此基础上根据变异区域设计针对每种病毒的探针2~3条,优化检测体系的各反应条件,确定该检测方法的特异性与敏感性,建立可同时区分5种病毒的基因芯片检测方法。结果显示,建立的基因芯片检测方法可同时检测以上述5种犬腹泻病毒,其中PCR的退火温度为55℃、延伸时间为1 min 15 s;探针与PCR产物的杂交温度40℃、杂交时间2.5 h时,该方法对CAV-1、CAV-2、CCV、CDV和CPV 5种病毒标准品的检测限分别为0.2 fg/μL、2 fg/μL、2 fg/μL、20 pg/μL和0.02 fg/μL,具有较高的灵敏性;同时对犬副流感病毒进行特异性试验,发现无阳性信号出现,具有较强的特异性;对14份临床腹泻样品检测结果显示,基因芯片方法对CAV-1、CAV-2、CCV、CDV和CPV 5种病毒的阳性检出率分别为28.57%、50.00%、64.28%、14.28%和85.71%,并且基因芯片检测方法的敏感性较PCR要高10~100倍。以上结果表明,本研究建立的基因芯片检测方法具有特异、敏感等特点,对临床中犬类混合感染病毒检测具有一定的诊断意义。
关键词
犬腹泻病毒
基因芯片
诊断
Keywords
canine diarrhea virus
gene chip
diagnosis
分类号
S852.6591 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬冠状病毒三重PCR检测方法的建立
被引量:
8
2
作者
苏霞
周宏专
常彦嫣
杨兵
机构
北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室
出处
《畜牧与兽医》
北大核心
2018年第7期103-107,共5页
基金
国家重点研发计划(2016YFD0501001-12)
北京市农林科学院畜牧兽医研究所项目(XMS)
文摘
参考Gen Bank上登录的犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)和犬冠状病毒(CCV)的基因序列保守片段分别设计特异性引物,建立了可以同时检测CDV(684 bp)、CPV(213 bp)和CCV(417 bp)的三重PCR方法。特异性结果表明,所建立的体系只能扩增CDV、CPV、CCV,而不能扩增犬腺病毒Ⅱ型(CAV-Ⅱ)和犬副流感病毒(CPIV);敏感性试验表明,该方法对CDV、CPV和CCV的最低核酸检测量分别为1.39×10^- 2、6.0×10^-2和6.7×10^-2 copies/L,其敏感性比普通PCR高100倍。采用建立的三重PCR方法对北京、山东地区收集的临床粪便样品进行检测结果表明,使用三重PCR体系的扩增结果与单项PCR扩增结果一致,符合率为100%。以上结果表明该方法快速、敏感、特异性强,对上述3种病毒能够进行快速鉴定诊断,为临床诊断提供了快速简便的方法。
关键词
犬瘟热病毒
犬细小病毒
犬冠状病毒
三重PCR
Keywords
CDV
CPV
CCV
muhiplex PCR
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
副猪嗜血杆菌、PCV2及PRRSV多联RT-PCR检测方法的建立及其应用
被引量:
1
3
作者
罗尚星
范京惠
刘宝京
邸晶美
代飞
常彦嫣
孔园园
左玉柱
机构
河北农业大学动物医学院
河北农业大学动物科技学院
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第8期1513-1518,共6页
基金
河北农业大学百名青年学术带头人培养计划资助项目(0318011)
河北省现代农业产业技术体系专项资助资金(HBCT2018110207)
河北省技术创新引导计划资助项目(17C1303111001)
文摘
副猪嗜血杆菌(H.parasuis)、猪圆环病毒2型(PCV2)及猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(PRRSV)是引起猪呼吸系统疫病的3种重要病原,根据GenBank中这3种病原的基因组序列,选择基因序列的高保守区,分别设计合成了3对特异性引物进行3种病原的多重PCR,并对反应条件进行优化。利用建立的多重PCR方法,对河北省2012-2013年发生呼吸系统疾病的412份猪病料进行检测,并随机选择其中的57份,同时进行单一PCR检测,以确定2种方法检测结果的符合程度。结果表明,3对引物能特异扩增出大小分别为469,829,219bp的目的条带。灵敏度检测试验表明,H.parasuis,PCV2和PRRSV的最低检测量分别为52.7,335.0,137.0Pg。412份临床样品检测结果显示,H.parasuis在2012年的阳性率为44.2%,2013年为45.1%,提示这2年引起猪呼吸道疫病的主要病原是H.parasuis。
关键词
副猪嗜血杆菌
猪圆环病毒2型
猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒
多重RT-PCR
Keywords
Haemophilus parasuis
porcine circovirus type 2
porcine reproductive and respiratorysyndrome virus
multiplex PCR
分类号
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
5种常见犬腹泻病毒基因芯片检测方法的建立
苏霞
周宏专
常彦嫣
齐颀
林路路
张进
徐福洲
杨兵
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2019
3
下载PDF
职称材料
2
犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬冠状病毒三重PCR检测方法的建立
苏霞
周宏专
常彦嫣
杨兵
《畜牧与兽医》
北大核心
2018
8
原文传递
3
副猪嗜血杆菌、PCV2及PRRSV多联RT-PCR检测方法的建立及其应用
罗尚星
范京惠
刘宝京
邸晶美
代飞
常彦嫣
孔园园
左玉柱
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
1
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