猪传染性胸膜肺炎放线杆菌“菌影”的制备

本试验通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将该基因连接到含有λPL/PR-cI857启动阻遏系统的pBV220载体中,从而使裂解基因E和启动阻遏系统λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建重组质粒pBV-E。再将含有E基因的裂解盒插入到App-E.coli穿梭载体pGZRS-18中,构建胸膜肺炎放线杆菌打孔质粒。采用电击穿孔法将其转入胸膜肺炎放线杆菌中,含有打孔质粒的胸膜肺炎放线杆菌在28℃条件下生长到对数生长期,升温42℃诱导E基因的表达,制备了胸膜肺炎放线杆菌菌影。电镜观察菌影形态完整,内容物全部被释放到胞外。本试验为进一步研究菌影这一新型菌苗及佐剂奠定了基础。

细菌ghost疫苗的研究进展

用死的病原微生物接种动物能使机体产生抵抗病原体的免疫反应。作为疫苗的制作原则，用死的传染性病原体替代活的病原体已经得到广泛应用。死疫苗易通过化学或物理方法灭活病原菌制得。完整的死菌苗与亚单位疫苗相比有一个优势，即向免疫系统提呈排列复杂的抗原决定簇。

牛抗菌肽Bac7-Bac5融合基因在大肠杆菌中的过表达,纯化及抑菌活性

牛抗菌肽Bac7和Bac5是一种线性阳离子小分子多肽,在机体天然免疫和获得性免疫中都发挥着重要作用。根据Gen bank中公布的牛抗菌肽bac7和bac5成熟肽基因序列,人工合成了融合基因Bac7-Bac5片段,克隆于原核表达载体pET32(a+)中构建了重组表达载体pET-B7-B5,将其转化于E.coli BL21(DE3)中实现了重组蛋白B7-B5(rB7-B5)的过表达,表达的rB7-B5以包涵体形式存在,rB7-B5表达量约占细菌总蛋白的36.6%,分子量大小为33kDa,与预测大小相符。以8mol/L尿素变性包含体后用Ni亲和层析柱纯化目的蛋白,经多步透析法复性的rB7-B5对猪胸膜肺炎放线杆菌和耐药性大肠杆菌具有很好的抑菌活性,为新型抗菌制剂的研制和开发奠定了基础。

副猪嗜血杆菌菌影的制备

为研制副猪嗜血杆菌(H.parasuis)菌影疫苗,本实验通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将其连接到含有λPL/PR-cI857启动阻遏系统的pBV220载体中,使裂解基因E与λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建重组质粒pBV-E。并将含有E基因的裂解盒插入pMD18-T载体中,构建H.parasuis打孔质粒(pMD-E)。采用电击穿孔法将其转入E.coliβ2155中,利用接合的方式将打孔质粒转入H.parasuis 5型菌株中。将含有打孔质粒的H.parasuis在28℃培养至对数生长期,升温到42℃诱导E基因表达,制备H.parasuis菌影。电镜观察菌影形态完整,内容物全部被释放到胞外。本实验为进一步研究菌影疫苗奠定了基础。

猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型抑制消减杂交文库的构建和分析

为了研究猪传染性胸膜肺炎放线杆菌（APP）不同血清型之间的差异表达基因,采用抑制消减杂交（SSH）法,以APP血清7型DNA作为测试方（Tester）、APP血清1型DNA作为驱动方（Driver）,进行2轮杂交和2轮选择PCR扩增,将PCR扩增产物连接pMD18-T载体,筛选阳性克隆后进行测序和序列比对.结果显示,15个阳性克隆中的13个为已知序列,其同源性为88%～100%,2个为未知序列,其结构和功能还需进一步研究.首次构建了APP7的抑制消减杂交文库,为APP感染和致病机制的研究奠定了基础.

牛分枝杆菌融合基因hsp65-esat6的原核表达及产物的纯化

以牛分枝杆菌ValleeⅢ株基因组DNA为模板扩增hsp65和esat6基因,采用重叠延伸剪接技术(SOE)获得了融合基因hsp65-esat6,将hsp65-esat6连接到原核表达载体pET32a(+)上,构建重组质粒pET65-E6,将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,以IPTG诱导(终浓度为1 mmol/L),表达产物进行SDS-PAGE分析。以Ni2+亲和层析柱纯化表达的融合蛋白和Western-blot分析该融合蛋白的免疫活性。结果表明:Hsp65-ESAT6融合蛋白以包涵体形式表达。表达的融合蛋白裂解为两部分,即58 ku和30ku,二者相加与预测大小88 ku相符。纯化的融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生反应。

大肠杆菌“菌影”的制备

通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将该基因连接到含有PR/cI启动阻遏系统的pBV220载体中,从而使裂解基因E和启动阻遏系统λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建溶菌质粒pBV-E。采用CaCl2法将其转入大肠杆菌BL21(DE3),含有裂解质粒的大肠杆菌在28℃条件下生长到对数生长期,然后升温到42℃诱导其溶解,制成了大肠杆菌菌影。电镜观察发现菌影形态完整,内容物全部被释放到胞外。

牛分枝杆菌单基因及双价融合基因DNA疫苗免疫效果的研究

利用PCR技术和SOE技术扩增牛分枝杆菌ag85b、esat-6、hsp65、mpb64基因和ag85b-esat-6、hsp65-esat-6和mpb64-esat-6融合基因,连接真核表达载体pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCA、pCE6、pCH、pCM、pCAE、pCHE和pCME。转染SP2/0细胞,检测目的基因的表达。以各重组质粒和pCDNA3.1(+)及PBS免疫BALB/c小鼠后检测血清特异性抗体水平、脾淋巴细胞增殖情况和IFN～γ分泌情况。结果表明,7种重组质粒免疫后小鼠血清抗体水平持续上升,与pCDNA3.1(+)对照组和PBS对照组相比差异显著(P<0.05),其中pCA组血清抗体水平明显高于其他6种DNA疫苗免疫组(P<0.05);三免两周后,融合基因免疫组的刺激值(SI值)与单基因免疫组相比差异显著(P<0.05),其中以pCME组的SI值最高;PPD刺激后融合基因DNA疫苗免疫组小鼠脾细胞分泌的IFN～γ高于单基因DNA疫苗组(P<0.05),而两对照组则未检测到IFN～γ的产生。成功构建了牛分枝杆菌ag85b、esat-6、hsp65、mpb64单基因和ag85b-esat-6、hsp65-esat-6、mpb64-esat-6双价融合基因DNA疫苗,从而为牛结核病新型疫苗的研制奠定了基础。

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌基因组表达文库的构建及对小鼠的免疫保护作用研究

本研究应用限制性内切酶MboⅠ消化胸膜肺炎放线杆菌血清7型的基因组DNA,回收500bp～3000bp的片段,插入到真核表达载体pCDNA3.1(+)的BamHⅠ酶切位点构建重组质粒,电转化大肠杆菌TG1,获得胸膜肺炎放线杆菌的基因组表达文库(大约含有106个克隆)。将该文库随机分为10个亚文库(10个Clone pool),分别提取每个亚文库的重组质粒免疫小鼠(n=130只),免疫剂量为100μg,免疫3次后以1型胸膜肺炎放线杆菌进行攻毒,通过相对保护率、肺组织荷菌数、病理组织学3个指标测定其对小鼠的免疫保护作用。试验结果表明,Clone pool3、Clone pool2、Clone pool6和Clone pool7的免疫效果明显优于其他免疫组,尤其是Clone pool3的免疫保护效果最佳。本研究成功构建了7型胸膜肺炎放线杆菌的基因组表达文库,从而为筛选和获得新的保护性抗原基因奠定基础。

食管、胃同时原发癌4例报道

食管、胃同时原发癌４例报道滨海县人民医院病理科常月红建湖县人民医院病理科居会学食管癌和胄癌是我国许多地区常见的恶性肿瘤之一，发病有明显的地区分布特点，我科从１９９２～１９９４年统计胃癌４４５例和食管癌１５３例资料中，食管和胃同时原发癌仅４例，比较少见...

原发性胆囊癌8例的临床病理分析

原发性胆囊癌虽然比较少见，约占所有癌症之２８％，其症状、体征常与胆囊炎和胆结石相混淆，女性病人远较男性病人多，一般要多４～８倍。我科收集８例，现对其临床病理特点、预后及有关因素作一分析。１资料与方法本组从１９８８年１月～１９９３年底６年间我科共收集...

由解万有引力引出的推论

当求球壳对质点的引力时，有两种情况：质点在壳外，设壳的质量M，壳的中心到质点距离L，填补壳内部空腔，使之成为均匀实心球(总质量为M大)，则壳对质点的引力F等于实心球对其引力F1减去所填小球(其质量为M1)对其引力F2，即：

中国非遗传承与创新高峰论坛在北京举行

12月12日,由中国商报社、《中国收藏》杂志社、中国商业创新大会组委会主办,华夏文化促进会非物质文化遗产分会协办的“论非遗辉煌成就展非遗美好未来——中国非遗传承与创新发展高峰论坛”在北京友谊宾馆举行。200余位来自相关领域的专家学者、非遗传承人以及从业人士齐聚一堂,共同为非遗发展建言献策。

紫砂艺术行业平台要为紫砂艺术家做好服务

关于以《江苏陶瓷》杂志为核心，联合艺术大师、各地行业协会、相关高校等紫砂交流平台和学术精英、市场先锋、制造大户等所有一切紫砂艺术从业者，来建设一个紫砂艺术行业平台，在8月期《建立紫砂艺术行业平台势在必行》中已经做了分析，在10月期的《紫砂艺术行业平台的运作模式》中介绍了平台的运行模式，以盘活《江苏陶瓷》的作者群为出发点，设立一个不同于现有行业论坛的全国性论坛.

提升知识产权保护意识有利于紫砂艺术长期繁荣

关于中美贸易问题目前是一波三折,双方谈判团队非常努力,突然间美国总统特朗普一个推文就把两个国家精英组成的谈判团队的谈判成效归零,说是坐过山车也不为过。对于买进口电动车的中国消费者而言,一个变化车价相差几十万,对于任何消费者不是一个小数目。

非物质文化遗产世界行--中国紫砂壶洛杉矶展览侧记

经过近七个月的筹备，由美中交流促进会主办，世界名人俱乐部、世界青少年文学艺术联合会协办，世界文学艺术出版社、《世界非物质文化遗产系列丛书》编委会协办，笔者“非物质文化遗产世界行—中国紫砂壶”艺术作品展览会于2017年12月16日，在美国加州爱满地市(El:M〇nte)希尔顿花园酒店举行。

紫砂壶保健功能矿料的研究

1研究背景 随着经济收入的提高,人们对生活品质的要求也越来越高,健康作为生活品质中最核心的元素,政府和民间都把它列为重中之重,＂年轻时用健康换钱,老了用钱换健康＂不再是一个可持续发展的模式,也已经到了非要改变的时候,从各方面加强健康管理、提高保健意识成为保证生活品质的必需。

紫砂艺术家海外交流的黄金时代到了

前几期我对如何搭建紫砂艺术平台做了很多的设想和规划,随着时间的推移,很多设想和规划逐步得到了落实,一个行业平台的形成有助于推动紫砂艺术家创作,提升知名度和利益保障,并在国家文化建设中起到重要的作用。

常家庄园的茶商之路

晋商赚了钱就回到老家修院子,修的越大越觉得有成就感,,把它作为可以传承万代的丰碑,像常家（见图1）、乔家、王家、曹家、渠家等院落,成了晋商当年成功的标志。在这几大家中,又有所不同,目前留存的乔家、王家、曹家、渠家院落都称作大院,唯有常家院落被称作庄园,可见常家当年院落之大和不同。现存的常家庄园是指当年真正常家庄园的北院,南院毁于当年日本侵略者的轰炸。

快速定重心的数学方法

这里介绍两种快速确定均匀薄板重心的方法——巴普斯定理和作图法，供各位老师及同学们参考．