五种检测嵌合抗原受体表达方法的比较

比较检测新型嵌合抗原受体(CAR)的5种方法。通过慢病毒感染得到稳定表达嵌合抗原受体的细胞。使用免疫球蛋白G抗体染色、蛋白质L染色、绿色荧光蛋白共表达法、实时荧光定量PCR的绝对定量和相对定量法5种方法检测不同嵌合抗原受体在Jurkat细胞中的表达。成功构建6种CAR慢病毒表达载体(Meso-CAR、Met-CAR、R132H-CAR1-2-GFP、R132HCAR2-4-GFP、Dupixent-HL-CAR-GFP、Dupixent-LH-CAR-GFP),并得到其对应的CAR稳定表达Jurkat细胞。发现Meso-CAR和Met-CAR可同时用免疫球蛋白G抗体和蛋白质L染色鉴定其表达(免疫球蛋白G抗体染色效果较优),而其余4种CAR均不可以。对荧光法染色不可行的CAR可使用绿色荧光蛋白共表达法、实时荧光定量PCR的绝对定量和相对定量法间接检测CAR的表达,3种方法的结果之间存在一定的对应性。不同的CAR分子,可用不同方法确定细胞中CAR分子的表达情况。

高浓度钾离子对嵌合抗原受体CAR-T细胞扩增及功能的影响

目的探索高浓度钾离子条件对嵌合抗原受体(CAR)-T细胞的体外培养及杀伤能力的影响。方法体外使用间皮素特异靶向的嵌合抗原受体Meso-CAR改造T细胞,在激活或扩增阶段使用高浓度钾离子培养基,通过细胞计数、流式细胞术分析CD4^(+)和CD8^(+)T细胞扩增及PD-1细胞表面表达等情况,并通过荧光素酶检测细胞杀伤能力。结果高浓度钾离子不影响Meso-CAR CD4^(+)和CD8^(+)T细胞体外扩增,但可显著提升CAR-T细胞激活后表面PD-1的表达,并显著提高T细胞体外的杀伤能力。结论高浓度钾离子可以优化CAR-T细胞的体外改造并提高其杀伤能力。