一种快速简便的多肽基因合成方法

在目前的基因合成中,不管是大的蛋白质基因的合成,还是一小段基因的合成都是采用Khorana等所建立的双链的多片段连接方法,不过因合成仪的使用更多地采用了较长的合成片段(如50聚左右),从而可以减少合成片段的数目和一次能连接成较长的双链,节约了合成的时间。另一个改进的方面是以合成的单链为模板,再用DNA聚合酶来复制得到双链的方法,这不仅大大节省了用于化学合成的消耗,而且也节省了纯化学合成DNA片段的时间。Ita-

天花粉胰蛋白酶抑制剂基因的合成与克隆

天花粉胰蛋白酶抑制剂是从中药天花粉中分离出来的一种新的胰蛋白酶抑制剂,其结构最近被测定为含有三对二硫键的27肽,它也是目前发现的最小的多肽类蛋白酶抑制剂。本文报导了天花粉胰蛋白酶抑制剂基因的合成及克隆。设计的合成基因采用了大肠杆菌偏爱的密码子,全长为108个碱基对,它包括了起始密码子ATG,终止密码子TAG和两端的HindⅢ和BamH Ⅰ的识别顺序。整个基因的合成分为两步,首先用化学方法合成四个DNA片段(F1,38mer;F2,30mer;F3,30mer和F4A,46mer),再经连接酶连接成为两个3′端彼此互补的DNA片段(F1+F2,68mer和F3+F4,76mer),最后从两个互为引物的3′端用Klenow酶聚合补齐得到双链基因。同时,用在基因3′端有两个碱基改变的F4B代替F4A,使基因的终止密码子(TAG)变为甲硫氨酸密码子(ATG),并使基因的阅读框架与质粒pUC19中的LaeZ基因相一致,从而实现该基因与LaeZ基因的融合表达。合成基因经DNA序列分析证明其结构正确。