微小RNA-646对胶质母细胞瘤细胞系U251增殖和转移的影响

目的探讨微小RNA-646(miR-646)对胶质母细胞瘤细胞系U251增殖和转移的影响及机制。方法2014年1月至2016年1月,从成都市第六人民医院采集14对神经胶质瘤病人肿瘤组织样本和相邻的非肿瘤样本,并于2018年5月至2019年5月,体外培养正常星形胶质细胞HNAs和人胶质母细胞瘤细胞系SHG44、A172和U251,实时荧光定量PCR检测miR-646在胶质瘤组织、胶质瘤细胞SHG44、A172和U251中的表达。将体外培养的U251细胞分为模拟物对照组、miR-646模拟物组、抑制剂对照组、miR-646抑制剂组、miR-646模拟物+叉头框K1过表达质粒(pcDNA-FOXK1)组和miR-646模拟物+pcDNA组,采用实时荧光定量PCR检测细胞中miR-646表达,检测细胞增殖、侵袭和迁移能力,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中叉头框K1(FOXK1)和上皮间质转化相关蛋白表达。双萤光素酶报告基因实验检测miR-646与FOXK1的靶向关系。结果与正常脑组织相比,胶质瘤组织中miR-646表达水平(0.36±0.03比1.00±0.06)显著降低(P<0.05);与正常星形胶质细胞相比,胶质瘤细胞SHG44、A172和U251中miR-646表达水平(0.54±0.04、0.63±0.06、0.38±0.04比1.00±0.08)显著降低(P<0.05)。与模拟物对照组相比,转染miR-646模拟物可明显上调U251细胞中miR-646表达(5.28±0.53比1.00±0.11)和上皮钙黏素(E-cadherin)蛋白水平,减弱细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力,抑制FOXK1(0.28±0.03比0.51±0.04)、神经钙黏素(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达(P<0.05);与抑制剂对照组相比,转染miR-646抑制剂可得到与miR-646模拟物处理相反的结果(P<0.05);与miR-646模拟物+pcDNA相比,miR-646模拟物+pcDNA-FOXK1组可明显提高U251细胞的增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力(P<0.05)。结论miR-646可抑制U251细胞增殖和转移,其作用机制可能与靶向调控FOXK1表达有关。