透射电镜在糖尿病大鼠肠上皮细胞连接分析中的应用

探讨透射电镜技术在糖尿病大鼠肠上皮细胞连接分析中的应用。采用高脂饮食联合链脲佐菌素(STZ)腹腔注射方法建立糖尿病大鼠模型,采用罗氏血糖仪检测大鼠尾血血糖,采用透射电镜观察大鼠回肠上皮细胞连接的病理学改变,采用免疫印迹检测大鼠回肠组织claudin、occludin、ZO-1蛋白表达水平。成功构建糖尿病大鼠模型。糖尿病大鼠肠上皮细胞间紧密连接与正常对照组比较稍感松弛,电子密度有所降低;中间连接、缝隙连接则出现缝隙异常增宽现象。与正常对照组比较,模型组细胞连接相关蛋白claudin、occludin、ZO-1表达水平显著降低。透射电镜技术可应用于糖尿病大鼠肠上皮细胞连接病理形态学分析,对糖尿病大鼠肠黏膜屏障功能评价具有重要意义。

海兔素对酒精性肝损伤大鼠肝脏保护作用及机制

本实验旨在观察海兔素对酒精性肝损伤大鼠的保护作用,并从内毒素介导的Kupffer细胞toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)信号通路角度探讨海兔素可能的保肝机制。雄性Wistar大鼠随机分为3组,包括正常对照组、酒精模型组和海兔素干预组。其中,酒精模型组和海兔素干预组大鼠分别灌胃给予8 g/(kg mb·d)乙醇2周后,再给予12 g/(kg mb·d)乙醇6周。海兔素干预组在给予乙醇前1h,灌胃给予海兔素150 mg/(kg mb·d),持续8周。末次灌胃后,禁食不禁水12 h,处死大鼠。采用苏木精-伊红染色进行肝组织病理学观察,采用透射电子显微镜进行肝组织超微结构观察,采用酶学实验检测肝脏损伤血清生物标志物水平,采用显色底物鲎试剂盒检测血清内毒素水平;采用门静脉胶原酶Ⅳ原位灌注及密度梯度离心获得大鼠原代Kupffer细胞。采用墨汁吞噬试验评价Kupffer细胞吞噬活性;采用逆转录聚合酶链反应测定Kupffer细胞中CD14、TLR4和NF-κB的mRNA表达水平;采用蛋白印迹实验测定Kupffer细胞中TLR4、MyD88、NF-κB p65和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的蛋白表达水平;采用酶联免疫吸附实验测定Kupffer细胞上清液中TNF-α和白细胞介素(interleukin-1β,IL-1β)含量。结果显示,海兔素补充可减轻乙醇引起的肝组织损伤,降低肝脏损伤血清生物标志物水平(P<0.05)。进一步研究发现,海兔素补充可减少血浆内毒素含量(P<0.05),有效恢复Kupffer细胞吞噬活性,显著降低Kupffer细胞中TLR4及其下游CD14、TLR4、MyD88、NF-κB p65等相关蛋白表达水平(P<0.05),并使TNF-α和IL-1β等炎性因子释放受到抑制(P<0.05)。结果表明,海兔素对酒精性肝损伤大鼠肝组织具有保护作用,其作用机制可能与海兔素抑制内毒素介导的MyD88依赖性TLR4信号通路活化有关。

DNA原位杂交法及斑点杂交法检测卡氏肺孢子虫的实验研究

目的探讨DNA原位杂交法及斑点杂交法在卡氏肺孢子虫检测中的应用。方法设计合成卡氏肺孢子虫特异性寡核苷酸探针,建立卡氏肺孢子虫大鼠动物模型,分别于第6、8、10周处死动物,取肺组织提取DNA及石蜡切片进行斑点杂交及DNA原位杂交,结果同瑞氏-吉氏染色法比较。结果DNA原位杂交法和斑点杂交法第6周检出阳性结果,检出率均为(30/30),高于瑞氏-吉氏染色法(25/30)。结论 DNA原位杂交法及斑点杂交法是高效准确的卡氏肺孢子虫检测方法。

大鼠脾脏微量元素变化与卡氏肺孢子虫感染关系的研究

目的探讨卡氏肺孢子虫(PC)感染对大鼠脾脏中微量元素的影响。方法51只大鼠随机分为实验组和对照组。实验组每只大鼠皮下注射地塞米松2mg/次,每周2次。8周后陆续将大鼠处死,取肺组织用吉氏-瑞氏复染法检测卡氏肺孢子虫。再取脾脏,用原子吸收分光光度计测定每只大鼠微量元素含量。结果吉氏-瑞氏复染法实验组大鼠PC阳性率为51.2%,对照组未检出卡氏肺孢子虫。与对照组相比较,PC阳性组脾脏中Zn++、Mg++的含量(29.72μg/g干重、147.05μg/g干重)低于对照组(37.59μg/g干重、181.90μg/g干重,P<0.05),Cu++、Fe++、Ca++的含量(7.34μg/g干重、1052.50μg/g干重、317.21μg/g干重)变化不明显。结论卡氏肺孢子虫感染组大鼠脾脏中Zn++、Mg++含量降低,Cu++、Fe++、Ca++含量无显著性变化,提示卡氏肺孢子虫感染对脾脏微量元素变化起到一定的作用。

人源隐孢子虫卵囊形态学参数的测定和分析

目的建立并分析人源隐孢子虫卵囊的形态学数据和参数。方法取阳性粪便涂片,金胺酚-改良抗酸染色法检测隐孢子虫卵囊。应用显微摄像系统采集1 138个人源隐孢子虫卵囊图像,使用计算机图像处理系统测量卵囊的长径、短径、等效直径、面积、体积及卵形指数。应用Excel数据处理软件对采集到的数据进行统计学分析。结果1 138个人源隐孢子虫卵囊长径均值为5.25μm,95%可信区间为3.79～6.72μm;卵囊短径均值为4.00μm,95%可信区间为2.72～5.28μm;卵囊面积均值为15.44μm^2;卵囊体积均值为46.55μm^3;卵囊等效直径均值为4.39μm;卵囊卵形指数1.33。结论建立了人源隐孢子虫卵囊形态学数据和参数,为量化及评价虫体的形态奠定了基础。

卡氏肺孢子虫包囊形态学数据和参数的建立和分析

目的建立并分析卡氏肺孢子虫包囊的形态学数据和参数。方法使用计算机图像分析系统测量卡氏肺孢子虫包囊的长径、短径、周长及等效直径,计算其面积、体积、圆球度及成熟包囊数量等数据。结果包囊长径最大值为8.31μm,最小值为2.31μm;包囊短径最大值为6.30μm,最小值为1.69μm;包囊周长最大值为25.43μm,最小值为6.83μm;包囊面积最大值为38.53μm2,最小值为3.36μm2;包囊体积最大值为164.73μm3,最小值为4.64μm3。结论卡氏肺孢子虫包囊形态学数据和参数的建立为量化及评价虫体的形态奠定了基础。

糖尿病大鼠肠黏膜屏障损伤检测方法的评价及蜂胶降糖作用的探讨

目的对糖尿病大鼠肠黏膜屏障功能检测方法进行分析评价,并以此为靶点探讨蜂胶是否通过修复肠黏膜屏障发挥降血糖作用。方法建立糖尿病大鼠模型,以80及160 mg/kg蜂胶进行干预,持续4周。罗氏血糖仪检测尾血血糖(FBG);高效液相色谱法检测红细胞糖化血红蛋白(HbA1c)含量;ELISA实验检测血浆D-乳酸(D-LA)及连蛋白(zonulin)含量;透射电镜观察肠组织上皮细胞间连接装置超微结构变化,Western Blotting检测其紧密连接相关蛋白表达水平。结果成功建立糖尿病大鼠模型,80、160 mg/kg蜂胶干预4周后,大鼠血糖值分别达到17.57 mmol/L和18.24 mmol/L,HbA1c含量分别达到8.94%及8.22%,均较模型组明显降低(P<0.05)。补充蜂胶后,糖尿病大鼠回肠及结肠组织上皮细胞间紧密连接、黏着连接间隙异常增宽等现象得到有效缓解。补充蜂胶使回肠和结肠组织中claudin-1、occludin及ZO-1蛋白表达水平显著升高,且具有剂量依赖性(P<0.05)。80及160 mg/kg蜂胶干预后,血清D-LA含量分别为160.03 ng/mL及151.18 ng/mL,zonulin含量分别为650.14μg/mL及647.60μg/mL,均较模型组降低,但各组间比较,均未见显著性差异(P>0.05)。结论肠黏膜屏障超微结构观察及肠组织紧密连接相关蛋白表达水平检测较肠黏膜屏障功能血清学检测可能具有更高的灵敏性,可作为可靠的实验手段应用于蜂胶降糖的肠黏膜屏障修复机制研究。

卡氏肺孢子虫标本染色方法的改进

①目的 改进卡氏肺孢子虫标本的染色方法 ,以便准确诊断卡氏肺孢子虫肺炎和制作教学标本。②方法 采用吉姆萨 瑞特染色法。③结果 染色后卡氏肺孢子虫包囊囊内小体细胞核呈紫红色 ,细胞质呈蓝色 ,囊壁呈淡蓝色 ,各部分结构清晰可辨。滋养体包核为紫红色 ,胞质为蓝色。④结论 吉姆萨 瑞特染色法操作简便、快速 ,卡氏肺孢子虫标本着色清晰 ,是临床诊断和教学中值得推广和应用的染色方法。

卡氏肺孢子虫超微结构观察

目的观察Wistar大鼠肺组织中卡氏肺孢子虫生长发育的超微结构。方法45只雌性Wistar大鼠随机分为2组,实验组(35只)每周2次经皮下注射地塞米松(1mg/次),对照组(10只)不作处理同步饲养。分别于首次注射地塞米松后第1～10周内,每周取两组鼠肺组织,电镜下观察卡氏肺孢子虫的感染情况及其生长发育的超微结构。结果电镜下观察,卡氏肺孢子虫虫体主要寄生于Wistar大鼠肺泡腔内,也见于肺泡膈、肺巨噬细胞和中性粒细胞,虫体表面有管状突起,内含细胞核、线粒体、空泡、粗面内质网和丰富的核糖体。许多卡氏肺孢子虫滋养体附着于肺Ⅰ型上皮细胞,偶见附着于肺Ⅱ型上皮细胞,有的伸出1或多个较宽大的伪足,部分细胞质内发现核相关细胞器和纺锤微管。囊前期有早、中、晚3种类型,在其内发现代表减数分裂的联会复合体。包囊壁上有一增厚处,内有一孔隙。结论卡氏肺孢子虫生活史由滋养体、囊前期和包囊等构成,包囊壁增厚处孔隙的存在提示为囊内小体逸出的一种模式。

卡氏肺孢子虫感染动物模型建立与电镜观察

①目的 观察卡氏肺孢子虫及病变肺组织超微结构 ,探讨卡氏肺孢子虫的可能致病机制。②方法肌注地塞米松诱发大鼠卡氏肺孢子虫肺炎 ,取其肺组织 ,按常规方法进行透射电镜观察。③结果 电镜下第2 2～ 2 8天即可观察到卡氏肺孢子虫的感染 ,以包囊为主 ;第 43～ 5 6天达重度感染 ,以滋养体为主 ,肺泡腔内多见 ,肺间质中少见 ,中性粒细胞、肺泡巨噬细胞和Ⅱ型肺泡上皮细胞内也可见到。④结论 大滋养体伸出丝状伪足与Ⅰ ,Ⅱ型肺泡上皮细胞粘连 ,使上皮细胞发生变性 ,Ⅱ型上皮细胞发生凋亡。

恶性疟原虫MSP1-19毕氏酵母真核表达克隆的构建

目的构建恶性疟原虫主要裂殖子表面蛋白1C末端相对分子质量1.9万片段(MSP1-19)毕氏酵母真核表达克隆。方法利用PCR技术扩增出MSP1-19,插入pPIC9载体中,鉴定正确的MSP1-19基因,插入毕氏酵母分泌型表达载体pPIC9k中,DNA测序鉴定序列的正确性,转化酵母细胞。结果筛选出的阳性克隆为MSP1-19表达克隆。结论用分子生物学方法重组构建的MSP1-19毕氏酵母真核表达克隆,为高效表达MSP1-19及其活性鉴定奠定了基础。

艾滋病并发肺孢子虫肺炎的诊断和防治

目的总结艾滋病(AIDS)并发肺孢子虫肺炎(PCP)诊断和防治经验,分析临床诊断和病原学诊断的关系。方法回顾性分析国内AIDS并发PCP病例及收治的4例AIDS并发PCP病人的临床表现、实验室检查、影像学资料以及诊断和治疗的方法。结果4例均有发热、咳嗽,伴呼吸急促、进行性呼吸困难、紫绀和血氧饱和度下降;4例胸片示间质性肺炎改变,2例CT示肺部毛玻璃状改变;CD4均小于200/μl;病原学诊断,4例镜检均观察到包囊,巢式PCR在550bp处检出相应条带;经复方新诺明治疗有效。结论AIDS的患者如CD4小于200/μl,有发热、咳嗽、呼吸困难等临床症状,应考虑PCP并及时做病原学检查。

生物医学中心大型仪器设备共享平台的建设与实践

大型仪器设备是高校提高教学科研水平和人才培养质量的重要条件,是反映学校的综合实力和办学水平的重要指标。随着高等教育的发展,高校大型仪器设备的类型和数量在不断增加,由此也带来了重复购置、利用率低等问题。建立大型仪器设备共享平台,科学管理大型仪器设备,优化平台运行机制和开放机制势在必行。青岛大学生物医学中心开展大型仪器设备开放共享平台的建设和实践,多举措强化大型仪器设备共享平台的建设,使平台仪器设备共享范围越来越广、开放服务日益扩展、使用机时大幅提升,提高了大型仪器设备的使用效率。

免疫抑制不同时间血液及BALF中细胞成分的变化与卡氏肺孢子虫及炎性细胞反应之观察

目的实验观察GC免疫抑制对卡氏肺孢子虫肺炎的发病影响。方法采用清洁级Wistar大鼠31只,26只大鼠每w 2次皮下注射地塞米松建立PCP模型,阴性对照组(5只),在第2、4、6、8w分别杀死大鼠,采集血液及BALF进行细胞计数并涂片分析血液和BALF中细胞成分。结果PCP大鼠血液中白细胞总数为(35.8±4.35)×109/L,淋巴细胞比例为(23.4±8.2)%,巨噬细胞数为(8.4±1.09)%,中性粒细胞比例为(68.2±8.35)%。PCP大鼠BALF中白细胞细胞总数为(35.24±8.10)×106/L,巨噬细胞比例为(84.9±2.49)%,淋巴细胞比例为(10.0±2.56)%,中性粒细胞比例为(5.1±1.73)%。结论PCP组中淋巴细胞减少是导致大鼠发生卡氏肺孢子虫感染的最关键的原因。大鼠BALF中巨噬细胞减少和功能减弱对卡氏肺孢子虫感染发生起主要帮助作用。中性粒细胞增加,推测和肺损伤有关。

恶性疟原虫AMA-1(Ⅲ)重组蛋白的免疫效应检测

目的探讨恶性疟原虫AMA-1(Ⅲ)重组蛋白的免疫活性。方法利用毕赤酵母高效表达系统分泌表达AMA-1(Ⅲ),表达产物用纯化后免疫新西兰兔,检测其血清中IgG滴度的变化,观察重组AMA-1(Ⅲ)免疫效应。结果重组AMA-1(Ⅲ)免疫后,ELISA检测新西兰兔血清中IgG滴度发现在3次免疫后OD490值明显高于佐剂免疫对照组(P<0.01)。结论AMA-1(Ⅲ)重组蛋白具有较好的免疫原性。