急性死亡猪中猪丹毒杆菌的分离鉴定

本试验从江西省南昌市某规模化猪场送检的2份疑似猪丹毒杆菌引起的急性死亡猪组织中分离出2株可疑菌株,经细菌分离培养、染色镜检、生化试验等实验室诊断,进一步以猪丹毒杆菌16SrRNA的特异性引物进行PCR鉴定,确定2株分离菌为猪丹毒杆菌。然后进行动物致病性试验及药敏试验,并对该厂常用的消毒药进行最小抑菌浓度(MIC)的测定。结果表明,1×108 CFU的剂量可致死小白鼠;分离菌对β-内酰胺类抗菌药高度敏感,对多数抗菌药耐药;该厂常用消毒药的抑菌作用已明显下降。本试验结果对临床防制猪丹毒具有参考意义。

猪源产肠毒素大肠杆菌三重PCR检测方法的建立及应用

为建立一种简单、快速、灵敏、准确的产肠毒素大肠杆菌(ETEC)检测方法,根据产肠毒素大肠杆菌菌毛(K88)和毒素(STa和LT)基因分别设计合成了1对引物,对K88、STa和LT基因扩增条件进行优化,建立了检测K88、STa和LT的三重PCR方法。该方法对K88、STa和LT基因的扩增产物分别为499 bp,190 bp和373 bp;此外,该方法具有良好的灵敏性和特异性。本实验建立的三重PCR方法为致幼畜腹泻ETEC的检测提供了快速准确方法。用所建立的三重PCR方法对实验室从临床腹泻样品中分离的120株大肠杆菌进行检测,结果 9株为K88/LT/STa阳性,14株为K88/LT阳性,21株K88/STa阳性,13株LT/STa阳性,8株K88阳性,2株LT阳性,12株STa阳性。

一起急性死亡母猪中猪丹毒杆菌的分离鉴定及药敏试验

猪丹毒是由猪丹毒杆菌引起的一种急慢性、热性人兽共患病[1]。临床与剖检特征为高热、急性败血症、亚急性疹块性和慢性疣状心内膜炎及多发性非化脓性关节炎[2]。该病呈世界性广泛分布,也为我国主要的猪传染病之一,炎热潮湿季节多发,主要感染3~12月龄猪,发病率一般为10%~15%,严重时死亡率可达50%[3]。2014年7月,江西省抚州市某规模化猪场母猪出现急性死亡情况,病程急,常常无法察觉便病死于栏中。

一起猪链球菌病的临床分离鉴定及诊治

猪链球菌病是由感染溶血性链球菌引起的,此病发病急、病程短、死亡率高,各种年龄和品种的猪都可以发病,临床上常表现为猪急性败血症、脑膜炎、肺炎、淋巴结脓肿、慢性关节炎及心内膜炎等,已成为养猪生产中的常见病和多发病,对养猪业危害很大。

副猪嗜血杆菌OmpP2基因的克隆及生物学信息分析

为了研究副猪嗜血杆菌外膜蛋白OmpP2基因的结构特征及编码蛋白的功能,根据GenBank中HPS OmpP2基因的DNA序列设计引物,以HPS血清13型江西分离株的基因组为DNA模板,利用PCR扩增OmpP2基因,并将其克隆到pMD18-T载体,进行测序及生物信息学分析。结果表明,此序列编码364个氨基酸,与GenBank上登录的OmpP2序列核苷酸同源性为98.7%~100%,其中与湖北F641株的同源性最高,达到100%;蛋白质的分子理论值为39.14ku,理论等电点为9.14;第1位~第20位氨基酸残基组成信号肽,属于分泌型蛋白;所编码的蛋白属于亲水性蛋白,二级结构以无规则卷曲为主。研究获得了HPS OmpP2基因,为今后研究此基因的生物学功能奠定了基础。

猪源停乳链球菌类马亚种的分离与鉴定

从江西省吉安市某规模化养猪场发病仔猪关节液中分离得到1株革兰阳性链球菌,对其进行菌落形态观察、生化鉴定以及16S rRNA序列分子测序鉴定,并构建系统发育树;对分离菌进行药敏试验和健康小鼠的人工感染试验。结果根据分离菌的形态特征、理化特性,结合16S rRNA序列测定与系统发育分析结果,判定为链球菌属的停乳链球菌类马亚种(Streptococcus dysgalactiae subsp.equisimilis),并命名为JXJASD-1株。抗生素药物敏感试验结果表明,分离菌株对阿莫西林、头孢拉定、利福平表现较高的敏感性,对强力霉素、青霉素G中度敏感,而对庆大霉素、卡那霉素、四环素、红霉素、复方新诺明、磺胺异噁唑表现出耐药性;致病性试验结果表明,分离菌株对小鼠有强致病性。本结果将对江西省仔猪停乳链球菌类马亚种病的防治提供指导。

2012～2014年江西地区副猪嗜血杆菌分离株ERIC-PCR指纹图谱分析

在对15种副猪嗜血杆菌血清型参考株鉴定获得15种不同ERIC-PCR指纹的基础上,对2012 - 2014年分离自江西地区41株副猪嗜血杆菌临床分离菌株进行指纹鉴定.结果表明,41株副猪嗜血杆菌产生20种不同的指纹图谱,相同血清型的菌株表现出不同的指纹图谱,无法进行血清分型的副猪嗜血杆菌应用该方法可得到充分区分.该方法证实副猪嗜血杆菌ERIC-PCR指纹图谱存在丰富的多样性,可适用于副猪嗜血杆菌的快速基因分型及分子流行病学调查.

副猪嗜血杆菌外膜蛋白OmpP2的原核表达与鉴定

为获得副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白中的穿孔素前体蛋白P2(Omp P2)基因的表达产物,利用特异性引物以HPS血清13型江西分离株扩增omp P2基因,并将其克隆到p MD18-T载体中进行序列测定和分析。结果表明:omp P2全基因含一个1 092 bp的开放阅读框,编码一个含363个氨基酸的蛋白,与所报道的HPS omp P2基因(登录号:HM172029.1)的同源性为100%。再将其亚克隆于原核表达载体p ET-32a(+)中构建重组表达质粒p ET-32a(+)-omp P2。后转化至受体菌大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG诱导。经SDS-PAGE检测,表达的重组蛋白分子质量与预期的58 ku一致。Western blot分析表明,表达产物与HPS阳性血清能发生反应,显示表达产物具有良好的反应活性。

江西省猪源粪肠球菌毒力基因及耐药性分析

通过选择性培养基、PCR技术分离鉴定粪肠球菌,采用PCR技术检测agg、clyA、efaA、esp、ace和gelE基因,使用K-B法测定分离株对红霉素、多西环素、环丙沙星和氟苯尼考的敏感性。结果共分离并鉴定出226株粪肠球菌。98.23%的粪肠球菌至少携带1种毒力基因,各基因检出率由高到低依次为efaA、ace、gelE、agg、esp和clyA。有75.22%分离株携带3-5种毒力基因。分离株对红霉素和多西环素耐药率较高,分别为97.35%和92.48%,对环丙沙星和氟苯尼考耐药率相对较低,分别为65.04%和61.95%,但没有统计学上的区别。因此,携带毒力基因数的多少与抗菌药物的耐药性之间不存在统计学上的关联。

猪蓝耳病病毒、猪链球菌及副猪嗜血杆菌混合感染的诊治

南昌市某规模化猪场,共饲养母猪200头,哺乳仔猪925头,保育猪572头,育肥猪518头.2015年4月初,场内保育猪群开始发病,约半个月后病情蔓延至哺乳仔猪群.半个月内有近100头保育猪发病,死亡61头,近150头哺乳仔猪发病,死亡90头.仔猪发病率在16％以上,病死率达60％以上.发病期间有10头母猪流产.

副猪嗜血杆菌病的诊断

从江西省抚州市某规模化养猪场病猪肺脏分离到1株革兰阴性长丝状菌,经细菌生化鉴定、PCR检测鉴定为副猪嗜血杆菌。使用KRG方法对其进行血清分型鉴定,该株副猪嗜血杆菌的血清型为13型。抗生素药物敏感试验结果表明,分离菌株对氨苄西林、头孢类、苯唑西林、氯霉素、阿莫西林表现较高的敏感性。对强力霉素、青霉素G中度敏感,而对磺胺类、链霉素、庆大霉素表现出耐药性;致病性试验结果表明,分离菌株对小白鼠有强致病性,命名为JXFZHP01株。本结果为江西副猪嗜血杆菌病的防治提供了理论依据。