基于结核杆菌耐热抗原小分子多肽刺激人外周血T细胞产生TNF-α和IFN-γ鉴别肺结核和潜伏性结核感染

目的研究结核杆菌耐热抗原小分子多肽(Mtb-HAg-10k)刺激人外周血T细胞产生细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的作用特点及肺结核患者和潜伏性感染者IFN-γ产生细胞的数量差异,初步探讨Mtb-HAg-10k作为诊断抗原鉴别肺结核和潜伏性结核感染的可行性。方法以超滤离心法获得的Mtb-HAg-10k为刺激剂作用于人外周血单个核细胞(PBMCs),并以Mtb-HAg、植物血凝素PHA作为对照,用多色流式细胞术检测T细胞亚群中TNF-α和IFN-γ产生细胞比例,酶联免疫斑点法检测肺结核患者和潜伏性感染者PBMCs中IFN-γ产生细胞数量。结果流式细胞术检测人外周血Mtb-HAg-10k特异性γδT细胞中TNF-α产生细胞比例显著高于IFN-γ产生细胞比例(P<0.01);与PHA刺激组相比,γδT细胞中TNF-α和IFN-γ产生细胞比例增高(P<0.01),而αβT细胞中TNF-α和IFN-γ产生细胞比例显著降低;酶联免疫斑点法检测Mtb-HAg-10k刺激的健康者PBMCs中IFN-γ产生细胞数量低于Mtb-HAg刺激组和PHA对照组(P<0.01);肺结核患者IFN-γ产生细胞数量低于潜伏性结核感染者(P<0.01)。结论以Mtb-HAg-10K为刺激剂可使人外周血γδT细胞优势产生TNF-α和IFN-γ,通过酶联免疫斑点法检测PBMCs中IFN-γ产生细胞数量差异有助于鉴别肺结核和潜伏性结核感染。

地塞米松对MRL/lpr狼疮小鼠认知功能的保护作用

目的:探讨地塞米松对MRL/lpr狼疮小鼠认知功能的影响。方法:MRL/lpr狼疮小鼠随机分为MRL/lpr组、MRL/lpr+地塞米松(1.5 mg/kg)组,每组10只;野生型正常对照组C57BL/6小鼠10只。采用Morris水迷宫观察各组小鼠认知功能和行为。检测各组小鼠血清、海马组织中炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)含量;检测各组小鼠海马组织中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/核因子-κB p65(nuclear factor-kappabinding p65,NF-κB p65)相关蛋白P-PI3K,P-Akt和磷酸化核转录因子κB抑制蛋白a(phospho-inhibitor of nuclear factor kappa Ba,P-IκBa)及P-NF-κB p65的表达。免疫组织化学法观察各组小鼠海马区P-NF-κB p65阳性表达。结果:地塞米松能缓解MRL/lpr狼疮小鼠认知功能障碍,降低血清及海马组织IL-6,IL-1β,TNF-α的表达;抑制P-PI3K,P-Akt,P-IκBa和P-NF-κB p65的表达。结论:地塞米松可能通过降低MRL/lpr狼疮小鼠海马区TNF-α和IL-1β水平,从而对其认知功能起保护作用。

重组人生长激素对人胃癌MGC803细胞生长的影响

目的探究重组人生长激素(rhGH)对人胃癌MGC803细胞生长的影响。方法采用Western blot法检测MGC803与MKN45两种胃癌细胞生长激素受体(GHR)蛋白的表达以及实时定量PCR(qRT-PCR)法检测二者GHR mRNA的相对表达量。采用MTT法检测在无血清同步24 h、3%胎牛血清(FBS)给药培养基条件下,不同浓度rh GH作用不同时间对MGC803细胞增殖的影响。采用流式细胞术及Western blot法测定不同浓度的rh GH对MGC803细胞周期及相关信号通路节点蛋白表达的影响。结果 Western blot与qRT-PCR结果表明,MGC803细胞在蛋白以及mRNA水平都被验证为GHR阳性表达的细胞株,具有发挥作用的生物学基础。MTT结果表明,在含3%FBS的给药培养基条件下,不同浓度的rh GH对MGC803细胞有促增殖作用,但不同rh GH浓度组之间差异无统计学意义。细胞周期的结果表明,与对照组比较,rh GH给药组增殖指数(PI)升高。Western blot结果显示,在rh GH作用下,磷酸化酪氨酸蛋白激酶2(p-JAK2)、磷酸化信号转导和转录活化因子3(p-STAT3)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)等信号蛋白表达上调。结论在3%FBS培养条件下,rh GH促进MGC803细胞增殖,与激活JAK2-STAT3通路、上调下游p-AKT及p-ERK的表达有关。

嗜乳脂蛋白3A1(BTN3A1)促进结核杆菌耐热抗原诱导的人外周血Vγ9Vδ2 T细胞活化增殖

目的初步探讨嗜乳脂蛋白3A1(BTN3A1)在结核杆菌耐热抗原(MTB-HAg)诱导的人外周血Vγ9Vδ2 T细胞活化增殖中的作用。方法人外周血单个核细胞(PBMC)先加BTN3A1阻断性抗体作用3 h,再分别用MTB-HAg和磷酸类抗原(PAg)刺激培养24 h后收集细胞,用流式细胞术检测Vγ9Vδ2 T细胞中CD69表达;或刺激20 h后收集细胞,检测Vγ9Vδ2 T细胞中1型辅助性T(Th1)细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)产生细胞比例;或刺激后,在含白细胞介素2(IL-2)培养液中培养10 d后,收集细胞检测Vγ9Vδ2 T细胞扩增比例及增殖活性。结果MTB-HAg刺激后,Vγ9Vδ2 T细胞中CD69平均荧光强度和阳性细胞比例在BTN3A1阻断组均明显下降(为刺激组的13.84%和43.00%);而PAg阻断组的CD69平均荧光强度和阳性细胞比例显著被抑制(为刺激组的3.10%,4.47%和9.53%,10.91%)。MTB-HAg刺激后Vγ9Vδ2 T细胞中IFN-γ和TNF-α产生细胞比例在BTN3A1阻断组显著减少,Vγ9Vδ2 T细胞扩增数量和细胞增殖活性在BTN3A1阻断组也显著减少或降低。与PAg阻断组明显被抑制的结果相似。结论BTN3A1促进MTB-HAg诱导的外周血Vγ9Vδ2 T细胞活化增殖。

原花青素B2通过调控P13K/Akt/Nrf2信号通路减轻氯氰菊酯所致神经元损伤

目的探讨原花青素B2(PCB2)是否通过调控P13K/Akt/Nrf2信号通路保护氯氰菊酯(CYP)导致的神经元氧化损伤。方法原代培养C57BL/6小鼠大脑皮层神经元,将细胞随机分成5组:正常对照组;PCB2处理组(将5μg/mL的PCB2与细胞共培养24 h);CYP暴露组(将50μmol/L的CYP与细胞共培养24 h);PCB2预处理组(将5μg/mL的PCB2与细胞预处理30 min后加入CYP 50μmol/L共培养24 h);LY294002处理组(先将20μmol/L的LY294002与细胞预处理30 min,然后加入PCB2预处理30 min,后与CYP共培养24 h)。采用CCK-8分析各组细胞活性,采用荧光探针DCFH-DA及流式细胞术检测细胞内ROS水平,通过Hoechst 33342观察细胞核形态变化,采用JC-1检测线粒体膜电位异常,利用Western blot检测Nrf2、HO-1、p-Akt、Akt蛋白表达。结果CYP暴露降低细胞活性(P<0.001),引起线粒体膜电位下降、促使细胞核出现固缩、浓染等凋亡特征,导致ROS产生异常。PCB2预处理提高细胞存活率(P=0.006),改善细胞核形态异常,逆转CYP导致的线粒体膜电位下降,减弱细胞内ROS产生。CYP暴露引起Nrf2核易位,Nrf2、HO-1、p-Akt蛋白表达上调(P<0.001)。PCB2预处理调节Nrf2、HO-1、p-Akt蛋白过度表达。抑制P13K/Akt信号通路消除了PCB2对CYP诱导损伤的保护作用(P<0.05)。结论PCB2通过激活P13K/Akt信号通路,调控Nrf2/ARE通路,减轻CYP所致小鼠大脑皮层神经元氧化损伤。

氯氰菊酯通过抑制Nrf2/ARE信号通路诱导原代C57BL/6小鼠大脑皮层神经元损伤

目的探讨Nrf2/ARE信号通路在CYP诱导的小鼠大脑皮层神经元损伤中的作用及其机制。方法原代培养并鉴定C57BL/6小鼠大脑皮层神经元细胞,建立CYP诱导细胞损伤模型。将不同剂量的CYP(0、25、50、100μmol/L)分别暴露细胞48 h。CCK-8分析CYP对细胞活性的影响、荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧、流式细胞术检测细胞凋亡率,q PCR及Western blotting检测Nrf2及其下游基因HO-1、NQO1的m RNA和蛋白表达。结果与0μmol/L组相比,CYP各剂量组神经元活性均受抑制,随着CYP剂量增加,神经元细胞活性逐渐下降、细胞内ROS随之增加、细胞凋亡率逐渐升高,且CYP剂量越高,神经元损伤程度越严重。与0μmol/L组相比,CYP 50μmol/L组HO-1、NQO1,CYP 100μmol/L组HO-1、NQO1、Nrf2 m RNA及蛋白表达下调(P<0.01)。结论 CYP暴露抑制Nrf2/ARE信号通路,下调Nrf2及其下游基因HO-1、NQO1 m RNA和蛋白表达,诱导神经元细胞氧化损伤和凋亡,CYP对神经元的毒性呈现剂量效应关系。