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稳定表达猪δ冠状病毒S1蛋白CHO细胞系的构建与鉴定
1
作者
孙雪珂
丁培阳
+6 位作者
王思桥
刘思源
李明慧
常泽杰
陈艺兰
李瑞琪
张改平
《河南农业科学》
北大核心
2023年第6期131-138,共8页
为构建稳定表达猪δ冠状病毒(PDCoV)S1蛋白的CHO细胞系,利用电转染技术将重组质粒pCGS3-S1转染至CHO细胞,通过有限稀释法筛选稳定表达重组S1蛋白的单克隆细胞系。利用阴离子交换层析和凝胶过滤层析方法对重组S1蛋白进行纯化,采用间接EL...
为构建稳定表达猪δ冠状病毒(PDCoV)S1蛋白的CHO细胞系,利用电转染技术将重组质粒pCGS3-S1转染至CHO细胞,通过有限稀释法筛选稳定表达重组S1蛋白的单克隆细胞系。利用阴离子交换层析和凝胶过滤层析方法对重组S1蛋白进行纯化,采用间接ELISA方法检测重组S1蛋白活性。将纯化的重组S1蛋白免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA、间接免疫荧光试验(IFA)及病毒中和试验对重组S1蛋白免疫原性进行检测。结果显示,稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO细胞系成功建立,并获得了纯度高于90%、产量为28.5 mg/L的重组S1蛋白;且重组S1蛋白与PDCoV阳性血清反应性良好,具有良好的免疫原性,中和效价为1∶128。综上,成功建立了稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO细胞系,且纯化获得的重组S1蛋白具有良好的生物学活性。
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关键词
猪δ冠状病毒
S1蛋白
CHO细胞
稳定表达
蛋白质纯化
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职称材料
非洲猪瘟病毒H240R蛋白单克隆抗体的筛选与鉴定
2
作者
张宁
丁培阳
+5 位作者
任东娜
陈艺兰
李雪洋
常泽杰
李青梅
张改平
《动物医学进展》
北大核心
2022年第8期1-6,共6页
为制备抗非洲猪瘟病毒(ASFV)H240R蛋白单克隆抗体,首先构建原核表达质粒pET-29b-H240R,再进行蛋白表达与纯化,随后免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤细胞技术制备、间接ELISA方法筛选获得单克隆抗体。结果显示,共获得4株杂交瘤细胞株,腹水效价...
为制备抗非洲猪瘟病毒(ASFV)H240R蛋白单克隆抗体,首先构建原核表达质粒pET-29b-H240R,再进行蛋白表达与纯化,随后免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤细胞技术制备、间接ELISA方法筛选获得单克隆抗体。结果显示,共获得4株杂交瘤细胞株,腹水效价均高于1∶40000;亚型鉴定结果显示,3株单克隆抗体(12D6、21G3、8G7)重链亚类为IgG2b,13D2重链亚类为IgG1,轻链亚类均为k。Western blot和Dot blot鉴定结果表明,21G3、13D2株单克隆抗体识别的抗原表位为线性表位,而12D6和8G7识别的是构象表位。间接免疫荧光试验(IFA)结果显示,4株单克隆抗体均能特异性识别HEK293T细胞中表达的H240R蛋白。制备了ASFV H240R蛋白单克隆抗体,为H240R蛋白的表位和功能研究奠定了基础。
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关键词
非洲猪瘟病毒
H240R蛋白
单克隆抗体
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职称材料
题名
稳定表达猪δ冠状病毒S1蛋白CHO细胞系的构建与鉴定
1
作者
孙雪珂
丁培阳
王思桥
刘思源
李明慧
常泽杰
陈艺兰
李瑞琪
张改平
机构
河南农业大学生命科学学院
河南省农业科学院动物免疫学重点实验室
郑州大学生命科学学院
江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心
出处
《河南农业科学》
北大核心
2023年第6期131-138,共8页
基金
河南省重大科技专项(221100110600)。
文摘
为构建稳定表达猪δ冠状病毒(PDCoV)S1蛋白的CHO细胞系,利用电转染技术将重组质粒pCGS3-S1转染至CHO细胞,通过有限稀释法筛选稳定表达重组S1蛋白的单克隆细胞系。利用阴离子交换层析和凝胶过滤层析方法对重组S1蛋白进行纯化,采用间接ELISA方法检测重组S1蛋白活性。将纯化的重组S1蛋白免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA、间接免疫荧光试验(IFA)及病毒中和试验对重组S1蛋白免疫原性进行检测。结果显示,稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO细胞系成功建立,并获得了纯度高于90%、产量为28.5 mg/L的重组S1蛋白;且重组S1蛋白与PDCoV阳性血清反应性良好,具有良好的免疫原性,中和效价为1∶128。综上,成功建立了稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO细胞系,且纯化获得的重组S1蛋白具有良好的生物学活性。
关键词
猪δ冠状病毒
S1蛋白
CHO细胞
稳定表达
蛋白质纯化
Keywords
PDCoV
S1 protein
CHO cells
Stable expression
Protein purification
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
非洲猪瘟病毒H240R蛋白单克隆抗体的筛选与鉴定
2
作者
张宁
丁培阳
任东娜
陈艺兰
李雪洋
常泽杰
李青梅
张改平
机构
西北农林科技大学动物医学院
河南省农业科学院动物免疫学重点实验室
郑州大学生命科学学院
河南农业大学动物医学院
出处
《动物医学进展》
北大核心
2022年第8期1-6,共6页
基金
国家自然科学基金专项项目(31941001)。
文摘
为制备抗非洲猪瘟病毒(ASFV)H240R蛋白单克隆抗体,首先构建原核表达质粒pET-29b-H240R,再进行蛋白表达与纯化,随后免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤细胞技术制备、间接ELISA方法筛选获得单克隆抗体。结果显示,共获得4株杂交瘤细胞株,腹水效价均高于1∶40000;亚型鉴定结果显示,3株单克隆抗体(12D6、21G3、8G7)重链亚类为IgG2b,13D2重链亚类为IgG1,轻链亚类均为k。Western blot和Dot blot鉴定结果表明,21G3、13D2株单克隆抗体识别的抗原表位为线性表位,而12D6和8G7识别的是构象表位。间接免疫荧光试验(IFA)结果显示,4株单克隆抗体均能特异性识别HEK293T细胞中表达的H240R蛋白。制备了ASFV H240R蛋白单克隆抗体,为H240R蛋白的表位和功能研究奠定了基础。
关键词
非洲猪瘟病毒
H240R蛋白
单克隆抗体
Keywords
African swine fever virus
H240R protein
mAbs
分类号
S852.651 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
稳定表达猪δ冠状病毒S1蛋白CHO细胞系的构建与鉴定
孙雪珂
丁培阳
王思桥
刘思源
李明慧
常泽杰
陈艺兰
李瑞琪
张改平
《河南农业科学》
北大核心
2023
0
下载PDF
职称材料
2
非洲猪瘟病毒H240R蛋白单克隆抗体的筛选与鉴定
张宁
丁培阳
任东娜
陈艺兰
李雪洋
常泽杰
李青梅
张改平
《动物医学进展》
北大核心
2022
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
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参考文献
引证文献
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