海地瓜岩藻聚糖与硫酸软骨素双水相分离方法的研究

目前海参中的岩藻聚糖与硫酸软骨素的简便分离方法较少,该研究拟建立一种双水相分离方法用于海参中的岩藻聚糖与硫酸软骨素的简便高效分离。以海地瓜岩藻聚糖和海地瓜硫酸软骨素为研究材料,以分配系数、回收率为评价指标,进行单因素试验,分别考察盐种类、聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)分子质量、pH、PEG质量分数和K_(2)HPO_(4)质量分数对海地瓜岩藻聚糖及海地瓜硫酸软骨素在双水相体系中分配行为的影响。结果表明,PEG 6000-K_(2)HPO_(4)双水相体系可以分离海地瓜中的岩藻聚糖与硫酸软骨素,其中岩藻聚糖集中分配于上相,硫酸软骨素集中分配于下相。最佳分离条件为PEG 6000的质量分数为15%,K_(2)HPO_(4)的质量分数为10%。此条件下,海地瓜中的岩藻聚糖在该体系的分配系数为6.36,在上相的回收率为(86.92±0.97)%;硫酸软骨素在该体系的分配系数为16.53,在下相的回收率为(106.47±1.84)%。该研究建立的方法分离效果良好且简便快捷,具有良好的应用前景。

超高压处理对南美白对虾在冷藏过程中贮藏特性的影响

该文以不同的超高压条件(200,400,600,700MPa)对南美白对虾进行处理,通过考察与比较不同压力处理组冷藏过程中感官、微生物以及各化学指标的变化情况,揭示超高压技术对南美白对虾冷藏特性的影响。结果表明:超高压处理可以有效地杀灭南美白对虾中绝大多数微生物,抑制贮藏过程中挥发性盐基氮的积累,延缓pH值的变化,从而延长南美白对虾的货架期,且处理压力越高延长效果越显著;超高压处理会给鲜虾带来不同程度上的煮熟虾的风味;400MPa和600MPa处理使虾在冷藏过程的黑变提前,而700MPa处理可以完全抑制南美白对虾黑变现象的发生;超高压能够改变腺苷三磷酸(ATP)及其代谢产物的代谢情况,但不影响腺苷酸(AMP)的代谢途径。因此超高压处理可以改善南美白对虾在冷藏过程中的品质,对南美白对虾冷藏具有潜在的应用价值。

金枪鱼鱼片中碳氧肌红蛋白含量的测定

目的:建立一种测定金枪鱼鱼片中碳氧肌红蛋白含量的方法。方法:用磷酸缓冲液将肌红蛋白提取出来,加入联二亚硫酸钠将其还原成由脱氧肌红蛋白(Mb)及碳氧肌红蛋白(MbCO)组成的双组分系统,用分光光度计进行比色。根据Mb及MbCO的光学性质,利用比尔定律,求出碳氧肌红蛋白的含量。结果:得出了金枪鱼鱼片中MbCO含量的计算公式。重复测定同一样本,变异系数为2.0%。将实测值与标准值做相关分析,相关系数为0.9998。结论:该法测金枪鱼鱼片中MbCO含量准确、可靠,适用于一般的常规测定。

鲍鱼热风、晾晒干燥的比较试验

以鲍鱼为原材料进行热风干燥和室外晾晒干燥试验,通过探究两种干燥方式的干燥速率以及干燥样品色泽、风味成分和微观结构变化的差异,对两种干燥方式进行对比。结果表明:热风、晾晒干燥过程都先经历短时升速干燥阶段,然后进入降速阶段;完成干燥所需的时间,热风干燥约为晾晒干燥的一半;两种干燥方式均使水煮鲍鱼的呈味氨基酸含量显著上升,且热风干鲍较晾晒干鲍更具优势。两种干鲍微观结构差异较大,晾晒样品肌纤维收缩均匀、结构致密,热风干燥样品肌纤维收缩剧烈、组织构造较松散;热风干燥褐变反应比晾晒样品明显。相较于传统的自然晾晒方式,热风干燥具有优势,是一种良好的替代方法。

4种海参中含岩藻糖支链的硫酸软骨素化学组成差异的分析

提取了4种海参中的粗多糖,通过DEAE-52阴离子交换柱分离纯化,结合紫外吸收、苯酚-硫酸法检测,得到海参硫酸软骨素(SC-CHS)和海参岩藻聚糖硫酸酯(SC-FUC)2个组分。对所得SC-CHS采用高效凝胶过滤色谱法(HPSEC)和醋酸纤维薄膜电泳鉴定纯度,结果表明4种海参的SC-CHS均为单一组分的多糖。分别采用离子色谱法和柱前衍生高效液相色谱法测定4种SC-CHS的硫酸基含量和单糖组成。结果表明,不同SC-CHS中硫酸基含量均在30%左右,且稍有差异,不同SC-CHS中葡萄糖醛酸、乙酰氨基半乳糖和岩藻糖的摩尔比存在显著差异。

海参主要活性成分对大鼠脂质代谢影响的比较研究

目的:研究海参及其所含各主要活性成分对正常大鼠脂质代谢的影响。方法:将Wistar大鼠随机分为7组:正常对照组、整参组、皂苷组、多糖组、胶原多肽组、除皂苷残余物组和残渣组。连续饲喂28d,分别测定大鼠血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density li-poprotein-cholesterol,HDL-C)含量,以及肝脏TC、TG、磷脂(phospholipid,PL)含量。并检测了皂苷、多糖对脂肪酸合成酶(FAS)活性的抑制作用。结果:海参可抑制体内脂肪囤积,显著降低肾周脂肪含量。海参还可明显降低血清和肝脏中TC、TG浓度,以皂苷、多糖的效果最佳。另外,海参皂苷、多糖对FAS具有直接抑制作用,且皂苷抑制效果更强。结论:海参中的主要活性成分对大鼠脂肪代谢影响明显不同,皂苷降脂效果优于多糖。

海参岩藻聚糖硫酸酯抑制小鼠肿瘤生长和转移及其作用机制的研究

目的探讨海参岩藻聚糖硫酸酯(sea cucumber fu-coidan,SC-FUC)对小鼠肿瘤生长和转移的抑制作用及其机制。方法建立C57 BL/6J小鼠Lewis肺癌自发性肺转移模型,连续腹腔注射给药21 d,剥离原位肿瘤和双侧肺,分别称瘤重和计数肺表面转移灶结节数;采用RT-PCR法检测肿瘤组织中缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、乙酰肝素酶(heparanase,HPA)和基质金属蛋白酶-2/9(matrix metalloproteinase-2/9,MMP-2/9)mRNA的表达。结果 SC-FUC可以抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,其平均抑制率为45.5%,并可以减少肺表面转移灶结节数(P<0.01),平均抑制率为66.0%。SC-FUC可以降低荷瘤小鼠肿瘤组织中HIF-1α、VEGF、HPA、MMP-2/9 mRNA的表达(P<0.05,P<0.01)。结论 SC-FUC能抑制肿瘤细胞在小鼠体内的生长和转移,其机制可能与抑制肿瘤血管新生,降低肿瘤细胞的迁移能力有关。

海地瓜多糖中蛋白含量测定方法比较

比较4种常用的蛋白定量方法来测定海参多糖中蛋白含量,建立海参多糖中蛋白含量的测定方法。氨基酸组成折算出海地瓜多糖中蛋白含量为(5.06±0.31)%,将此结果作为其他测定方法比较的标准。采用4种常用的蛋白定量方法:Folin-酚法、BCA法、考马斯亮蓝法、荧光光度法进行测定,对测定结果进行比较分析。Folin-酚法、BCA法、荧光光度法测定多糖中蛋白含量分别为(4.92±0.20)%、(6.29±0.51)%、(3.88±0.25)%。考马斯亮蓝在反应中不显色,此法检测不出多糖中蛋白。经比较分析,Folin-酚法精确度高,重现性好,测定时间短,操作简便,对仪器要求低,可以准确简便地测定海地瓜多糖中蛋白含量。

海参岩藻聚糖硫酸酯对巨噬细胞的调节作用及信号通路研究

目的研究海参岩藻聚糖硫酸酯(SC-FUC)对巨噬细胞的调节作用及相关信号通路,探究其调节机体免疫的作用机制。方法噻唑蓝(MTT)比色法检测巨噬细胞的增殖情况;中性红法检测吞噬活性;Griess试剂法测定培养上清液中NO含量;RT-PCR检测巨噬细胞下游细胞因子IL-6、IL-10、Toll样受体和相关信号分子My D88、TRIF、NF-κB的mRNA表达量。结果 SC-FUC对巨噬细胞增殖、吞噬能力和NO分泌均有促进作用,在作用前期(6h和12h)效果更为明显。SC-FUC能上调细胞因子IL-6和IL-10的mRNA表达量,上调TLR4、TLR5、TLR9的表达量,促进信号分子My D88、TRIF和NF-κB的mRNA表达量。结论 SC-FUC能够激活巨噬细胞,促进其分泌NO、IL-6、IL-10等细胞因子,从而发挥免疫调节作用。SC-FUC激活巨噬细胞的信号通路与细胞表面TLR4、TLR5、TLR9及NF-κB通路相关。

海参硫酸软骨素对大鼠酒精性胃溃疡的保护作用

目的:探讨海参硫酸软骨素对大鼠酒精性胃溃疡的保护作用。方法:将32只大鼠随机分为4组:模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。采用酒精诱导胃溃疡模型,检测胃溃疡出血情况、溃疡指数、胃溃疡发生率及胃溃疡病灶部位组织学观察。结果:与模型组相比,低、中、高剂量对胃出血面积、溃疡指数均具有不同程度的降低作用。结论:海参硫酸软骨素能够明显降低大鼠胃的出血情况和溃疡面积,对胃溃疡有良好的防治作用。

超高压对鳀鱼蛋白水解的影响

探讨能否利用超高压技术抑制微生物的生长,实现低盐短时发酵,从而改善鱼露的生产工艺。以水解液总氮含量、α-氨基氮及游离氨基酸组成成分等为指标,研究了超高压在鳀鱼自身降解过程中所起的作用,同时讨论了超高压下添加盐、外源酶对超高压作用效果的影响。结果表明,100 MPa的压力有利于鳀鱼内源酶对鳀鱼蛋白的水解,且从氨基酸组成看,超高压技术的采用对食品营养无破坏作用;外加风味蛋白酶(flavourzyme)对高压助水解效果有加强作用;但超高压下,盐的添加使水解程度有所下降.在4种超高压作用条件中,添加0.1%风味蛋白酶(flavourzyme)可得到最大水解度,为34.45%。

3种低值海参中海参多糖的提取分离及化学组成研究

海参是我国重要的经济水产品,具有多种营养及生理调节功能。海参多糖是海参的主要功效成分之一。文中以3种低值海参-黄玉参(Stichopus naso)、沙参(Holothuria floridana)及土耳其参(Holothuria tubulosa)为实验原料,在利用分子生物学方法确认其种属的基础上,提取其中的海参多糖,并利用阴离子交换层析分离纯化出海参硫酸软骨素及海参岩藻聚糖硫酸酯2种组分。分别采用柱前衍生-HPLC法、离子色谱法及高效凝胶排阻色谱法分析各样品的单糖组成、硫酸根含量及分子质量。结果表明:海参多糖及其组分的化学组成随海参来源的不同而存在差异。

北大西洋瓜参岩藻聚糖硫酸酯分离纯化及结构分析

目的:从北大西洋瓜参(Cucumaria frondosa)体壁中提取纯化得到一种北大西洋瓜参岩藻聚糖硫酸酯(CF-FUC),并对其结构特征进行研究。方法:利用阴离子交换层析和凝胶过滤层析纯化出CF-FUC组分,以高效凝胶过滤色谱法测定分子质量,以离子色谱法测定硫酸根含量,以柱前衍生高效液相色谱法测定单糖组成,并通过核磁共振技术推测其精细结构。结果:CF-FUC的分子质量为360kD,硫酸根含量为(29.8±3.2)%,单糖组成为岩藻糖、半乳糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖物质的量比为1:0.22:0.07:0.07,岩藻糖存在两位硫酸酯化α型吡喃岩藻糖及非硫酸酯化α型吡喃岩藻糖两种形式。结论:CF-FUC结构有别于其他海参岩藻聚糖硫酸酯(SC-FUC)。

三种低氟南极磷虾肽的ACE抑制作用及抗氧化活性研究

以高效回收脱脂磷虾粉中的蛋白质为出发点,以低氟南极磷虾肽的制备为切入点,旨在通过探究不同磷虾肽的基本性质及体外功能活性,为磷虾肽的应用奠定理论基础。研究以脱脂南极磷虾粉为原料,以三种蛋白酶为水解酶,经酶解、脱氟、脱盐、干燥制备得到三种低氟磷虾肽。通过对三种磷虾肽的得率、基本组成、分子量分布及红外光谱进行分析,评估三种磷虾肽制备工艺的可行性及产物的基本性质。通过对三种产物的体外ACE抑制作用及抗氧化活性进行测定,比较三种磷虾肽的体外功能活性。结果表明,三种磷虾肽的回收率高、蛋白质含量高、分子量集中分布在200~2000 u范围内;中性蛋白酶水解肽和碱性蛋白酶水解肽的ACE抑制作用显著优于胰蛋白酶水解肽（p〈0.05）,胰蛋白酶水解肽的抗氧化活性显著高于中性蛋白酶水解肽和碱性蛋白酶水解肽（p〈0.05）;磷虾肽的体外活性与其氨基酸组成、分子量分布和二级结构相关。

高温1HNMR鉴别8种海参硫酸软骨素

提取了8种海参中的粗多糖,经DEAE-52阴离子交换柱分离纯化得到其中的海参硫酸软骨素(SC-CHS),除日本刺参CHS外其余均为首次获得的海参多糖。对获得的SC-CHS进行分子量、单糖组成及硫酸基含量等基本性质分析后,利用高温1HNMR对SC-CHS结构进行初步鉴别。结果表明,高温条件下SC-CHS的1HNMR图谱具有较好的分辨度。对其支链硫酸化岩藻糖的异头氢进行归属和比较,并以此为指标鉴别不同种类海参硫酸软骨素的结构差异,建立了一种以海参硫酸软骨素结构特征为指标的海参指纹图谱;初步探讨了不同海域生长的海参中硫酸软骨素支链岩藻糖硫酸基的特点,比较发现:寒带海域海参的硫酸软骨素岩藻糖上硫酸基取代以2,4-di OSO3、3,4-di OSO3双取代为主,含部分4-OSO3单取代;温带海域海参以2,4-di OSO3双取代为主,含部分4-OSO3单硫酸基取代;热带亚热带海域海参以2,4-di OSO3双取代和4-OSO单取代为主。这将为海参构效关系的进一步分析鉴定提供理论依据。

仿刺参肠道多糖的纯化及理化分析

目的:对仿刺参肠道多糖进行纯化,并对纯化产物进行理化分析。方法:使用葡聚糖凝胶(G-100)层析柱分离出两种仿刺参肠道多糖,选取其中多糖A进行研究。使用葡聚糖凝胶(G-100)柱层析法和琼脂糖凝胶电泳法进行纯度检测,葡聚糖凝胶(G-200)柱层析测定分子质量,高效液相色谱法确定其单糖组分,并结合红外吸收光谱法与核磁共振对其结构进行初步检测。结果:实验所得纯化产物多糖A为均一组分,主要含有氨基糖醛酸、氨基半乳糖盐酸盐和岩藻糖3种单糖,并含有少量的氨基葡萄糖、半乳糖。其中岩藻糖有α和β两种构型,以α-岩藻糖硫酸酯残基、β-岩藻糖硫酸酯残基形式存在。分子质量约为18.8×104D。结论:该纯化产物多糖A为一种酸性多糖,推测其为硫酸软骨素类。

海地瓜硫酸软骨素对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响

目的研究海地瓜硫酸软骨素(Acaudina Molpadioideschondroitin sulfate,AM-CHS)对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响,并探讨其作用机制。方法采用传统的鸡尾酒诱导剂诱导分化3T3-L1前脂肪细胞,以MTT法检测AM-CHS对3T3-L1前脂肪细胞及不同分化阶段3T3-L1细胞增殖活性的影响;分别采用油红O染色和甘油三酯(triglycerides,TG)含量测定法评价其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。采用RT-PCR法检测脂肪细胞中过氧化物酶体增殖体激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptors gamma,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer bind-ing protein alpha,C/EBPα)、固醇调节元件结合蛋白-1c(ste-rol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)等分化相关基因的mRNA表达水平。结果 AM-CHS能明显抑制3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞的增殖,抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化过程,以对分化早期的抑制作用最强。RT-PCR结果表明,AM-CHS能明显降低脂肪细胞PPARγ、C/EBPα和SREBP-1c mRNA的表达。结论海地瓜AM-CHS能明显抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖和分化,其作用机制与下调分化相关基因PPARγ、C/EBPα和SREBP-1c的表达有关。

液相色谱-串联质谱法测定海参和海胆中的单唾液酸神经节苷脂

建立液相色谱－四极杆串联质谱法定量检洲海参和海胆中单唾液酸神经节苷脂的分析方法，采川Sven－nerhohu法从海肌或海参样中提取神经节苷脂，经c8引相萃取柱净化，采用APS－2NH，柱（150mill×2．1mｍ，3μm）．以已腑和50mmol／L乙酸铵溶液（pH5．6）为流动相．梯度洗脱。样品中每种成分的定量在多反应监测模式下进行、该方法具有极高的灵敏度，定量限可低至纳克级。非硫酸酯化单唾液酸神经节汗脂（NMG）和硫酸哺化单唾液酸神经节苷脂（SMG）在1～40ng进样垃范剧内毕现良好的线性关系；定昔结果显示所测海参样品中美国红参的NMG龠艟最商，海胆样品中紫海胆的SMG含菌最高；海胆中总的单唾液酸神经节苷脂含量（4．30～6．40mg／g）明显高于各海参样品（8～J31μg／g）。该方法稳定可靠。

反相高效液相色谱法测定蛹虫草中腺苷和虫草素的含量

建立一种新的反相高效液相色谱方法,用于蛹虫草中腺苷和虫草素的定性定量分析。样品经水超声提取,以终浓度20mmol/L柠檬酸、40mmol/L醋酸、20mmol/L三乙胺的混合溶液-乙腈(体积比98:2)为流动相,流速1.0mL/min,色谱柱CapcellpakC18(150mm×4.6mm,5μm)分离,柱温40℃,进样量10μL,紫外检测波长260nm。在此条件下,腺苷在1～1000μg/mL范围内有良好的线性关系(Y=33574X+54.526,R2=0.9999),检测限0.2μg/mL,回收率93.75%～96.90%,RSD为0.116%;虫草素在2～1000μg/mL范围内有良好的线性关系(Y=34385X+23.103,R2=1.0000),检测限0.2μg/mL,回收率92.03%～97.35%,RSD为0.104%。该方法样品处理简便、分离度高、杂质干扰小、回收率高、重复性好,能够对蛹虫草中腺苷和虫草素进行准确的定性定量分析。

细菌Flavobacteriaceae sp. CZ1127产海参岩藻聚糖硫酸酯酶的发酵条件优化

以从海洋中分离筛选得到的细菌Flavobacteriaceae sp.CZ1127为研究对象,通过单因素实验和正交试验对其产海参岩藻聚糖硫酸酯酶的培养基成分进行优化,提高其产酶量。得出其最佳培养基组成为(w/v):海参岩藻聚糖硫酸酯0.25%、酵母粉0.15%、MgSO4.7H2O 0.05%、CaCl2 0.02%、KCl 0.01%、Na2HPO4 0.22%、NaH2PO4 0.06%、NaCl 2.5%;确定了该菌株的最佳培养条件为:500 mL的三角瓶装液150 mL、温度为25℃、转速150 r/min、发酵时间为48 h。优化后,海参岩藻聚糖硫酸酯酶活力为22.88 U/mL,比优化前提高了3.01倍。