补肾填精中药血清对去势小鼠骨髓干细胞Wnt/β-catenin成骨分化信号通路的影响

目的探讨补肾填精中药血清对小鼠骨髓干细胞增殖、分化、矿化功能的影响,并检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达,深化"肾主骨、生髓"理论的科学内涵。方法以不同浓度含药血清培养去势小鼠骨髓干细胞,MTT观察细胞增殖,连续培养1周后,检测成骨基因的表达并进行碱性磷酸酶染色,培养28天后茜素红染色观察钙结节的形成,Elisa及Western-blot检测Wnt/β-catenin通路主要信号蛋白β-连环蛋白(β-catenin)、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP-5)、T细胞因子(TCF)的表达水平。结果补肾填精含药血清促进了去势小鼠BMSCs的增殖、成骨基因的表达和钙结节的形成,β-catenin、LRP-5、TCF显著上调。结论补肾填精中药血清促进了小鼠BMSCs的成骨分化与矿化能力,这种促进作用与Wnt/β-catenin信号通路存在密切关系。

富集骨髓干细胞结合β磷酸三钙在脊柱融合的临床应用

目的 探索临床应用富集骨髓干细胞技术复合可降解β磷酸三钙（β—TCP）进行脊柱后路融合的新方法。方法 术前抽取患者髂前上棘骨髓血约250ml离心富集，将富含骨髓干细胞的骨髓血复合β—TCP后回植于患者，进行腰椎后路融合29例。临床功能随访，定期X线摄片、CT检查，评定脊柱融合效果。结果 富集后约获骨髓干细胞悬液（38±14）ml用于回植，富集后骨髓血中的有核细胞含量由原来的（14．72±5．33）×10^9／ml增至（44．63±13．89）×10^9／ml，其中骨髓干细胞数增加约8．25倍。富集骨髓血与多孔β—TCP颗粒复合2h后用于脊柱融合植骨替代。初步随访6～14个月，X线、CT观察脊柱融合良好。结论 应用富集骨髓干细胞结合β—TCP材料，作为植骨补充材料用于脊柱融合，可在术中一期应用，β—TCP降解后形成自体的骨融合。富集技术快速安全无副作用，提高了骨髓成骨的有效成分，有利于复合材料成骨，进行脊柱融合。

距腓前韧带影响踝关节不稳的生物力学研究

目的探究踝关节不稳中距腓前韧带(anterior talofibular ligament,ATFL)的厚度与弹性模量对踝关节稳定性的影响,为踝关节不稳患者的诊断提供参考依据。方法建立踝关节三维有限元模型,改变ATFL的厚度与弹性模量,计算踝关节前后向刚度(ankle anteroposterior stiffness,AAS),并作为量化指标评估踝关节稳定性。结果ATFL厚度在0.78~2.31 mm范围内引起AAS的大幅度变化,且两者关系呈S形曲线;ATFL弹性模量在60~400 MPa变化范围,AAS随韧带弹性模量增加快速上升。结论ATFL厚度与弹性模量均会影响踝关节的稳定性。

股骨颈骨折内固定治疗选择

股骨颈解剖的特殊性和生物力学环境使股骨颈骨折治疗一直比较困难,骨不连和股骨头坏死等并发症更是临床医生和患者面临的巨大挑战。用于手术治疗股骨颈骨折的内置物品种繁多、指征各异,疗效上各有千秋,使用得当方可取得满意效果。为了改善股骨颈骨折治疗效果,需要了解股骨颈骨折内固定发展历史,认识内置物种类,掌握常用内固定的优缺点和适应证,根据骨折位置、骨折线方向、骨折类型、骨质疏松和骨折粉碎程度以及患者综合情况选择内固定技术和内置物。

临床细胞加工与细胞治疗

随着干细胞研究从实验室走向临床,临床细胞加工技术逐步成为热点。起源于造血干细胞移植的细胞加工技术,在发展中对条件与技术的要求越来越严格和规范。该文深入探讨了临床细胞治疗中的常见种类和方法,如应用免疫磁珠筛选外周血CD34-的造血干细胞;通过体外筛选、共培养和纯化技术改良淋巴细胞,防范移植物抗宿主或进行过继免疫治疗血液系统肿瘤或实体瘤;脐血造血干细胞移植的方法和优缺点;骨髓间充质干细胞的富集和体外扩增等加工技术及其诸多临床应用;树突状细胞体外激活后移植治疗肿瘤、胰岛细胞移植治疗Ⅰ型糖尿病、角膜缘干细胞移植修复角膜、神经干细胞移植治疗脑外伤和帕金森等疾病的技术方法和现状。还明确了目前临床细胞治疗的潜力和价值,强调了规范治疗的必要性。

塞来昔布对骨科围手术期镇痛的疗效评估

[目的]观察塞来昔布（西乐葆）对骨科围手术期患者术后镇痛的疗效及安全性。[方法]选择2004～2005年住院手术患者，共64例，随机分组，分别给予西乐葆或镇痛泵进行术后镇痛。西乐葆给药时间：一般于手术前8～12h，即患者手术禁食前首次给药，手术后6h患者可进食后再次给药，手术后3～5d按手术大小及患者疼痛程度决定停药时间。给药剂量：西乐葆首次服用400mg，大手术可加大剂量。观察患者疼痛VAS评分、药物不良反应及患者满意度。[结果]西乐葆的术后镇痛效果与镇痛泵相似，但发生不良反应比及患者总体满意度优于镇痛泵。[结论]西乐葆对手术后镇痛具有满意的疗效及安全性，适合于骨科围手术期术后镇痛。

生物型空心松质骨螺钉的力学强度研究

目的研发生物型空心螺钉并评价其力学性能,为今后经螺钉尾部注射富集骨髓干细胞并经螺钉扩散治疗骨折,特别是促进股骨颈骨折术后骨愈合、预防股骨头坏死提供理论基础。方法对用于股骨颈骨折治疗的内固定TC4钛合金空心松质骨螺钉(直径7.3 mm)进行改良,设计研制封堵尾帽,并在长900 mm的空心松质骨螺钉的螺杆上设计侧孔,侧孔沿螺钉轴线排列,第1侧孔距钉尖20 mm,以后每个侧孔间距10 mm,依次为侧孔0～6个不等。侧孔为0的螺钉作为对照,其余分成平行于孔加力A组和垂直于孔加力B组,应用Instron材料试验机对螺钉进行3点弯曲测试,统计分析侧孔的数量及加压方向与螺钉力学强度的关系。结果 (1)平行于孔加力A组,即当螺钉侧孔方向面对受力方向,侧孔数量为0、1、2个时,螺钉受压应变达到3 mm,最大载荷和弹性模量均没有统计学差异;而当侧孔数量增加至3个以上时,最大载荷和弹性模量均出现明显下降,有统计学意义(P<0.05)。(2)垂直于孔加力B组,即当螺钉侧孔方向垂直于受力方向,侧孔数量为0、1、2个时,螺钉受压应变达到3 mm,最大载荷间没有统计学差异(P>0.05),侧孔数量为0、1、2、3个时,螺钉的弹性模量间没有统计学差异(P>0.05);而当侧孔数量增加时,最大载荷(≧3个侧孔)、弹性模量(≧4个侧孔)均出现明显下降,有统计学意义(P<0.05)。(3)当侧孔数≧3个时,垂直于孔加力组螺钉所能承受的最大载荷和弹性模量均高于同等侧孔数目螺钉受到平行于孔加力时的结果(P<0.05)。结论 (1)直径7.3 mm钛合金空心松质骨螺钉的侧孔数目控制在2个以内,对螺钉的力学性能无明显影响;(2)若螺钉侧孔数≧3个,螺钉侧孔方向垂直于载荷方向较平行于载荷方向,能提供更强的力学性能。本研究为今后生物型空心螺钉的临床开发和使用提供了理论依据和支持。

基于虚拟数字仿真技术的翻转课堂模式在骨科教学中的应用效果

目的探讨基于虚拟数字仿真技术的翻转课堂模式在骨科教学中的应用效果。方法选取2021年7月至12月在上海交通大学医学院附属第九人民医院骨科进行住院医师规范化培训的36名学员作为研究对象,按照工号采用随机数字表法将其分为试验组和对照组,每组各18名。教学内容为骨折手法复位与石膏外固定实训的教学实践。试验组采用基于虚拟数字仿真技术的翻转课堂模式教学,对照组采用传统模式教学。通过问卷调查评估学生对翻转课堂教学模式的接受度,通过随堂测试的考试成绩对教学效果进行评价。结果试验组学员的实践操作能力考试成绩和总成绩高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。试验组提高实践操作能力的满意率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),在增加学习兴趣、提升沟通能力、减轻学习负担、希望本教学模式继续方面,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论相较于传统模式,基于虚拟数字仿真技术的翻转课堂骨科实习教学模式可有效提高学生专科学习的主动性以及专科基础知识及实践技能的掌握。

经皮微创撬拨复位内固定手术治疗跟骨骨折

目的探讨经皮微创撬拨复位内固定手术治疗跟骨骨折的疗效。方法应用经皮撬拨复位+螺钉内固定治疗SandersⅡ、Ⅲ型跟骨骨折13例(14足)。术中侧位透视观察Bhler和Gissane角,Broden位观察后关节面的复位情况。围手术期常规应用抗生素防止感染。结果13例均获随访,时间3～12(5.6±2.0)个月。骨折愈合时间2.5～3.2(2.8±0.3)个月。按Maryland足部评分系统:优9足,良4足,中1足。未发生皮缘坏死、伤口感染及腓肠神经损伤等并发症。结论经皮撬拨复位+螺钉内固定技术,适用于骨折粉碎程度较轻,塌陷不严重的跟骨骨折,尤其是SandersⅡ型。具有术后伤口恢复快、并发症少的优点。

3D打印模型在脊柱外科疾病教学中的应用效果

目的探索3D打印模型在脊柱外科疾病教学中的应用效果。方法选取2015年9月~2018年9月在我院进行住院医师规范化培训的32名学员作为研究对象,采取抽签法将其随机分为实验组和对照组,每组各16名学员。两组教学内容相同,均为住院医师规范化培训教学大纲要求掌握的脊柱疾病。实验组学员采用3D打印模型进行临床带教,对照组学员则采用传统方法带教。比较两组学员的理论考试成绩和教学总满意度。结果实验组学员的理论考试成绩和教学总满意度均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论3D打印模型能有效地提高我院规培学员的理论成绩,改善教学质量,提升教学满意度,效果显著,值得进一步推广。

柴胡皂苷-d促进骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的探讨柴胡皂苷-d(SS-d)对骨肉瘤Saos-2细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响,并探讨其作用机制。方法经不同浓度SS-d处理骨肉瘤Saos-2细胞后,采用八肽胆囊收缩素(CCK-8)法检测骨肉瘤细胞增殖情况,采用流式细胞术检测骨肉瘤细胞凋亡情况,采用Transwell小室法检测骨肉瘤细胞迁移和侵袭能力,最后采用蛋白质免疫印迹(Western blot)法探讨SS-d对核因子-κB(NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的作用及其下游凋亡相关蛋白的影响。结果 SS-d可呈剂量依赖性地明显抑制骨肉瘤Saos-2细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P均<0.05),促进骨肉瘤Saos-2细胞凋亡(P<0.05)。SS-d可抑制p-IκBα和p-p65表达,下调p-Jnk和p-p38表达,进而抑制NF-κB/MAPK信号转导通路激活,促进下游凋亡相关蛋白Bax和裂解活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved caspase)-3表达,减小Bcl-2/Bax比值,促进骨肉瘤Saos-2细胞凋亡。结论 SS-d可明显抑制骨肉瘤Saos-2细胞增殖、迁移和侵袭,促进骨肉瘤Saos-2细胞凋亡。这一现象与SS-d抑制NF-κB/MAPK信号转导通路激活,减小Bcl-2/Bax比值,促进cleaved caspase-3表达有关。

人工关节术后感染的诊断--合适临床方法的选择

目前尚无任何一项临床、实验室或影像学检测指标能成为诊断人工关节术后感染的金标准,根据各种检查的特异性、敏感性不同,组合选择外周血培养、红细胞沉降率(ESR)和C-反应蛋白(CRP)、X线平片、关节穿刺检查、术中病理组织检查、细菌培养、白细胞介素(IL)-6和降钙素原(PCT)、放射性核素显像、人工关节超声裂解液培养及分子生物学检查有助于早期明确诊断。该文对选择合适方法尽早明确诊断临床人工关节术后感染作一综述。

多孔钽植入物在骨缺损中的应用进展

多孔金属钽具有良好的生物相容性与骨传导能力,相比于传统的金属植入物材料有较低的弹性模量与高的摩擦因数,可以避免发生应力遮挡效应且具有与人类松质骨类似的多孔结构。多孔钽的力学性能优势与优秀的生物学性能,在骨修复材料领域受到越来越多的关注,且已研发并应用于多种部位的骨缺损修复中。随着多孔钽材料制备方法的更新与多种改性方法的提出,多孔钽进一步展示了在临床应用中的广阔前景。本文从多孔钽材料的制备工艺、细胞毒性、与骨结合特性以及目前在临床的应用情况等方面,介绍多孔钽植入物在骨缺损中的应用进展,并提出了多孔钽在表面改性建立复合体系、优化制备工艺及个性化制备技术的发展方向,为多孔钽植入物在治疗骨缺损的临床应用提供参考。

距下关节不稳发病机制及诊断研究进展

距下关节是重要的跗骨间关节,其解剖结构、生物力学特点与后足功能密切相关。暴力致后足相关韧带损伤时,常导致踝关节不稳,部分患者亦会同时出现距下关节不稳。但临床上往往只对踝关节不稳较为关注,加之距下关节不稳与踝关节不稳的鉴别存在困难,因而距下关节不稳常被漏诊或误诊,继而影响预后。该文就距下关节不稳发病机制及诊断研究进展进行综述。

应用富集骨髓干细胞技术治疗骨缺损

目的探讨富集骨髓干细胞(bonemarrowstemcells,BMSCs)移植技术促进骨修复的疗效及其影响因素。方法应用富集干细胞技术,在术中完成骨髓血采集、BMSCs富集,通过局部注射或与多孔!-磷酸三钙材料复合后回植,治疗骨缺损患者49例。对富集前后骨髓有核细胞(nucleatedcells,NCs)和碱性磷酸酶染色阳性的细胞集落(colony-formingunitswithalkalinephosphatase+,CFUs/ALP+)计数,分析年龄、性别、病种对骨髓干细胞的影响;通过扫描电镜观察多孔材料与细胞的复合情况;结合影像学检查综合评定疗效。结果平均抽取骨髓血(250±37)ml,经富集技术平均回收(50±19)ml,骨髓成骨源性干细胞回收率78%±18%。其中CFUs/ALP+的自然对数与年龄呈线性负相关(r=-0.4910,P=0.008),NCs与年龄无相关性(r=-0.0469,P=0.8126)。骨髓NCs和CFUs/ALP+的数量无性别差异(t=0.6242,P=0.5397;χ2=2.6512,P=0.1035)。骨折组患者的骨髓CFUs/ALP+数量比退变组多(t=2.2793,P=0.0327),而NCs数量的差异无统计学意义(t=0.7600,P=0.4553)。通过富集,NCs与CFUs/ALP+的增长倍数呈线性正相关(r=0.4054,P=0.0324)。复合2h后,富集BMSCs可在多孔β-磷酸三钙孔内壁贴附。全部病例随访(15.4±6.4)个月,总有效率91.8%。富集血样细菌学检测阴性率100%。术后伤口渗出或肿胀4例,均自行愈合。结论自体富集BMSCs技术是一种快速、简便、安全的临床细胞治疗手段,可与手术同步进行,促进骨修复和再生。年龄、病种因素对BMSCs数量的影响较大。

新型生物复合材料——骨髓干细胞结合多孔磷酸三钙的骨再生

将自体富集骨髓间充质干细胞(MSCs),快速复合多孔β磷酸三钙(β-TCP),构建生物活性复合材料(MSCs/β-TCP)。通过分层随机分组对照比较了MSCs/β-TCP与单纯β-TCP及自体骨在羊腰椎后路融合的效果。测定富集后碱性磷酸酶染色为阳性的细胞集落单位(CFUs/ALP+,即MSCs数量)变化情况。用扫描电镜观察了MSCs与β-TCP短期复合情况。通过X线、CT扫描和组织学观察对比植入材料成骨情况及转归。结果表明,富集后MSCs数量增加约3.9倍,短期复合2 h后MSCs即可在多孔β-TCP内壁黏附;X线检查,MSCs/β-TCP组与自体骨组的融合区逐渐有中高密度影形成,CT扫描测定MSCs/β-TCP组与自体骨组的融合率,分别为92%和100%,明显高于单纯-βTCP组(58%)。硬组织形态计量学证实,复合材料MSCs/-βTCP与自体骨的骨再生能力相当,优于单纯β-TCP材料。

干细胞技术结合新型可降解材料进行腰椎融合的临床研究

目的探索富集骨髓干细胞技术进行腰椎融合治疗脊柱疾病的疗效。方法 腰椎退行性疾患患者56例，根据行下腰椎后路融合手术中植骨融合材料的不同，分为富集骨髓干细胞快速复合多孔β-磷酸三钙（β-TCP）复合材料组（复合材料组，n=30）和自体髂骨植骨组（自体骨组，n=26）。对复合材料组富集前后骨髓体积、有核细胞（NCs）和碱性磷酸酶染色阳性的细胞集落（CFUs／ALP^＋）计数，分析富集效率；结合随访、影像学检查和Oswestry功能评分等综合评定疗效。结果复合材料组术中平均抽取骨髓血（249±31）ml，富集技术平均回收（43±11）ml，NCs由（15．9±3．3）×10^6／ml浓缩至（44．1±10．8）×10^6／ml，富集后CFUs／ALP^＋数量由（118±86）／ml浓缩至（486±305）／ml。临床随访（26．3±7．5）个月。两组中患者的年龄、性别、病种分布及融合节段无显著差异，复合材料组与自体骨组融合率分别为93．3％和96．2％（P〉0．05）。两组手术时间的差异也无统计学意义（P〉0．05）。复合材料组术中患者的总出血量高于自体骨组（P〈0．01），但术中自体血回输可以将接近1／2的术中出血回输给患者。复合材料组术后骨髓采集部无血肿和慢性疼痛，伤口渗出或局部肿胀4例，均自行愈合；而自体骨组术后髂骨采集部血肿（15．4％）和慢性疼痛（26．9％），无伤口渗出的情况。两组间Oswestry功能评分的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论富集骨髓干细胞技术可在术中一期应用，提高骨髓MSCs的浓度，安全、快速。富集骨髓干细胞快速复合多孔β-磷酸三钙后，可作为腰椎后外侧融合的植骨替代品。

新型骨髓干细胞快速筛选-富集-复合系统治疗四肢骨不连

目的探究利用自主创新研发的骨髓干细胞快速筛选一富集．复合系统制备具有生物活性的植骨材料治疗四肢骨不连的临床有效性及安全性。方法对2013年5月至2015年12月收治的24例四肢骨不连患者资料进行回顾性研究，年龄20～65岁，平均42．8岁；其中股骨骨不连17例，胫骨骨不连4例，桡骨骨不连1例，肱骨骨不连1例，腓骨骨不连1例。所有患者均接受富集骨髓干细胞技术治疗，手术同期采集约80mL骨髓血，通过干细胞快速筛选．富集一复合系统于手术同期制备复合骨髓间充质干细胞的β-磷酸三钙颗粒进行植骨。留取富集前、后的骨髓血液进行干细胞计数，术后1、3、6、9个月摄X线片评估骨愈合情况、愈合时间及相关不良反应。结果每次采集骨髓血耗时平均为13．5min，骨髓干细胞富集效率约81．2％，每例患者植入干细胞平均为（11751±1011）个。所有患者术后获9～48个月（平均19．2个月）随访。截止术后9个月，共22例（91．6％）患者获得临床愈合，2例患者由于植骨尚欠足量而愈合不佳，愈合时间平均为6．5个月。所有患者均未出现植入相关感染及内固定失败，取骨髓血区及植骨区域均未出现明显不良反应。结论利用骨髓干细胞快速筛选．富集一复合系统在术中快速制备生物活性植骨材料可有效治疗四肢骨不连，该方法操作快捷、耗时短、创伤小、成骨能力优良，可避免自体骨移植带来的相关并发症。

长期体外培养对人脂肪源性间充质干细胞生物学特性的影响

目的通过观察长期体外培养对人脂肪源性间充质干细胞(ADSCs)生物学特性的影响,鉴定ADSCs作为组织工程种子细胞的优越性。方法通过流式细胞技术观察长期体外培养对人ADSCs表面抗原表达和凋亡的影响。通过碱性磷酸酶染色、Von Kossa染色及RT-PCR检测长期体外培养对人ADSCs成骨分化潜能的影响。结果原代ADSCs表面高表达间充质干细胞表面标记物,而不表达血源性细胞表面标记物,标记物不随传代次数变化。早期ADSCs凋亡率为1%～2%,随传代次数增多凋亡率逐渐增加．但幅度不大。碱性磷酸酶染色、Von Kossa染色和RT-PCR检测显示ADSCs传至第8代时仍能保持成骨分化潜能。结论ADSCs生物学特性稳定,是较为理想的组织工程及再生医学研究的种子细胞。

应用干细胞快速筛选富集技术治疗新鲜骨折骨缺损

目的 介绍利用干细胞快速筛选-富集-复合系统制备活性生物材料的方法,并探讨其治疗新鲜骨折、骨缺损的疗效. 方法 回顾性分析2013年7月至2016年4月期间采用干细胞快速筛选富集技术治疗的22例新鲜骨折、骨缺损患者资料.男16例,女6例;平均年龄为52.2岁（27 ～81岁）;骨折类型：胫骨平台骨折15例,跟骨骨折7例.骨缺损体积平均为12.5 mL.术中利用干细胞快速筛选-富集-复合系统制备生物活性β-磷酸三钙,回植.术后联合影像学、膝关节Lysholm评分标准及足部Maryland评分标准评定疗效. 结果 22例患者术后获平均25.7个月（12 ～46个月）随访.骨髓基质干细胞（BMSCs）富集效率平均达82.4％,富集过程对细胞活力无明显影响.胫骨平台骨折患者平均植入13 381.3个BMSCs,骨折愈合时间平均为8.9周（6～15周）,术后1年膝关节Lysholm评分平均为93.6分（84 ～ 100分）,其中优10例,良4例,可1例;跟骨骨折患者平均植入16 677.7个BMSCs,骨折愈合时间平均为9.4周（8～13周）,术后1年足部Maryland评分平均为93.6分（85 ～98分）,其中优6例,良1例. 结论 干细胞快速筛选-富集-复合系统制备的活性生物材料对新鲜骨折、骨缺损具有较好的修复效果,是一种较好的骨移植材料.